一种快速联检吡虫啉和多菌灵的竞争型荧光免疫层析试纸条、荧光探针及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种快速联检吡虫啉和多菌灵的竞争型荧光免疫层析试纸条、荧光探针及应用，属于农药残留检测技术领域。试纸条包括PVC底板、样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，其中，硝酸纤维素膜上的T线包被有农药半抗原，C线包被有羊抗鼠抗体。荧光探针为硅核多层量子点壳纳米球

【技术实现步骤摘要】
一种快速联检吡虫啉和多菌灵的竞争型荧光免疫层析试纸条、荧光探针及应用


[0001]本专利技术属于农药残留检测
，具体涉及一种快速联检吡虫啉和多菌灵的竞争型荧光免疫层析试纸条、荧光探针及应用。

技术介绍

[0002]食品安全一直是人们关注的首要问题，随着近年来农业生产的发展，农药的广泛使用导致了农药残留问题日益突出。吡虫啉(imidacloprid，IMI)和多菌灵(carbendazim，CBZ)作为农业上常见的杀虫剂、杀菌剂，通过抑制细菌或真菌的生长和繁殖来保护作物生长，提高产量。研究表明，长期接触IMI和CBZ等农药可导致抑郁症、神经系统缺陷、糖尿病和鼻炎等慢性疾病，在某些情况下还会导致肝损伤、癌症和对胎儿造成影响导致异常出生。由于农药残留的危害，欧盟设定了最低的监管下限，IMI为0.01mg/kg，CBZ为0.01mg/kg，美国规定的监管下限IMI为0.05mg/kg,CBZ为0.1mg/kg。
[0003]目前常用的农药残留检测方法主要是基于色谱、质谱和其他仪器分析技术，如气相色谱、液相色谱
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质谱和高效液相色谱。这些方法灵敏度高、准确度高，但耗时长、成本高，需要专业技术人员操作，且不能同时分析多个目标分析物，限制了检测的范围和效率。侧流分析法(lateral flow assay,LFA)具有快速、低成本、简单的特点，是一种成熟的POCT(point
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of
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care testing)免疫分析技术，已广泛用于农药残留、毒素、病毒、抗生素等各种分析物的检测。传统的LFA通常使用胶体金(AuNPs)标记抗体作为标签与目标分子结合，根据比色信号的变化检测目标分子，但该方法灵敏度低、定量能力弱、多路检测能力差。
[0004]SiO2纳米球是一种低成本的单分散纳米颗粒，由于其在复杂样品中分散性好、稳定性好、背景低、制备简单等优点，被用作构建LFA应用的高性能荧光纳米标签的合适载体。许多小量子点可以很容易地包覆在SiO2表面或嵌入到SiO2的介孔中，从而提供比单一量子点材料更强的荧光特性。最近，已经开发出多种基于SiO2的量子点材料，包括SiO2@QD、树枝状介孔SiO2‑
QDs、SiO2@Au@QD等，并作为LFA法的荧光标签，用于高灵敏检测病毒、细菌、免疫球蛋白和蛋白质生物标志物等生物大分子。然而，目前还没有基于SiO2‑
QD的荧光LFA用于小分子污染物检测的报道。
[0005]公布号为CN107063798A的中国专利申请文献，公开了一种用于蔬菜中农药残留的检测方法，该专利的检测方法，包括以下步骤：S1、选取检测蔬菜、水果样品，经缩分后，将其切碎，放入食品料理机中粉碎，制成待测样品；S2、称取35g待测样于150mL烧杯中，加入70mL乙腈，用匀浆机高速匀浆2
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5分钟后用滤纸过滤；S3、将S2得到的滤液加入到装有氯化钠的150mL具塞量筒中，收集滤液60
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80mL后盖上塞子，剧烈震荡1分钟，在室温下静置30分钟，使乙腈与水相分层；S4、在S3具塞量筒中吸取15mL溶液放入50mL烧杯中，将烧杯放在水浴锅上加热，烧杯中缓慢通入空气流，蒸发近干，加入3mL甲醇加二氯甲烷，溶解残渣，盖上铝箔，得到净化液；S5、将氨基柱依次用4mL甲醇加二氯甲烷预淋洗条件化，倒入S4得到的净化液，用15mL刻度离心管接收洗脱液，用2mL甲醇加二氯甲烷冲洗烧杯后过氨基柱，并重复1次，将有
淋洗液的刻度离心管置于水温50℃的氮吹仪上，氮吹蒸发近干，用甲醇定容至5mL，在旋涡器上混匀，用滤膜过滤，移入紫外检测器进行检测分析。具有高效、准确、灵敏且操作重现性好的特点，既满足了检测工作的需要，又提高了检测效率。但该专利的检测方法操作步骤复杂，且灵敏度不高。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题在于如何解决现有的农药残留检测方法所存在的灵敏度低、定量能力弱、多路检测能力差的问题。
[0007]本专利技术通过以下技术手段实现解决上述技术问题的：
[0008]本专利技术的第一方面提出一种快速联检吡虫啉和多菌灵的竞争型荧光免疫层析试纸条，其由样品垫、硝酸纤维素(NC)膜、吸水垫依次粘贴在聚氯乙烯(PVC)底板上组成；所述硝酸纤维素(NC)膜在吸水垫向样品垫方向依次设有质控线C、检测线T1和检测线T2；所述质控线包被有羊抗鼠IgG抗体；所述检测线T1包被有吡虫啉半抗原(IMI
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BSA)；所述检测线T2包被有多菌灵半抗原(CBZ
