一种抗SARS-CoV-2的中和抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了抗SARS

【技术实现步骤摘要】
一种抗SARS
‑
CoV
‑
2的中和抗体及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及抗SARS
‑
CoV
‑
2的中和抗体或其抗原结合部分及其应用。

技术介绍

[0002]单克隆抗体的分离和鉴定为感染性疾病的治疗和预防提供了新策略，同时也可为疫苗设计提供有效的抗原靶点。单克隆抗体不仅能通过Fab快速有效地阻断病毒感染，还可以通过Fc效应功能增强机体对病毒的免疫应答，抗体介导的免疫增强作用也能更好地控制病毒复制和清除感染细胞从而降低病毒量。此外，Fc改造可以显著延长抗体半衰期，从而减少使用剂量和频率。多种技术可以用于单克隆抗体的制备，包括杂交瘤技术、EBV转化、噬菌体展示、流式分选、10X Genomics和beacon以及以上技术的联合使用等；样本来自免疫后的动物、感染者和疫苗免疫后的志愿者等。
[0003]SARS
‑
CoV
‑
2属于冠状病毒科β冠状病毒属Sarbecovirus亚属，于2019年底首次报道。SARS
‑
CoV
‑
2感染人体后可表现为轻症或无症状，但也可导致重症和危重症，传播能力强，已构成全球大流行。现有上市疫苗可以有效预防SARS
‑
CoV
‑
2感染，但随着全球大流行的持续，各地不断出现新的突变株，对疫苗的保护效果提出了很大的挑战。研究显示，受体结合位点(receptor binding domain，RBD)，如K417N/E484K/N501Y的突变可显著降低免疫后血浆的中和效果。尤其，Omicron变异株的出现使绝大多数免疫血浆和单抗丧失中和活性。因此，抗SARS
‑
CoV
‑
2广谱中和抗体(broadly neutralizing antibodies，bNAbs)的分离和鉴定可为COVID
‑
19的防控以及疫苗的设计提供了新的方法。
[0004]目前，已有抗SARS
‑
CoV
‑
2单克隆抗体获批紧急使用，但需联合应用，已有二十多个抗体进入临床评价阶段。多数抗体的疗效评价仅限于SARS
‑
CoV
‑
2野生型毒株或少数突变株，而变异株中重要位点的突变会降低抗体的中和活性，从而导致部分耐药甚至完全耐药。因此，需要分离和鉴定更多的抗SARS
‑
CoV
‑
2中和抗体，尤其是高效广谱的中和抗体，来为临床应用提供更多的候选抗体。同时，现有抗SARS
‑
CoV
‑
2中和抗体多数来自感染者或免疫动物，感染者样本在操作中存在一定生物安全风险，而动物源性的抗体需要进行人源化改造。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的之一在于一种高效广谱的抗SARS
‑
CoV
‑
2的单克隆抗体。
[0006]本专利技术提供了一种抗SARS
‑
CoV
‑
2的中和抗体或其抗原结合部分，所述中和抗体或其抗原结合部分含有名称为V
H
的重链可变区和名称为V
L
的轻链可变区，所述V
H
和V
L
均由决定簇互补区和框架区组成；所述V
H
和所述V
L
的决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；
[0007]所述V
H
的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.3中第26
‑
33位所示；
[0008]所述V
H
的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.3中第51
‑
57位所示；
[0009]所述V
H
的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.3中第96
‑
106位所示；
[0010]所述V
L
的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.4中第27
‑
32位所示；
[0011]所述V
L
的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.4中第50
‑
52位所示；
[0012]所述V
L
的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.4中第89
‑
99位所示。
[0013]例如，V
H
的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。又例如，V
L
的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。
[0014]可选地，根据上述的中和抗体或其抗原结合部分，所述中和抗体是下述任一种：
[0015]a)由上述的V
H
和上述的V
L
连接得到的单链抗体；
[0016]b)含有a)所述单链抗体的融合抗体；
[0017]c)含有权利要求1所述的V
H
和权利要求1所述的V
L
的Fab；
[0018]d)含有权利要求1所述的V
H
和权利要求1所述的V
L
的完整抗体。
[0019]本专利技术还提供了与上述的中和抗体或其抗原结合部分相关的生物材料，所述生物材料为如下任一种：
[0020]B1)编码上述的中抗体或其抗原结合部分的核酸分子；
