用于治疗眼部疾病的激动性TrkB结合分子制造技术

本发明专利技术涉及激动性TrkB结合分子、用于改善激动性TrkB结合剂的方法、其在医学中的用途、包含所述激动性TrkB结合分子的药物组合物，以及将所述激动性TrkB结合分子、所述药物组合物用作治疗和/或预防眼部疾病的药剂的方法。用作治疗和/或预防眼部疾病的药剂的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗眼部疾病的激动性TrkB结合分子


[0002]本专利技术涉及激动性TrkB结合分子、用于改善激动性TrkB结合剂的方法、用于产生或生成激动性TrkB结合分子的方法、它们在医学中的用途、包含所述激动性TrkB结合分子的药物组合物，以及将所述激动性TrkB结合分子、所述药物组合物用作治疗和/或预防例如眼部疾病的药剂的方法。

技术介绍

[0004]原肌球蛋白受体激酶B(TrkB)又称酪氨酸受体激酶B、或BDNF/NT
‑
3生长因子受体或神经营养酪氨酸激酶受体2型，其是一种在人类中由NTRK2基因(Genbank ID:4915)编码的蛋白质。TrkB是脑源性神经营养因子(BDNF)的受体。
[0005]神经营养酪氨酸激酶受体B(TrkB；基因符号：NTRK2)由视网膜神经元和神经胶质细胞表达。在正常视网膜中，TrkB信号传导抵消细胞应激并促进细胞存活。在患病的眼睛中，如在糖尿病性视网膜病变或地图状萎缩中，发生视网膜神经元和神经胶质细胞的丧失和功能损伤，从而导致视力损伤和视力丧失。激活TrkB信号传导(其在糖尿病性视网膜病变中降低)超过基础水平可以抵消神经元和神经胶质细胞的丧失和功能损伤，从而改善视力功能。此外，TrkB激活有可能使患病眼睛中丧失的突触连接再生，从而促进视力功能的恢复。配体结合后，TrkB经历同二聚化，然后自磷酸化。取决于磷酸化位点(Y516、Y702、Y706、Y707或Y817)，不同的信号转导途径被激活，包括激活PLCγ1或AKT和ERK的不同亚型的活性，这些分子调节诱导轴突/神经突生长、增加突触可塑性或增加细胞存活的不同重叠信号传导级联。
[0006]激动性抗TrkB抗体以及它们在治疗例如腓骨肌萎缩病或糖尿病中的建议用途已在US 20100196390和US 20100150914中描述。
[0007]然而，仍然非常需要新的更有效的激动性分子，其可用于激活TrkB途径并因此允许它们在例如神经变性和精神障碍的治疗性干预中使用。

