一种复制型慢病毒检测方法技术

本发明专利技术涉及一种复制型慢病毒检测方法，包括：将待检测样本在培养细胞上进行连续传代培养，在培养过程中，分别在第一时间点、第二时间点和第三时间点收集培养细胞的沉淀和细胞培养上清液，得到第一待检测样品、第二待检测样品和第三待检测样品；将由第一待检测样品、第二待检测样品和第三待检测样品中的RNA反转录得到的互补DNA分别与第一探针引物组进行一次荧光定量PCR，以提取T细胞系DNA与pVSV

【技术实现步骤摘要】
一种复制型慢病毒检测方法


[0001]本专利技术涉及病毒检测
，尤其涉及一种复制型慢病毒检测方法。

技术介绍

[0002]慢病毒(lentivirus)属于逆转录病毒家族，来源于慢病毒的复制缺陷病毒载体已成功用于介导目的基因在靶向细胞的转移和表达，且能够将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。目前慢病毒颗粒作为一种基因载体工具，已广泛应用于临床治疗研究，包括基因和细胞治疗。然而这些病毒颗粒，由于在生产过程中，经过工程化处理，是一种复制缺陷性的慢病毒。
[0003]目前基因治疗产品所用慢病毒载体均是非复制型的，但在病毒包装过程中，可能会由于同源或非同源重组等机制产生复制型慢病毒(RCL)。RCL同逆转录病毒载体一样可以整合在细胞基因组中，从而产生因整合诱发的激活原癌基因、破坏抑癌基因或使促细胞生长因子表达增高而造成二次肿瘤的风险；此外，因其具有复制性，即可产生具有复制能力的病毒，加之慢病毒载体采用了可感染多种细胞的膜蛋白VSV
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G，大大增加了整合而造成二次肿瘤的风险。出于安全、有效、质量可控的考虑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复制型慢病毒检测方法，其特征在于，将待检测样本在培养细胞上进行连续传代培养，在培养过程中，分别在第一时间点、第二时间点和第三时间点收集培养细胞的沉淀和细胞培养上清液，得到第一待检测样品、第二待检测样品和第三待检测样品；将由第一待检测样品、第二待检测样品和第三待检测样品中的RNA反转录得到的互补DNA分别与第一探针引物组进行一次荧光定量PCR，以提取T细胞系DNA与pVSV
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G质粒混合物分别作为一次第一对照、一次第二对照和一次第三对照；基于第一待检测样品的一次循环次数值A1、第二待检测样品的一次循环次数值A2和第三待检测样品的一次循环次数值A3以及一次第一对照的循环次数值A1
’
、一次第二对照的循环次数值A2
’
和一次第三对照的循环次数值A3
’
各自的分析比对确定待检测样本是否含有复制型慢病毒。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，基于第一待检测样品的循环次数值A1、第二待检测样品的循环次数值A2和第三待检测样品的循环次数值A3以及一次第一对照的循环次数值A1
’
、一次第二对照的循环次数值A2
’
和一次第三对照的循环次数值A3
’
各自的分析比对确定待检测样本是否含有复制型慢病毒包括：当A1大于A1
’
，A2大于A2
’
并且A3大于A3
’
时，待检测样本是阴性；当A1小于A1
’
，A2小于A2
’
并且A3小于A3
’
时，待检测样本是阳性。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，基于第一待检测样品的一次循环次数值A1、第二待检测样品的一次循环次数值A2和第三待检测样品的一次循环次数值A3以及一次第一对照的循环次数值A1
’
、一次第二对照的循环次数值A2
’
和一次第三对照的循环次数值A3
’
各自的分析比对确定待检测样本是否含有复制型慢病毒还包括：当A1大于A1
’
，A2大于A2
’
并且A3小于A3
’
，或者当A1大于A1
’
，A2小于A2
’
并且A3大于A3
’
，或者当A1小于A1
’
，A2大于A2
’
并且A3大于A3
’
时，将由第一待检测样品、第二待检测样品和第三待检测样品中的RNA反转录得到的互补DNA分别与第二探针引物组进行二次荧光定量PCR，以提取T细胞系DNA与pVSV
‑
G质粒混合物分别作为二次第一对照、二次第二对照和二次第三对照；基于第一待检测样品的二次循环次数值B1、第二待检测样品的二次循环次数值B2和第三待检测样品的二次循环次数值B3以及二次第一对照的循环次数值B1
’
、二次第二对照的循环次数值B2
’
和二次第三对照的循环次数值B3
’
各自的分析比对确定待检测样本是否含有复制型慢病毒。4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，基于第一待检测样品的二次循环次数值B1、第二待检测样品的二次循环次数值B2和第三待检测样品的二次循环次数值B3以及二次第一对照的循环次数值B1
’
、二次第二对照的循环次数值B2
’
和二次第三对照的循环次数值B3
’
各自的分析比对确定待检测样本是否含有复制型慢病毒包括：当B1大于B1
’
，B2大于B2
’
并且B3大于B3
’
时，待检测样本是阴性；当B1小于B1
’
，B2小于B2
’
并且B3小于B3
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时，待检测样本是阳性。5.根据权利要求1～4任一项所述的方法，其特征在于，基于第一待检测样品的一次循环...

【专利技术属性】
技术研发人员：王闻雅，王冬，赵翔，李方，李铮，刘铁龙，黄河，王爱平，罗彦军，杜利，程少宾，刘培，戴天悦，
申请(专利权)人：北京艺升医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：