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BSA)。
[0009]有益效果：本专利技术利用所述竞争型荧光免疫层析试纸条同时检测吡虫啉和多菌灵，具有高灵敏、定量、稳定和操作简单的特点，在复杂食品中的应用具有良好的准确性、特异性和稳定性。
[0010]优选的，所述羊抗鼠IgG抗体的浓度为0.06～0.1mg/mL。
[0011]优选的，所述羊抗鼠IgG抗体的浓度为0.08mg/mL。
[0012]优选的，所述吡虫啉半抗原(IMI
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BSA)的浓度为0.1～0.3mg/mL。
[0013]优选的，所述吡虫啉半抗原(IMI
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BSA)的浓度为0.2mg/mL
[0014]优选的，所述多菌灵半抗原(CBZ
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BSA)的浓度为0.3～0.5mg/mL。
[0015]优选的，所述多菌灵半抗原(CBZ
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BSA)的浓度为0.4mg/mL。
[0016]本专利技术的第二方面提出一种吡虫啉和多菌灵的荧光探针的制备方法，包括以下步骤：
[0017](1)硅核多层量子点的制备：
[0018]S1：采用改进的化学沉淀法制备粒径为180～220nm的纳米SiO2颗粒；
[0019]S2：向步骤S1制得的纳米SiO2颗粒的水溶液中加入聚乙烯亚胺(PEI)溶液，超声处理，离心，清洗，重悬在去离子水中，得到PEI包覆SiO2颗粒的水溶液(SiO2‑
PEI)；
[0020]说明：带正电荷的PEI通过静电吸附作用自组装在带负电荷的SiO2颗粒表面。
[0021]S3：向SiO2‑
PEI水溶液中加入红色量子点(CdSe/ZnS
‑
MPA QDs)，超声处理，离心，清洗，重悬在无水乙醇溶液中，得到硅核单层量子点复合纳米颗粒(SiO2‑
QBs)；
[0022]说明：带负电荷的量子点静电吸附在正电性的SiO2‑
PEI颗粒上。
[0023]S4：将SiO2‑
QBs颗粒继续重复步骤S2和S3，制备出硅核多层量子点复合纳米颗粒(silica
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core multilayered quantum dot nanobeads，SiO2‑
MQBs)；
[0024](2)SiO2‑
MQB偶联农药抗体：
[0025]S5：将步骤S4得到的S本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速联检吡虫啉和多菌灵的竞争型荧光免疫层析试纸条，其特征在于，其由样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在PVC底板上组成；所述硝酸纤维素膜在吸水垫向样品垫方向依次设有质控线C、检测线T1和检测线T2；所述质控线包被有羊抗鼠IgG抗体；所述检测线T1包被有吡虫啉半抗原；所述检测线T2包被有多菌灵半抗原。2.根据权利要求1所述的快速联检吡虫啉和多菌灵的竞争型荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述羊抗鼠IgG抗体的浓度为0.06～0.1mg/mL。3.根据权利要求1所述的快速联检吡虫啉和多菌灵的竞争型荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述吡虫啉半抗原的浓度为0.1～0.3mg/mL。4.根据权利要求1所述的快速联检吡虫啉和多菌灵的竞争型荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述多菌灵半抗原的浓度为0.3～0.5mg/mL。5.一种吡虫啉和多菌灵的荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)硅核多层量子点的制备：S1：采用改进的化学沉淀法制备粒径为180～220nm的纳米SiO2颗粒；S2：向步骤S1制得的纳米SiO2颗粒的水溶液中加入PEI溶液，超声处理，离心，清洗，重悬在去离子水中，得到PEI包覆SiO2颗粒的水溶液(SiO2‑
PEI)；S3：向SiO2‑
PEI水溶液中加入红色量子点(CdSe/ZnS
‑
MPA QDs)，超声处理，离心，清洗，重悬在无水乙醇溶液中，得到硅核单层量子点复合纳米颗粒(SiO2‑
QBs)；S4：将SiO2‑
QBs颗粒继续重复步骤S2和S3，制备出硅核多层量子点复合纳米颗粒(SiO2‑
MQBs)；(2)SiO2‑
MQB偶联农药抗体：S5：将步骤S4得到的SiO2‑
MQBs溶液离心，弃去上清，沉淀物用MES缓冲液复溶，超声分散；加入EDC水溶液和NHS水溶液，超声处理，得到羧基活化的SiO2‑
MQBs；S6：离心去除过量的EDC和NHS，将沉淀物重悬在含有吐温
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20的PBS缓冲液中，加入吡虫啉和多菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：王澍，郑帅，汪崇文，王珍妹，张龙，李志刚，刘勇，
申请(专利权)人：中国科学院合肥物质科学研究院，
类型：发明
国别省市：