胶体金免疫层析法检测牛白血病抗体的试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种牛白血病病毒（ＢＬＶ）囊膜糖蛋白ｇｐ５１体外表达、分离纯化，和胶体金免疫层析法检测牛白血病抗体的试纸条及其制备方法。构建重组原核表达载体ｐＥＴ－３２ａ－ｇｐ５１，在大肠杆菌中诱导表达ＧＰ５１重组蛋白，层析法纯化出Ｈｉｓ－ｇｐ５１融合蛋白，将纯化的Ｈｉｓ－ｇｐ５１融合蛋白和羊抗牛ＩｇＧ点样于硝酸纤维膜上，分别作为捕获ＢＬＶ抗体的检测线（Ｔ线）和捕获牛ＩｇＧ的质控线（Ｃ线），将胶体金标记的羊抗牛ＩｇＧ（Ｆｃ）抗体吸附于玻璃纤维制成金标垫，从而组装成胶体金试纸条。根据检测线和质控线是否出现色带来确定血清中是否存在牛白血病抗体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种牛白血病病毒(BLV)囊膜糖蛋白gP51体外表达、分离纯 化，和，属动物检 疫检测技术，主要应用于公共卫生领域。
技术介绍
BLV检测方法主要有病毒直接检测、血清学方法、分子生物学方法以及其 他方法。目前已有的血清学方法主要有琼脂扩散试验(AGID)、间接免疫荧光 试验(IIFA)、补体结合试验(CFA)、放谢免疫试验(RIA)及酶联免疫吸附试 验(ELISA)等。但琼脂扩散试验检测周期稍长， 一般需要一到两天的时间， 而ELISA方法检测速度相对来说较快(需要数小时)，目前使用的检测试剂盒 为美国IDEXX公司生产，但是其价格昂贵，普及使用受到极大的影响，而且需 要酶标仪等仪器设备。BLV感染最常用的检测方法就是血清学方法，虽然这些 方法操作简单，能有效地检测BLV的感染，防止其流行，然而这些方法也存在 着某些不可弥补的局限性，如①在病毒早期阶段不能测出抗体，不能检出早期 感染；②易出现非特异性反应，产生假阳性结果；③由于新生小牛能从母乳中 获得抗体，因此血清学方法不能被动免疫或主动免疫；④检测所需时间较长； ⑤检测费用昂贵等。另外，不同的血清学方法检测BLV阳本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胶体金免疫层析法检测牛白血病抗体的试纸条及其制备方法，包括牛白血病病毒囊膜糖蛋白ｇｐ５１体外表达、分离纯化，和胶体金免疫层析法检测牛白血病抗体的试纸条，其特征是：构建重组原核表达载体ｐＥＴ－３２ａ－ｇｐ５１，在大肠杆菌中诱导表达ＧＰ５１重组蛋白，层析法纯化出Ｈｉｓ－ｇｐ５１融合蛋白，将纯化的Ｈｉｓ－ｇｐ５１融合蛋白和羊抗牛ＩｇＧ点样于硝酸纤维膜上，分别作为捕获ＢＬＶ抗体的检测线（Ｔ线）和捕获牛ＩｇＧ的质控线（Ｃ线），将胶体金标记的羊抗牛ＩｇＧ（Ｆｃ）抗体吸附于玻璃纤维制成金标垫。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：宋阳威，张鑫宇，张常印，孙怀昌，吴亚力，何玲，张敬友，
申请(专利权)人：中华人民共和国徐州出入境检验检疫局，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]