酮还原酶多肽及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，特别是生物制药及生物转化领域，更为具体的说是涉及酮还原酶多肽及其应用

【技术实现步骤摘要】
酮还原酶多肽及其应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，特别是生物制药及生物转化领域，更为具体的说是涉及酮还原酶多肽及其应用
。

技术介绍

[0002]酮还原酶
(keto reductase
，简称
KRED)
可以将底物羰基化合物不对称还原，得到手性醇产物
。
相比于化学法等工业化制备方法，酶催化法具有绿色环保等优势，因此，在手性醇化合物的合成中，酶催化法一直是业内研究的热点问题
。
[0003]但是，针对不同的手性醇目标产物，需要开发适合于该目标产物的生物法合成酶，该酶不仅要满足工业化生产需要的成本低
、
转化率高
、
选择性好等优势，而且更为优选的是该酶还应具有活性高
、
用量少
、
专一性强等优点
。
因此，针对某一目标产物，选择
、
优化酮还原酶就成为本领域技术人员研究的难点问题
。
[0004]孟鲁斯特
(Motelukast
，
CAS
号
158966
‑
92
‑
8)
，商品名为顺尔宁，是一种选择性白三烯受体拮抗剂
(LTRA)
，是治疗过敏性哮喘和运动性哮喘的最佳选择，并且孟鲁斯特也在抗炎，免疫等诸多方面也有重要的应用价值，具有广阔的应用前景
。
[0005]在孟鲁斯特的合成中有一个重要的中间体化合物
(S,E)
‑
甲基
‑2‑
[3
‑
[3
‑
(2(7
‑
氯喹啉基
‑2‑
基
)
乙烯基
]苯基
]‑3‑
羟基丙基
]苯甲酸叔丁酯
(
分子式
C
28
H
24
NO3Cl
，分子量
457.96
，
CAS
号
142569
‑
69
‑
5)
，该化合物3位手性羟基的高效合成是本领域技术人员，特别是工业化合成孟鲁斯特研究开发领域技术人员研究的重点问题和难点问题
。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种酮还原酶多肽，该酶能够用于制备手性醇化合物
(S,E)
‑
甲基
‑2‑
[3
‑
[3
‑
(2(7
‑
氯喹啉基
‑2‑
基
)
乙烯基
]苯基
]‑3‑
羟基丙基
]苯甲酸叔丁酯，并且进一步提供该酮还原酶多肽在工业化合成手性醇化合物
(S,E)
‑
甲基
‑2‑
[3
‑
[3
‑
(2(7
‑
氯喹啉基
‑2‑
基
)
乙烯基
]苯基
]‑3‑
羟基丙基
]苯甲酸叔丁酯中的应用方法，包括合成该酮还原酶多肽的基因，含有该基因的重组表达载体，包含该重组表达载体的工程菌及工程菌制备方法，以及使用酮还原酶多肽制备手性醇化合物
(S,E)
‑
甲基
‑2‑
[3
‑
[3
‑
(2(7
‑
氯喹啉基
‑2‑
基
)
乙烯基
]苯基
]‑3‑
羟基丙基
]苯甲酸叔丁酯的工艺方法
。
[0007]为了解决上述技术问题，本专利技术首先公开一种酮还原酶多肽，所述的酮还原酶多肽的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：2所示
。
[0008]进一步地，本专利技术还公开了一种酮还原酶多肽，所述的酮还原酶多肽的氨基酸序列与
SEQ ID
：2所示的氨基酸序列在
X145、X147、X153
三个残基位点至少存在一个突变差异所形成的单突变体或多突变体
。
也就是说，所述酮还原酶多肽的氨基酸序列与
SEQ ID
：2所示的氨基酸序列相比，存在
X145
残基差异，或者存在
C147
残基差异，或者存在
X153
残基差异，或者存在
X145
与
X147
残基差异，或者存在
X145
与
X153
残基差异，或者存在
X145、X147
和
X153
残基差异，从而获得的
145、147、153
几个位点的单突变体或多突变体
。
[0009]进一步优选地，所述酮还原酶多肽的氨基酸序列如
SEQ ID NO.4
，
SEQ ID NO.6
，
SEQ ID NO.8
，
SEQ ID NO.10
，
SEQ ID NO.12
，
SEQ ID NO.14
，
SEQ ID NO.16
，
SEQ ID NO.18
，
SEQ ID NO.20
，
SEQ ID NO.22
，
SEQ ID NO.24
所示
。
[0010]同时，本专利技术还公开了核苷酸序列
SEQ ID NO
：1，所述核苷酸序列编码
SEQ ID NO
：2所示的酮还原酶多肽
。
[0011]进一步优选地，在本专利技术中还公开了用于编码
SEQ ID NO.4
，
SEQ ID NO.6
，
SEQ ID NO.8
，
SEQ ID NO.10
，
SEQ ID NO.12
，
SEQ ID NO.14
，
SEQ ID NO.16
，
SEQ ID NO.18
，
SEQ ID NO.20
，
SEQ ID NO.22
，
SEQ ID NO.24
的核苷酸序列，分别为
SEQ ID NO
：3，
SEQ ID NO
：5，
SEQ ID NO
：7，
SEQ ID NO.9
，
SEQ ID NO.11
，
SEQ ID NO.13
，
SEQ ID NO.15
，
SEQ ID NO.17<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
酮还原酶多肽，其特征在于：所述的酮还原酶多肽的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：2所示
。2.
一种酮还原酶多肽，其特征在于：所述的酮还原酶多肽的氨基酸序列与
SEQID
：2所示的氨基酸序列在
X145、X147、X153
三个残基位点至少存在一个突变差异所形成的单突变体或多突变体
。3.
根据权利要求2所述的酮还原酶多肽，其特征在于：所述酮还原酶多肽的氨基酸序列如
SEQ ID NO.4
，
SEQ ID NO.6
，
SEQ ID NO.8
，
SEQ ID NO.10
，
SEQ ID NO.12
，
SEQ ID NO.14
，
SEQ ID NO.16
，
SEQ ID NO.18
，
SEQ ID NO.20
，
SEQ ID NO.22
，
SEQ ID NO.24
所示
。4.
一种多核苷酸，所述多核苷酸序列如
SEQ ID NO
：1所示，所述多核苷酸编码权利要求1中所述的
SEQ ID NO
：2所示的酮还原酶多肽
。5.
编码权利要求3所述的多肽的多核苷酸，其特征在于：用于编码
SEQ ID NO.4
，
SEQ ID NO.6
，
SEQ ID NO.8
，
SEQ ID NO.10
，
SEQ ID NO.12
，
SEQ ID NO.14
，
SEQ ID NO.16
，
SEQ ID NO.18
，
SEQ ID NO.20
，
SEQ ID NO.22
，
SEQ ID NO.24
的多核苷酸，其核苷酸序列分别为如
SEQ ID NO
：3，
SEQ ID NO
：5，
SEQ ID NO
：7，
SEQ ID NO.9
，
SEQ ID NO.11
，
SEQ ID NO.13
，
SEQ ID NO.15
，
SEQ ID NO.17
，
SEQ ID NO.19
，
SEQ ID NO.21
，
SEQ ID NO....

【专利技术属性】
技术研发人员：朱永强，刘建锋，史赟，周慧，石利平，尹强，杨莹，刘宗军，
申请(专利权)人：宿迁阿尔法科技有限公司，
类型：发明
国别省市：