技术实现思路

[0009]本专利技术基于令人惊讶的发现，即本专利技术的TrkB结合分子中TrkB结合位点(两个scFv)的设计明显支持TrkB结合和激活的最佳空间形成。本专利技术涉及包含两个scFv或由其组成的TrkB结合分子，其中每个scFv特异性结合TrkB并且两者一起充当TrkB激动剂。不希望受到理论束缚，诸位专利技术人认为通过将两个scFv组合成TrkB结合分子，实现了最佳空间形成，从而观察到全部TrkB激动剂活性。
[0010]在第一方面，本专利技术涉及包含两个scFv或由其组成的TrkB结合分子，其中每个scFv特异性结合TrkB。
[0011]在关于第一方面的实施方案中，所述scFv经由铰链区或接头彼此连接。
[0012]在关于第一方面的实施方案中，所述TrkB结合分子呈Fc
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scFv、scFv
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Fc、(scFv
’
)2或scFv
‑
CH3的形式。
[0013]在关于第一方面的实施方案或其任何实施方案中，所述TrkB结合分子还包含Ig分子。进一步关于该实施方案，所述Ig分子为单克隆抗体；人单克隆抗体；人源化单克隆抗体；嵌合抗体；抗体片段，如Fc、Fv、Fab、Fab
’
或F(ab
’
)2片段；单链抗体，如单链可变片段(scFv)；小型模块化免疫药物(SMIP)；结构域抗体；纳米抗体或双抗体。进一步关于这些实施方案，每个scFv融合至所述Ig分子的重链的C末端。进一步关于这些实施方案，每个scFv融合至所述Ig分子的重链的N末端。进一步关于这些实施方案，所述Ig分子为IgG、F(ab)或F(ab
’
)2。进一步关于这些实施方案，所述Ig分子包含Fc区或由其组成。在其他相关的实施方案中，每个scFv通过肽接头、优选具有约4至20个氨基酸的长度的肽接头融合至所述Ig分子。
[0014]在关于第一方面的实施方案或其任何实施方案中，所述两个scFv与相同的表位结合或与不同的表位结合。
[0015]在关于第一方面的实施方案或其任何实施方案中，所述两个scFv各自为TrkB激动剂、优选部分激动剂。
[0016]在关于第一方面的实施方案或其任何实施方案中，所述TrkB结合分子是TrkB激动剂。
[0017]在关于第一方面的实施方案或其任何实施方案中，所述TrkB结合分子是双特异性和四价的。
[0018]在第二方面，本专利技术涉及一种提高激动性TrkB结合剂的功效的方法，其中所述激动性TrkB结合剂含有轻链可变结构域(VL)和重链可变结构域(VH)，(i)用所述激动性TrkB结合剂的VL和VH生成第一单链可变片段(scFv)，(ii)用步骤(i)的所述激动性TrkB结合剂的相同或基本相同的VL和VH或用不同激动性TrkB结合剂的VL和VH生成第二scFv，(iii)将所述第一scFv和所述第二scFv包含在TrkB结合分子中，其中所述TrkB结合分子至少包含来自步骤(i)和(ii)的两个激动性TrkB结合scFv，其中与所述激动性TrkB结合剂的功效相比，所述TrkB结合分子具有更高的功效，以及其中所述功效是如通过将稳定表达TrkB受体的CHO细胞与所述激动性TrkB结合剂或所述TrkB结合分子一起孵育并测量所处理的CHO细胞的细胞裂解物中Y706/707处的TrkB磷酸化确定的最大反应。
[0019]在关于第二方面的实施方案或其任何实施方案中，所述激动性TrkB结合剂是部分激动剂。
[0020]在关于第二方面的实施方案或其任何实施方案中，与所述激动性TrkB结合剂的功效相比，所述TrkB结合分子的功效高出至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
[0021]在关于第二方面的实施方案或其任何实施方案中，所述TrkB结合分子的功效为BDNF功效的约至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
[0022]在关于第二方面的实施方案或其任何实施方案中，其中所述两个激动性TrkB结合scFv与相同的表位结合或与不同的表位结合。
[0023]在关于第二方面的实施方案或其任何实施方案中，所述两个激动性TrkB结合scFv
是相同的。
[0024]在关于第二方面的实施方案或其任何实施方案中，所述scFv经由铰链区或接头彼此连接。
[0025]在关于第二方面的实施方案或其任何实施方案中，所述TrkB结合分子呈Fc
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scFv、scFv
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Fc、(scFv
’
)2或scFv
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CH3的形式。
[0026]在关于第二方面的实施方案或其任何实施方案中，所述TrkB结合分子还包含Ig分子。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含两个scFv或由其组成的TrkB结合分子，其中每个scFv特异性结合TrkB。2.根据权利要求1所述的TrkB结合分子，其中所述scFv经由铰链区或接头彼此连接。3.根据权利要求1所述的TrkB结合分子，其中所述TrkB结合分子呈Fc
