一种功能性鹅肌肽的制备工艺制造技术

本发明专利技术涉及蛋白肽技术领域，具体涉及一种功能性鹅肌肽的制备工艺。一种功能性鹅肌肽的制备工艺，包括以下步骤：原料预处理，得到金枪鱼原浆；对金枪鱼原浆进行酶解处理；提取鹅肌肽溶液；大孔吸附树脂改性；纯化处理；猫须草纳米分散液的制备；复合气凝胶的制备；制备鹅肌肽粉。本发明专利技术通过在制备纯度高的鹅肌肽溶液的过程中使用改性之后的大孔吸附树脂进行纯化，可以使得鹅肌肽溶液的纯度更高，纯化效率更好，给大孔树脂进行修饰改性加上酚羟基，可以使得大孔吸附树脂对于水溶性的鹅肌肽具有更好的吸附结合能力，大大提高吸附效率，分离结果更好。果更好。果更好。

【技术实现步骤摘要】
一种功能性鹅肌肽的制备工艺


[0001]本专利技术涉及蛋白肽
，具体涉及一种功能性鹅肌肽的制备工艺。

技术介绍

[0002]金枪鱼在全球中的鱼类供应量稳居前位，全球每年捕获超过700万吨的金枪鱼。金枪鱼含有丰富鹅肌肽，鹅肌肽是一类组氨酸二肽，具有水溶性并且具有显著的抗氧化、抗衰老、降尿酸等功能，在食品工业中已用作天然的抗氧化剂和降尿酸食疗。
[0003]目前，对于金枪鱼体内的鹅肌肽的提取方法很少，从金枪鱼里面提取制备鹅肌肽的传统方法是通过直接将金枪鱼捣碎溶解，离心过滤，最终喷雾干燥成粉末。这个方法会导致鹅肌肽的纯化效率低，残留较多杂质，纯度不够高，对于原材料的浪费过多，并且传统方法提取制备的鹅肌肽功能性不够好，不能制备出粉末粒度小的均匀鹅肌肽粉，且不可以充分发挥出鹅肌肽本身降尿酸的作用。

