具有双向信号传导活性的嵌合跨膜蛋白制造技术

本文披露了编码改善的免疫治疗剂的多核苷酸和载体，由这些多核苷酸和/或载体编码的多肽，表达这些多肽的细胞，以及包含这些多核苷酸、载体、多肽和/或细胞的药物组合物。多肽和/或细胞的药物组合物。多肽和/或细胞的药物组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有双向信号传导活性的嵌合跨膜蛋白
专利技术背景
[0001]工程改造的细胞在研究性应用和治疗性应用方面都具有巨大的潜力
。
然而，尽管加大了生产新的和更先进的工程改造的细胞的努力，但仍然存在许多挑战，限制了工程改造的细胞生产的效率和治疗用途的功效
。

技术实现思路

在一个方面，提供了编码异二聚体受体的每个单体的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含插入在编码每个所述单体的核酸之间的至少一个编码除所述单体以外的多肽的核酸，并且其中所述核酸可操作地连接至相同的启动子序列
。
在实施例中，启动子序列选自以下各项的组：
EF1
α
、MSCV、EF1
α
‑
HTLV
‑1杂合启动子
、
莫洛尼鼠白血病病毒
(MoMuLV
或
MMLV)、
长臂猿白血病病毒
(GALV)、
鼠乳腺肿瘤病毒
(MuMTV
或
MMTV)、
劳斯肉瘤病毒
(RSV)、MHC II
类
、
凝血因子
IX、
胰岛素启动子
、PDX1
启动子
、CD11、CD4、CD2、gp47
启动子
、PGK、
β
‑
球蛋白
、UbC
和
MND。
在实施例中，多核苷酸包含插入这些核酸中每一个之间的核苷酸序列，其促进这些核酸的共表达
。
在实施例中，促进核酸共表达的核苷酸序列编码
2A
自切割肽或者是
IRES
序列
。
在实施例中，
2A
自切割肽选自
T2A、P2A、E2A
或
F2A
肽
。
在实施例中，多核苷酸是三顺反子或四顺反子
。
在实施例中，异二聚体受体是外源抗原识别受体
。
在实施例中，外源抗原识别受体选自
B
细胞受体重链和轻链异二聚体
、Toll
样受体1和2异二聚体
、
吞噬受体
Mac
‑
1、CD94NKG2C
或
NKG2E
受体
、T
细胞受体
、
αβ
T
细胞受体
、
γδ
T
细胞受体及其功能片段在实施例中，外源抗原识别受体是
αβ
T
细胞受体
、
γδ
T
细胞受体或其功能片段
。
在实施例中，多核苷酸包含
A、B、C
或
D
，其中：
(A)
是由
(i)
‑
(ii)
‑
(iii)
表示的核酸，其中：
(i)
是编码
αβ
T
细胞受体的
α
链或其功能片段的核酸，
(ii)
是至少一个编码
αβ
T
细胞受体的
α
链或
β
链或其功能片段以外的多肽的核酸，以及；
(iii)
是编码
αβ
T
细胞受体的
β
链或其功能片段的核酸，其中
(ii)
插入在
(i)
和
(iii)
之间
(B)
是由
(iv)
‑
(v)
‑
(vi)
表示的核酸，其中：
(iv)
是编码
αβ
T
细胞受体的
β
链或其功能片段的核酸，
(v)
是至少一个编码
αβ
T
细胞受体的
α
链或
β
链或其功能片段以外的多肽的核酸，以及；
(vi)
是编码
αβ
T
细胞受体的
α
链或其功能片段的核酸，其中
(v)
插入在
(iv)
和
(vi)
之间
(C)
是由
(vii)
‑
(viii)
‑
(ix)
表示的核酸，其中：
(vii)
是编码
γδ
T
细胞受体的
γ
链或其功能片段的核酸，
(viii)
是至少一个编码
γδ
T
细胞受体的
γ
或
δ
链或其功能片段以外的多肽的核酸，以及；
(ix)
是编码
γδ
T
细胞受体的
δ
链或其功能片段的核酸，其中
(viii)
插入在
(vi)
和
(ix)
之间
(D)
是由
(x)
‑
(xi)
‑
(xii)
表示的核酸，其中：
(x)
是编码
γδ
T
细胞受体的
δ
链或其功能片段的核酸，
(xi)
是至少一个编码
γδ
T
细胞受体的
γ
或
δ
链或其功能片段以外的多肽的核酸，以及；
(xii)
是编码
γδ
T
细胞受体的
γ
链或其功能片段的核酸，其中
(xi)
插入在
(x)
和
(xii)
之间在实施例中，
A、B、C
和
/
或
D
使得：
‑
(i)
和
(vi)
是包含编码多肽的核苷酸序列的核酸，该多肽与选自
SEQ ID NO
：
199、210、214、216、218
和
220
，优选选自
SEQ ID NO
：
210、216
和
220
的氨基酸序列具有至少
60
％
、70
％
、80
％
、90
％
、95
％或
100
％同一性或相似性，和
/
或；
‑
(iii)
和
(iv)
是包含编码多肽的核苷酸序列的核酸，该多肽与选自
SEQ ID NO
：
198、211、215、217、219
和...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种编码异二聚体受体的每个单体的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含插入在编码每个所述单体的核酸之间的至少一个编码除所述单体以外的多肽的核酸，并且其中所述核酸可操作地连接至相同的启动子序列
。2.
