一种甲钴胺片有关物质的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种甲钴胺片有关物质的测定方法，涉及药物检测分析技术领域，使用磷酸盐缓冲液作为稀释剂，依次制备供试品溶液

【技术实现步骤摘要】
一种甲钴胺片有关物质的测定方法


[0001]本专利技术涉及药物检测分析
，具体涉及一种甲钴胺片有关物质的测定方法
。

技术介绍

[0002]甲钴胺是一种内源性的辅酶
B12
，主要存在于动物的血液
、
髓液中，可用于缺乏维生素
B12
引起的巨幼红细胞性贫血和治疗周围神经病，具有促进叶酸利用
、
核酸代谢
、
轴突运输和再生的作用，同时抑制神经退变
。
甲钴胺比氰钴胺易于进入神经元细胞器，参与脑细胞和脊髓神经元胸腺嘧啶核苷的合成，促进叶酸的利用和核酸代谢，且促进核酸和蛋白质合成作用较氰钴胺强，临床利用价值较高
。
[0003]经调研，目前国内的甲钴胺制剂主要以片剂和胶囊剂为主，由于甲钴胺自身化学性质的不稳定，使得甲钴胺在强光下会降解生产羟钴胺
。
同时在高温条件下，甲钴胺也不稳定
。
目前
JP18
，
USP2023
及
ChP2020
均收载了甲钴胺片的质量标准，但是仅
ChP2020
对有关物质进行了控制，且制定的标准范围较宽，单杂
≤1.0
％，总杂
≤3.0
％，未将羟钴胺作为特定杂质控制，因此甲钴胺产品的质量控制存在一定的风险
。
[0004]综上所述，目前的甲钴胺片有关物质的测定方法存在制定的标准范围较宽
、
未将羟钴胺作为特定杂质控制
、
产品质量控制存在一定的风险的问题
。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是目前的甲钴胺片有关物质的测定方法存在制定的标准范围较宽
、
未将羟钴胺作为特定杂质控制
、
产品质量控制存在一定的风险的问题，目的在于提供一种甲钴胺片有关物质的测定方法，解决了目前的甲钴胺片有关物质的测定方法存在制定的标准范围较宽
、
未将羟钴胺作为特定杂质控制
、
产品质量控制存在一定的风险的问题
。
[0006]本专利技术通过下述技术方案实现：
[0007]本申请提供一种甲钴胺片有关物质的测定方法，包括以下步骤：
[0008](1)
制备磷酸盐缓冲液作为稀释剂；
[0009](2)
制备供试品溶液；
[0010](3)
使用供试品溶液制备对照溶液；
[0011](4)
使用对照溶液制备系统适用性溶液；
[0012](5)
使用高效液相色谱法测定甲钴胺片杂质含量；
[0013](6)
计算供试品中杂质的含量
。
[0014]目前的甲钴胺片有关物质的测定方法中的供试品溶液存在羟钴胺向氰钴胺转化的现象，由于羟钴胺在水溶液中能够快速的与游离的氰根结合生成无毒的氰钴胺，而
ChP2020
中甲钴胺片有关物质供试品溶液配制所用溶剂为流动相，流动相中含有
16
％的乙腈，乙腈会促使羟钴胺向氰钴胺转化，用流动相作溶剂不合适，专利技术人研究了不同溶剂对溶
液稳定性的影响，发现仅使用磷酸二氢钾溶液可以减少溶液中羟钴胺向氰钴胺转化，保证了样品溶液的稳定性
。
[0015]本申请中提出的甲钴胺片有关物质的测定方法的专属性强
、
灵敏度和准确度高
、
溶液的稳定性好，同时将羟钴胺作为特定杂质进行了控制，能更好的控制产品的质量
。
[0016]进一步的，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸二氢钾
、
磷酸二氢钠中的任意一种或两种的组合
。
[0017]进一步的，所述磷酸盐缓冲液的浓度为
0.02
～
0.04mol/L
，
pH
值为
3.5
～
5.5。
[0018]进一步的，制备供试品溶液的方法为：将甲钴胺片放入棕色瓶中，再加入稀释剂使甲钴胺片溶解，然后进行过滤后得到的滤液即为供试品溶液
。
[0019]进一步的，制备对照溶液的方法为：将供试品溶液使用流动相进行稀释；所述流动相为磷酸盐溶液
。
[0020]进一步的，制备系统性溶液的方法为：先向对照溶液中加入盐酸溶液，避光放置1小时后，加入氢氧化钠溶液，摇匀，在自然光下放置5分钟；所述盐酸溶液的用量和浓度与氢氧化钠溶液的相同
。
[0021]进一步的，测定甲钴胺片杂质含量的方法为：精密量取系统适用性溶液
、
对照溶液
、
供试品溶液，分别注入液相色谱仪中，记录色谱图
。