技术实现思路

[0004]鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种功能性鹅肌肽的制备工艺。
[0005]一种功能性鹅肌肽的制备工艺，具体包括以下步骤：
[0006]S1：原料预处理，得到金枪鱼原浆
[0007]将新鲜金枪鱼去头去内脏清洗干净，用60
‑
70℃的热水浸泡30
‑
40min，将浸泡后的金枪鱼肉取出，再加纯沸水打浆，得金枪鱼鱼浆；
[0008]S2：对金枪鱼原浆进行酶解处理
[0009]往按重量份计100
‑
300份金枪鱼鱼浆中加入1
‑
3份蛋白酶进行酶解反应，控制pH为1
‑
3，温度为40
‑
50℃，酶解时间为5
‑
7小时，酶解时间达到后，升温至100
‑
120℃进行灭活处理，得到酶解后的金枪鱼溶液；
[0010]S3：提取鹅肌肽溶液
[0011]用碱性溶液将酶解后的金枪鱼溶液的pH调至11
‑
12，反应10
‑
20min，在3
‑
5℃，300
‑
500r/min的转速下离心10
‑
30min，除去下层沉淀和上层鱼油，取中层溶液，将溶液pH调至6
‑
8，反应1
‑
2h，在3
‑
5℃，5000
‑
10000r/min的转速下离心10
‑
30min，收集上清液即鹅肌肽溶液；
[0012]S4：大孔吸附树脂改性
[0013]将聚苯乙烯氯球，在乙醇溶液中抽提5
‑
6h，抽提结束后，自然风干，再转至真空干燥箱干燥至重量不变，在反应容器中加入氯球，加入1,2
‑
二氯乙烷，浸泡，加入修饰剂，再加入4
‑
6份无水三氯化铁升温至30
‑
40℃，搅拌，快速均匀升温至40
‑
60℃，回流，放置在室温下自然冷却、抽滤、水洗，用丙酮的稀盐酸溶液搅拌，无水乙醇抽提7
‑
9h，水洗至无乙醇味，转移到真空干燥箱，干燥至恒重，得到修饰后的大孔吸附树脂；
[0014]S5：纯化处理
[0015]取修饰后的大孔吸附树脂置于反应容器中，加入鹅肌肽溶液，置于恒温水浴振荡器中，振摇20
‑
24h，过滤，收集吸附饱和的大孔吸附树脂，将吸附饱和的大孔吸附树脂，用蒸馏水清洗，加入60
‑
80％乙醇30
‑
50份，进行解吸过滤，收集滤液，得到纯化后的鹅肌肽溶液；
[0016]S6：猫须草纳米分散液的制备
[0017]称取按重量份计500
‑
700份猫须草纯叶，置于细胞级超微粉碎机料筒内，降温至零下8
‑
10℃后开启机器工作5
‑
7min，制得猫须草超微细粉，将按重量份计30
‑
50份猫须草超微细粉与80
‑
100份去离子水混匀，经高压均质机处理，收集均质后的液体，获得猫须草纳米分散液；
[0018]S7：复合气凝胶的制备
[0019]取TOCN悬浮液与EDC和NHS混合，活化，滴加低温的TSC，室温下在氩气气氛中搅拌22
‑
26h，得到混合物，将混合物离心，除去沉淀，上清液制得S
‑
TOCN，S
‑
TOCN悬浮液、猫须草纳米分散液与PVA共混，得到中间体Ⅰ，将其隔热浴，50
‑
70℃加热2
‑
3h，再静置20
‑
40min降温到室温，迅速转移至冷冻干燥机内，得到复合气凝胶；
[0020]S8：制备鹅肌肽粉
[0021]取复合气凝胶，加入缓冲溶液浸泡20
‑
40min，加入纯化后的鹅肌肽溶液，静置20
‑
40min，使其达到吸附平衡，将吸附饱和的气凝胶在烘干箱中烘干20
‑
40min，温度为40
‑
60℃，对干燥后的气凝胶进行球磨，球磨140
‑
160h,得到鹅肌肽粉。
[0022]进一步地，步骤S4大孔吸附树脂改性，具体包括以下步骤：
[0023]S4.1：将按重量份计300
‑
500份的聚苯乙烯氯球放入布袋中，将布袋装入提取器中，在80
‑
100％的乙醇溶液中抽提5
‑
6h，抽提结束后，取出树脂自然风干2
‑
4h，再转至真空干燥箱50
‑
60℃下干燥至重量不变，取出备用；
[0024]S4.2：在反应容器中加入按重量份计20
‑
30份氯球，加入40
‑
60份1,2
‑
二氯乙烷，浸泡8
‑
10h，加入10
‑
16份修饰剂，再加入4
‑
6份无水三氯化铁升温至30
‑
40℃，搅拌1
‑
3h，得到初步处理溶液；
[0025]S4.3：将初步处理溶液快速均匀升温至40
‑
60℃，回流反应12
‑
14h，放置在室温下自然冷却、抽滤、水洗，用丙酮的稀盐酸溶液搅拌5
‑
7h；
[0026]S4.4：无水乙醇抽提7
‑
9h，水洗至无乙醇味，转移到真空干燥箱，30