如权利要求1所述的多核苷酸，其中所述启动子序列选自以下各项的组：
EF1
α
、MSCV、EF1
α
‑
HTLV
‑1杂合启动子
、
莫洛尼鼠白血病病毒
、
长臂猿白血病病毒
、
鼠乳腺肿瘤病毒
、
劳斯肉瘤病毒
、MHCII
类
、
凝血因子
IX、
胰岛素启动子
、PDX1
启动子
、CD11、CD4、CD2、gp47
启动子
、PGK、
β
‑
球蛋白
、UbC
和
MND
，优选来自
MSCV、MMLV、EF1
α
和
MND。3.
如权利要求1或2所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含插入这些核酸中每一个之间的核苷酸序列，该核苷酸序列促进这些核酸的共表达
。4.
如权利要求3所述的多核苷酸，其中所述核苷酸序列是编码
2A
自切割肽的序列或者是
IRES
序列
。5.
如权利要求4所述的多核苷酸，其中所述
2A
自切割肽选自
T2A、P2A、E2A
或
F2A
肽
。6.
如权利要求1‑5中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸是三顺反子或四顺反子
。7.
如权利要求1‑6中任一项所述的多核苷酸，其中所述异二聚体受体是外源抗原识别受体
。8.
如权利要求7所述的多核苷酸，其中所述外源抗原识别受体选自
B
细胞受体重链和轻链异二聚体
、Toll
样受体1和2异二聚体
、
吞噬受体
Mac
‑
1、CD94 NKG2C
或
NKG2E
受体
、T
细胞受体
、
αβ
T
细胞受体
、
γδ
T
细胞受体及其功能片段
。9.
如权利要求8所述的多核苷酸，其中该外源抗原识别受体是
αβ
T
细胞受体
、
γδ
T
细胞受体或其功能片段
。10.
如权利要求9所述的多核苷酸，其包含
A、B、C
或
D
，其中：
(A)
是由
(i)
‑
(ii)
‑
(iii)
表示的核酸，其中：
(i)
是编码
αβ
T
细胞受体的
α
链或其功能片段的核酸，
(ii)
是至少一个编码
αβ
T
细胞受体的
α
链或
β
链或其功能片段以外的多肽的核酸，以及；
(iii)
是编码
αβ
T
细胞受体的
β
链或其功能片段的核酸，其中
(ii)
插入在
(i)
和
(iii)
之间
(B)
是由
(iv)
‑
(v)
‑
(vi)
表示的核酸，其中：
(iv)
是编码
αβ
T
细胞受体的
β
链或其功能片段的核酸，
(v)
是至少一个编码
αβ
T
细胞受体的
α
链或
β
链或其功能片段以外的多肽的核酸，以及；
(vi)
是编码
αβ
T
细胞受体的
α
链或其功能片段的核酸，其中
(v)
插入在
(iv)
和
(vi)
之间
(C)
是由
(vii)
‑
(viii)
‑
(ix)
表示的核酸，其中：
(vii)
是编码
γδ
T
细胞受体的
γ
链或其功能片段的核酸，
(viii)
是至少一个编码
γδ
T
细胞受体的
γ
或
δ
链或其功能片段以外的多肽的核酸，以及；
(ix)
是编码
γδ
T
细胞受体的
δ
链或其功能片段的核酸，其中
(viii)
插入在
(vi)
和
(ix)
之间
(D)
是由
(x)
‑
(xi)
‑
(xii)
表示的核酸，其中：
(x)
是编码
γδ
T
细胞受体的
δ
链或其功能片段的核酸，
(xi)
是至少一个编码
γ
ST
细胞受体的
γ
或
δ
链或其功能片段以外的多肽的核酸，以及；
(xii)
是编码
γδ
T
细胞受体的
γ
链或其功能片段的核酸，其中
(xi)
插入在
(x)
和
(xii)
之间
。11.
