金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌及单核细胞增生李斯特菌核酸筛查方法技术

本发明专利技术公开了一种金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌及单核细胞增生李斯特菌核酸筛查方法，属微生物检验领域。利用环介导等温扩增（ＬＡＭＰ）技术来进行，通过使用特异性引物，利用ＬＡＭＰ技术平台扩增靶基因的特定区域，在阳性和阴性质控和内对照检测体系的辅助下，从分子水平对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌及单核细胞增生李斯特菌进行核酸筛查或检测。本发明专利技术的方法具有简便、经济、快速、灵敏和特异的特点，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌及单核细胞增生李斯特菌核酸筛查方法
本专利技术属于微生物检验领域，具体涉及一种基于环介导的等温扩增(LAMP)技术原理而开发的金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌及单核细胞增生李斯特菌核酸筛查方法。
技术介绍
目前金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌及单核细胞增生李斯特菌的检测方法主要是微生物培养鉴定及多重PCR检测技术。(1)细菌培养，结果可信度高，并能做细菌药敏试验，但需时过长，应用受到限制，同时由于金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌及单核细胞增生李斯特菌等危害性大，对实验室安全要求较高，不利于上述细菌的普遍筛查。(2)聚合酶链反应(PCR)，特异性较差，优点是敏感度可达98％～100％.，但是其需要PCR扩增仪、凝胶电泳等相关贵重设备，不利于基层医疗防疫机构及现场快速测定。21世纪初，NotomiT等开发了一种新颖的恒温核酸扩增理论，即所谓的环介导恒温扩增法(Loop-MediatedIsothermalAmplification，LAMP)，其特点是针对靶基因的8/6个区域设计6/4种特异引物，利用一种链置换BstDNA聚合酶在恒温条件(65℃左本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌及单核细胞增生李斯特菌的核酸检测方法，利用环介导等温扩增（ＬＡＭＰ）技术来进行，其特征在于，通过使用特异性引物，利用ＬＡＭＰ技术平台扩增靶基因的特定区域，在阳性和阴性质控和内对照检测体系的辅助下，从分子水平对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌及单核细胞增生李斯特菌进行核酸筛查或检测；所述的金黄色葡萄球菌ｃｌｆＡ基因ＬＡＭＰ检测特异性引物是：　　（ＧｅｎｅＢａｎｋ　ＥＦ２０７７７９）的ＬＡＭＰ反应引物序列组成　　引物　类别　序列组成ＧＣＡＧＧＡＧＧＡ－３’。Ｆ３　前外引物　５’－ＴＣＡＡＣＴＧＡＡＧＣＡＡＣＡＣＣＴ－３’　　Ｂ３　后外引物　５’－ＣＡＧＴ...

【技术特征摘要】
1.一种用于金黄色葡萄球菌的核酸检测方法，仅涉及非诊断目的的筛查，利用环介导等温扩增(LAMP)技术来进行，其特征在于，通过使用特异性引物，利用LAMP技术平台扩增靶基因的特定区域，在阳性和阴性质控和内对照检测体系的辅助下，从分子水平对金黄色葡萄球菌进行核酸筛查或检测；所述的金黄色葡萄球菌clfA基因LAMP检测特异性引物是：(GeneBankEF207779)的LAMP反应引物序列组成2.根据权利要求1所述的用于金黄色葡萄球菌的核酸筛查检测方法，其特征在于利用LAMP技术扩增金黄色葡萄球菌的特定靶核酸序列区域。3.根据权利要求1所述的用于金黄色葡萄球菌的核酸检测方法，其特征在于所述的阴阳性对照检测体系中，阳性对照质控品为相同于扩增细菌靶基因的DNA，阴性对照质控品为不相同于扩增细菌靶基因的DNA，并使用电泳...

【专利技术属性】
技术研发人员：易海华，邵景东，宋阳威，孙立新，钱进，房超，吴萍兰，杨志俊，徐波，孙慧宇，王伟，
申请(专利权)人：中华人民共和国徐州出入境检验检疫局，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]