‑
50℃真空干燥至恒重，得到修饰后的大孔吸附树脂。
[0027]进一步地，步骤S4.2中的修饰剂可为苯酚、邻苯二酚和邻苯三酚。
[0028]进一步地，步骤S5纯化处理，具体包括以下步骤：
[0029]S5.1：取按重量份计2
‑
4份修饰后的大孔吸附树脂置于反应容器中，加入30
‑
50份鹅肌肽溶液，置于30
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种功能性鹅肌肽的制备工艺，其特征在于，具体包括以下步骤：S1：原料预处理，得到金枪鱼原浆将新鲜金枪鱼去头去内脏清洗干净，用60
‑
70℃的热水浸泡30
‑
40min，将浸泡后的金枪鱼肉取出，再加纯沸水打浆，得金枪鱼鱼浆；S2：对金枪鱼原浆进行酶解处理往按重量份计100
‑
300份金枪鱼鱼浆中加入1
‑
3份蛋白酶进行酶解反应，控制pH为1
‑
3，温度为40
‑
50℃，酶解时间为5
‑
7小时，酶解时间达到后，升温至100
‑
120℃进行灭活处理，得到酶解后的金枪鱼溶液；S3：提取鹅肌肽溶液用碱性溶液将酶解后的金枪鱼溶液的pH调至11
‑
12，反应10
‑
20min，在3
‑
5℃，300
‑
500r/min的转速下离心10
‑
30min，除去下层沉淀和上层鱼油，取中层溶液，将溶液pH调至6
‑
8，反应1
‑
2h，在3
‑
5℃，5000
‑
10000r/min的转速下离心10
‑
30min，收集上清液即鹅肌肽溶液；S4：大孔吸附树脂改性将聚苯乙烯氯球，在乙醇溶液中抽提5
‑
6h，抽提结束后，自然风干，再转至真空干燥箱干燥至重量不变，在反应容器中加入氯球，加入1,2
‑
二氯乙烷，浸泡，加入修饰剂，再加入4
‑
6份无水三氯化铁升温至30
‑
40℃，搅拌，快速均匀升温至40
‑
60℃，回流，放置在室温下自然冷却、抽滤、水洗，用丙酮的稀盐酸溶液搅拌，无水乙醇抽提7
‑
9h，水洗至无乙醇味，转移到真空干燥箱，干燥至恒重，得到修饰后的大孔吸附树脂；S5：纯化处理取修饰后的大孔吸附树脂置于反应容器中，加入鹅肌肽溶液，置于恒温水浴振荡器中，振摇20
‑
24h，过滤，收集吸附饱和的大孔吸附树脂，将吸附饱和的大孔吸附树脂，用蒸馏水清洗，加入60
‑
80％乙醇30
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50份，进行解吸过滤，收集滤液，得到纯化后的鹅肌肽溶液；S6：猫须草纳米分散液的制备称取按重量份计500
‑
700份猫须草纯叶，置于细胞级超微粉碎机料筒内，降温至零下8
‑
10℃后开启机器工作5
‑
7min，制得猫须草超微细粉，将按重量份计30
‑
50份猫须草超微细粉与80
‑
100份去离子水混匀，经高压均质机处理，收集均质后的液体，获得猫须草纳米分散液；S7：复合气凝胶的制备取TOCN悬浮液与EDC和NHS混合，活化，滴加低温的TSC，室温下在氩气气氛中搅拌22
‑
26h，得到混合物，将混合物离心，除去沉淀，上清液制得S
‑
TOCN，S
‑
TOCN悬浮液、猫须草纳米分散液与PVA共混，得到中间体Ⅰ，将其隔热浴，50
‑
70℃加热2
‑
3h，再静置20
‑
40min降温到室温，迅速转移至冷冻干燥机内，得到复合气凝胶；S8：制备鹅肌肽粉取复合气凝胶，加入缓冲溶液浸泡20
‑
40min，加入纯化后的鹅肌肽溶液，静置20
‑
40min，使其达到吸附平衡，将吸附饱和的气凝胶在烘干箱中烘干20
‑
40min，温度为40
‑
60℃，对干燥后的气凝胶进行球磨，球磨140
‑
160h,得到鹅肌肽粉。2.根据权利要求1所述的一种功能性鹅肌肽的制备工艺，其特征在于，步骤S4大孔吸附树脂改性，具体包括以下步骤：
S4.1：将按重量份计300
‑
500份的聚苯乙烯氯球放入布袋中，将布袋装入提取器中，在80
‑
100％的乙醇溶液中抽提5
‑
6h，抽提结束后，取出树脂自然风干2
‑
4h，再转至真空干燥箱50
‑
60℃下干燥至重量不变，取出备用；S4.2：在反应容器中加入按重量份计20
‑
30份氯球，加入40
‑
60份1,2
‑
二氯乙烷，浸泡8
‑
10h，加入10
‑
16份修饰剂，再加入4

【专利技术属性】
技术研发人员：金健林，严承飞，金萍，
申请(专利权)人：上海予利生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：