如权利要求
10
所述的多核苷酸，其中：
‑
(i)
和
(vi)
是包含编码多肽的核苷酸序列的核酸，该多肽与选自
SEQ ID NO
：
199、210、214、216、218
和
220
，优选选自
SEQ ID NO
：
210、216
和
220
的氨基酸序列具有至少
60
％
、70
％
、80
％
、90
％
、95
％或
100
％同一性或相似性，和
/
或；
‑
(iii)
和
(iv)
是包含编码多肽的核苷酸序列的核酸，该多肽与选自
SEQ ID NO
：
198、211、215、217、219
和
221
，优选选自
SEQ ID NO
：
211、217
和
221
的氨基酸序列具有至少
60
％
、70
％
、80
％
、90
％
、95
％或
100
％同一性或相似性，和
/
或；
‑
(vii)
和
(xii)
是包含编码多肽的核苷酸序列的核酸，该多肽与选自
SEQ ID NO
：
85、86、87、89、91、93、94、95、96、101、104、106、108、110、112、113、115、117、119、121、123、125、127、129、130
和
132
，优选选自
SEQ ID NO
：
85、86、87、94、95、96、101、113、115、117、119、127
和
130
的氨基酸序列具有至少
60
％
、70
％
、80
％
、90
％
、95
％或
100
％同一性或相似性，和
/
或；
‑
(ix)
和
(x)
是包含编码多肽的核苷酸序列的核酸，该多肽与选自
SEQ ID NO
：
82、83、84、88、90、92、97、98、99、100、102、103、105、107、109、111、114、116、118、120、122、124、126、128、131
和
133
，优选选自
SEQ ID NO
：
82、83、84、97、98、99、100、102、114、116、118、126
和
131
的氨基酸序列具有至少
60
％
、70
％
、80
％
、90
％
、95
％或
100
％同一性或相似性
。12.
如权利要求1‑
11
中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含插入在编码每个受体单体的核酸之间的核酸，该插入在编码每个受体单体的核酸之间的核酸编码能够转导至少两个胞内信号的嵌合双向信号传导跨膜蛋白，所述蛋白包含：
‑
胞外配体结构域，该胞外配体结构域能够与该胞外配体结构域的相互作用配偶体的胞外结构域相互作用
‑
跨膜结构域，和
‑
异源胞内信号传导结构域，该异源胞内信号传导结构域在该胞外配体结构域与该胞外配体结构域的相互作用配偶体结合后转导第一信号，其中第二胞内信号通过该相互作用配偶体的胞内结构域转导
。13.
如权利要求
12
所述的多核苷酸，其中所述嵌合蛋白不是包含以下或由以下组成的蛋白：
ICOSL
的胞外配体结构域和跨膜结构域以及
41BB
的异源胞内信号传导结构域
。14.
如权利要求
12
或
13
所述的多核苷酸，其中该至少两个胞内信号是可诱导的
。15.
如权利要求
12
至
14
中任一项所述的多核苷酸，其中该至少两个胞内信号在一个单个细胞中产生
。16.
如权利要求
12
‑
15
中任一项所述的多核苷酸，其中该相互作用配偶体包含：
‑
能够与该嵌合蛋白的该胞外配体结构域相互作用的胞外结构域，
‑
跨膜结构域，和
‑
胞内结构域，其在该相互作用配偶体的该胞外结构域与该嵌合蛋白的该胞外配体结构域结合后转导第二信号
。17.
如权利要求
12
‑
16
中任一项所述的多核苷酸，其中该至少两个胞内信号有助于表达该嵌合蛋白的细胞的生物学参数和
/
或功能的改善和
/
或由这样的细胞诱导的生物学参数
和
/
或功能的改善
。18.
如权利要求
12
至
17
中任一项所述的多核苷酸，其中
a.
该胞外配体结构域来自或衍生自
I
型跨膜蛋白，并且该异源胞内信号传导结构域来自或衍生自
II
型跨膜蛋白，或
b.
该胞外配体结构域来自或衍生自
II
型跨膜蛋白，并且该异源胞内信号传导结构域来自或衍生自
I
型跨膜蛋白
。19.
如权利要求
15
至
18
中任一项所述的多核苷酸，其中该细胞是免疫细胞，优选
T
或
NK
细胞
。20.
如权利要求
17
至
19
中任一项所述的多核苷酸，其中该生物学参数和
/
或功能选自增殖
、
细胞存活
、
细胞毒性
、
抗肿瘤活性
、
持久性和
/
或肿瘤细胞杀伤
。21.
如权利要求
12
至
20
中任一项所述的多核苷酸，其中：
‑
该胞外配体结构域包含来自肿瘤坏死因子超家族成员
、
细胞因子
、C
型凝集素
、
免疫球蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：劳伦斯，
申请(专利权)人：歌德塔有限公司，
类型：发明
国别省市：