[0022]进一步的，供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，羟钴胺不得大于对照溶液主峰面积的
0.5
倍，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的
0.5
倍，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的
2.0
倍
。
[0023]进一步的，色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相
A
为磷酸盐缓冲液，流动相
B
为乙腈，梯度洗脱；流速为
0.8
～
1.2ml/min
；检测波长为
335nm
～
350nm
；柱温为
40℃
；进样体积为
20
μ
l。
[0024]进一步的，梯度洗脱的方法为：0～
5min
，流动相
A
的比例为
90
％，流动相
B
的比例为
10
％；5～
7min
，流动相
A
的比例由
90
％降至
84
％，流动相
B
的比例由
10
％升至
16
％；7～
55min
，流动相
A
的比例为
84
％，流动相
B
的比例为
16
％，
55
～
55.1min
，流动相
A
的比例由
84
％升至
90
％，流动相
B
的比例由
16
％降至
10
％；
55.1
～
65min
，流动相
A
的比例为
90
％，流动相
B
的比例为
10
％
。
[0025]本申请中采用梯度洗脱的方法，有效的解决了辅料干扰杂质检测的问题
。
[0026]本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)
制备磷酸盐缓冲液作为稀释剂；
(2)
制备供试品溶液；
(3)
使用供试品溶液制备对照溶液；
(4)
使用对照溶液制备系统适用性溶液；
(5)
使用高效液相色谱法测定甲钴胺片杂质含量；
(6)
计算供试品中杂质的含量；所述稀释剂包括磷酸盐缓冲液
。2.
根据权利要求1所述的一种甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸二氢钾
、
磷酸二氢钠中的任意一种或两种的组合
。3.
根据权利要求1所述的一种甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的浓度为
0.02
～
0.04mol/L
，
pH
值为
3.5
～
5.5。4.
根据权利要求1所述的一种甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于，制备供试品溶液的方法为：将甲钴胺片放入棕色瓶中，再加入稀释剂使甲钴胺片溶解，然后进行过滤后得到的滤液即为供试品溶液
。5.
根据权利要求1所述的一种甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于，制备对照溶液的方法为：将供试品溶液使用流动相进行稀释；所述流动相为磷酸盐溶液
。6.
根据权利要求1所述的一种甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于，制备系统性溶液的方法为：先向对照溶液中加入盐酸溶液，避光放置1小时后，加入氢氧化钠溶液，摇匀，在自然光下放置5分钟；所述盐酸溶液的用量和浓度与氢氧化钠溶液的相同
。7.
根据权利要求1所述的一种甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于，测定甲钴胺片杂质含量的方法为：精密量取系统适用性溶液
、
对照溶液
、
供试品溶液，分别注入液相色谱仪中，记录色谱图
。8.
根据权利要求7所述的一种甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于，供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，羟钴胺不得大于对照溶液主峰面积的
0.5
倍，其他...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋达博，史凌洋，刘冬丹，范伟川，李剑嵬，李永东，谢雷，廖号兵，
申请(专利权)人：成都通德药业有限公司，
类型：发明
国别省市：