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scFv、scFv
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Fc、(scFv
’
)2或scFv
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CH3的形式。4.根据权利要求1所述的TrkB结合分子，其进一步包含Ig分子。5.根据权利要求4所述的TrkB结合分子，其中所述Ig分子为单克隆抗体；人单克隆抗体；人源化单克隆抗体；嵌合抗体；抗体片段，如Fc、Fv、Fab、Fab
’
或F(ab
’
)2片段；单链抗体，如单链可变片段(scFv)；小型模块化免疫药物(SMIP)；结构域抗体；纳米抗体；或双抗体。6.根据权利要求4或5所述的TrkB结合分子，其中每个scFv融合至所述Ig分子的重链的C末端。7.根据权利要求4或5所述的TrkB结合分子，其中每个scFv融合至所述Ig分子的重链的N末端。8.根据权利要求4所述的TrkB结合分子，其中所述Ig分子为IgG、F(ab)或F(ab
’
)2。9.根据权利要求4所述的TrkB结合分子，其中所述Ig分子包含Fc区或由其组成。10.根据权利要求4所述的TrkB结合分子，其中每个scFv通过肽接头、优选具有约4至20个氨基酸的长度的肽接头融合至所述Ig分子。11.根据权利要求1至10中任一项所述的TrkB结合分子，其中所述两个scFv与相同的表位结合或与不同的表位结合。12.根据权利要求1至11中任一项所述的TrkB结合分子，其中所述两个scFv各自是TrkB激动剂、优选部分激动剂。13.根据权利要求1至12中任一项所述的TrkB结合分子，其中所述TrkB结合分子是TrkB激动剂。14.根据权利要求1至13中任一项所述的TrkB结合分子，其中所述TrkB结合分子是双特异性和四价的。15.一种提高激动性TrkB结合剂的功效的方法，其中所述激动性TrkB结合剂含有轻链可变结构域(VL)和重链可变结构域(VH)，(i)用所述激动性TrkB结合剂的VL和VH生成第一单链可变片段(scFv)，(ii)用步骤(i)的所述激动性TrkB结合剂的相同或基本相同的VL和VH或用不同激动性TrkB结合剂的VL和VH生成第二scFv，(iii)将所述第一scFv和所述第二scFv包含在TrkB结合分子中，其中所述TrkB结合分子至少包含来自步骤(i)和(ii)的两个激动性TrkB结合scFv，其中与所述激动性TrkB结合剂的功效相比，所述TrkB结合分子具有更高的功效，以及其中所述功效是如通过将稳定表达TrkB受体的CHO细胞与所述激动性TrkB结合剂或所述TrkB结合分子一起孵育并测量所处理的CHO细胞的细胞裂解物中Y706/707处的TrkB磷酸化确定的最大反应。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述激动性TrkB结合剂为部分激动剂。17.根据权利要求15所述的方法，其中与所述激动性TrkB结合剂的功效相比，所述TrkB结合分子的功效高出至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
18.根据权利要求15至17中任一项所述的方法，其中所述TrkB结合分子的功效为BDNF功效的约至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。19.根据权利要求15所述的方法，其中所述两个激动性TrkB结合scFv与相同的表位结合或与不同的表位结合。20.根据权利要求15所述的方法，其中所述两个激动性TrkB结合scFv是相同的。21.根据权利要求15所述的方法，其中所述scFv经由铰链区或接头彼此连接。22.根据权利要求21所述的方法，其中所述TrkB结合分子呈Fc
‑
scFv、scFv
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Fc、(scFv
’
)2或scFv
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CH3的形式。23.根据权利要求15所述的方法，其中所述TrkB结合分子还包含Ig分子。24.根据权利要求23所述的方法，其中所述Ig分子为单克隆抗体；人单克隆抗体；人源化单克隆抗体；嵌合抗体；抗体片段，如Fv、Fab、Fab
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或F(ab
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)2片段；单链抗体，如单链可变片段(scFv)；小型模块化免疫药物(SMIP)；结构域抗体；纳米抗体；或双抗体。25.根据权利要求23所述的方法，其中每个scFv融合至所述Ig分子的重链的C末端。26.根据权利要求23所述的方法，其中每个scFv融合至所述Ig分子的重...

【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：勃林格殷格翰国际有限公司，
类型：发明
国别省市：