[0021]B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；
[0022]B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体；
[0023]B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；
[0024]B5)含有B1)所述核酸分子的重组微生物；
[0025]B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；
[0026]B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；
[0027]B8)含有B4)所述重组载体的重组微生物；
[0028]B9)含有B1)所述核酸分子的细胞系；
[0029]B10)含有B2)所述表达盒的细胞系；
[0030]B11)含有B3)所述重组载体的细胞系；
[0031]B12)含有B4)所述重组载体的细胞系。
[0032]所述细胞系例如为293T细胞和/或293F细胞。
[0033]所述抗原结合部分可选自Fab片段、Fab
’
片段、F(ab
’
)2片段、Fv片段、sc
‑
Fv和双体中的至少一种。
[0034]“Fab片段”包含一条轻链以及一条重链的CH1和可变区。Fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。
[0035]“Fab
’
片段”含有一条轻链以及一条重链的部分或片段，所述部分或片段含有VH结构域和CH1结构域以及在CH1和CH2结构域之间的区域。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗SARS
‑
CoV
‑
2的中和抗体或其抗原结合部分，其特征在于：所述中和抗体或其抗原结合部分含有名称为V
H
的重链可变区和名称为V
L
的轻链可变区，所述V
H
和V
L
均由决定簇互补区和框架区组成；所述V
H
和所述V
L
的决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；所述V
H
的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.3中第26
‑
33位所示；所述V
H
的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.3中第51
‑
57位所示；所述V
H
的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.3中第96
‑
106位所示；所述V
L
的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.4中第27
‑
32位所示；所述V
L
的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.4中第50
‑
52位所示；所述V
L
的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.4中第89
‑
99位所示。2.根据权利要求1所述的中和抗体或其抗原结合部分，其特征在于：所述中和抗体是下述任一种：a)由权利要求1所述的V
H
和权利要求1所述的V
L
连接得到的单链抗体；b)含有a)所述单链抗体的融合抗体；c)含有权利要求1所述的V
H
和权利要求1所述的V
L
的Fab；d)含有权利要求1所述的V
H
和权利要求1所述的V
L
的完整抗体。3.与权利要求1或2所述的中和抗体或其抗原结合部分相关的生物材料，所述生物材料为如下任一种：B1)编码权利要求1或2所述的中抗体或其抗原结合部分的核酸分子；B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体；B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；B5)含有B1)所述核酸分子的重组微生物；B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；B8)含有B4)所述重组载体的重组微生物；B9)含有B1)所述核酸分子的细胞系；B10)含有B2)所述表达盒的细胞系；B11)含有B3)所述重组载体的细胞系；B12)含有B4)所述重组载体的细胞系。4.根据权利要求3所述的生物材料，其特征在于：B1)所述核酸分子为编码权利要求1或2中任一项所述的中和抗体或其抗原结合部分的基因。5.根据权利要求4所述的生物材料，其特征在于：所述基因为如下A)或B)所述的DNA分子：A)所述V
H
的CDR1的编码序列如SEQ ID No.1中第76
‑
99位所示，所述V
H
的CDR2的编码序列如SEQ ID No.1中第151
‑
171位所示，所述V
H
的CDR3的编码序列如SEQ ID No.1中第286
‑
318位所示；所述V
L
的CDR1的编码序列如SEQ ID No.2中第79
‑
96位所示，所述V
L
的CDR2编码序列如SEQ ID No.2中第148
‑
156位所示，所述V
L
的CDR3的编码序列如S...

【专利技术属性】
技术研发人员：程功，刘玉斌，太万博，邹艳，盛洁，
申请(专利权)人：深圳湾实验室，
类型：发明
国别省市：