高脂食品中苯并（ａ）芘的快速检测方法技术

高脂食品中苯并（ａ）芘的快速检测方法，涉及一种苯并（ａ）芘的检测方法。提供一种操作简便快捷、费用低廉的高脂食品中苯并（ａ）芘的快速检测方法。取高脂食品样品放入磨口抽滤瓶中，加入氢氧化钾－甲醇溶液、正己烷，与水放入微波炉内萃取后，取出冷却，冲洗，静置分层后取出正己烷清液，旋转蒸发至干，用二氯甲烷定容，得待测样品溶液；使用带有导数－恒能量同步扫描的荧光分光光度计，对待测样品溶液进行恒能量同步荧光光谱的测绘，用于苯并（ａ）芘的鉴别和粗略测定；加置二阶求导功能，进行二阶导数一恒能量同步荧光光谱的测绘，数据读取方式采用导数基线法，利用连续标准加入法对待测样品溶液中苯并（ａ）芘进行定量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种苯并(a)芘的检测方法，特别是涉及一种对高脂食品中苯并(a) 芘的荧光快速检测方法。
技术介绍
苯并(a)芘(benZ0(a)pyrene)是已发现的200多种多环芳烃中最主要的环境和 食品污染物，对人类和动物来说也是一种很强的致癌物质。苯并(a)芘(不但分布于空气、 水、土壤等环境介质中，在食品中也广泛存在。苯并(a)芘危害人类的途径主要是对食品的 污染，特别是加工高脂食品(如烟熏制食品、烘烤食品和煎炸食品等)中苯并(a)芘含量较 高，长期食用含苯并(a)芘等多环芳烃的食物对人类健康将产生潜在威胁。可对机体各器 官，如肺、肝、食道、胃肠等均可致癌。除此之外，苯并(a)芘(benZ0(a)pyrene)还具有致畸 性和遗传毒性。因此有必要对高脂肪食品中残留的苯并(a)芘进行严格的监控。但由于现 存方法的繁琐性和复杂性，许多质检部门没能真正地开展此项工作。因此建立一种快速、简 便、有效的高脂食品中苯并(a)芘含量的筛查技术十分必要。我国国家标准(食品中苯并(a)芘的测定方法，中华人民共和国国家标准GB/ T5009. 27-1996.)对食品中苯并(a)芘的测定方法如下样品先用有机溶剂提取，或经皂化提取，再将提取液经液_液分配或色谱柱净化， 然后在乙酰化滤纸上分离苯并(a)芘，因苯并(a)芘在紫外灯照射下呈紫色荧光斑点，将分 离后有苯并(a)芘的滤纸部分剪下，用溶剂浸泡，用荧光分光光度计测荧光强度与标准比 较定量。这种检测方法虽然是国家认可的定量方法，但实验过程极为复杂，样品损失也较 多，给定量工作带来很多不便。恒能量同步荧光法(简称CESFS)是同步荧光分析法的一个新分支。它是在激 发和发射波长的同时扫描过程中，保持两者之间的一个恒定的能量差关系(1/Xex-I/ λ em) XlO7= Δ υ =常数。CESFS法以荧光体的量子振动跃迁的特征能量为依据而进行同 步扫描。若选择一固定能量差△ u等于某一振动能量差，则在同步扫描中，当激发能量和 发射能量刚好匹配一特定吸收-发射跃迁条件时，该跃迁处于最佳条件，由此产生的同步 光谱峰可达到最大强度。CESFS使常规荧光光谱和理论预测的荧光体能级跃迁联系起来，使 所得到的同步光谱谱带宽度变窄。只要选择合适的△ u就能产生极为简单的单峰到类似 与常规荧光光谱的多峰。由于所选择的△ u是一类化合物，而不仅仅是某个组分的特征， 而且与光谱区域无关，因此便有可能只选择一个△ u值于整个光谱的扫描。这样若要达到 最大光谱分辨和免受杂散光干扰，整个CESFS光谱扫描过程可只用一个Δ u。导数技术与恒能量同步荧光法联用能提高窄带的灵敏度，不仅使光谱简化、减小 光谱重叠、减小散射光的影响；而且使谱带特征更明显，更有利于混合物中低浓度成分的鉴 别。尤其是经导数放大后，对各组分分辨力更强，更有利于定性鉴别和定量分析。因此，导 数_恒能量同步荧光光谱是一种用于复杂混合物分析的快速、简便和有效的办法。目前报道的微波辅助萃取食品样品中苯并(a)芘方法，一般采用专业的微波消解3系统，不仅仪器设备昂贵，操作繁琐，而且萃取结束后还需要较长的降温冷却时间，这无疑 增加了总的萃取时间；样品的分析检测方法通常是高效液相色谱与荧光光谱的联用和气相 色谱与火焰离子化或质谱的联用，因此要求样品进样分析前，需经过纯化步骤，这就相应的 增加了样品总的分析时间，并且由于食品中的苯并(a)芘以痕量级存在，在经过纯化步骤 后会造成较大的损失，影响检测结果的准确性。本申请人在中国专利CN1632535A中披露了一种明显减少对食品样品前处理过 程，操作简便快捷，费用低廉的食品中苯并(a)芘的荧光快速筛查方法，该方法对于脂肪 含量较低的一般食品，仅需将样品剪碎研磨后浸泡在二氯甲烷中，收集上层清液，结合导 数-恒能量同步荧光法即可测定其中的苯并(a)芘含量。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种操作简便快捷、费用低廉的高脂食品中苯并(a)芘的 快速检测方法。本专利技术包括以下步骤1)样品处理取高脂食品样品放入磨口抽滤瓶中，加入氢氧化钾-甲醇溶液，再加入正己烷，盖 上磨口塞后与装有水的容器一起放入微波炉内萃取后，取出冷却至室温，用水冲洗，静置分 层后取出正己烷清液，旋转蒸发至干，用二氯甲烷定容，得处理后的待测样品溶液；2)定性测量使用带有导数一恒能量同步扫描的荧光分光光度计，对所述待测样 品溶液进行恒能量同步荧光光谱的测绘，用于苯并(a)芘的鉴别和粗略测定；3)定量测量在步骤2)所述恒能量同步荧光光谱的测绘条件下，加置二阶求导功 能，进行二阶导数一恒能量同步荧光光谱的测绘，数据读取方式采用导数基线法，利用连续 标准加入法对待测样品溶液中苯并(a)芘进行定量；所述导数基线法为分别读取待测样 品溶液负峰基线和苯并(a)芘负峰于397. 5nm处的信号强度值，将二者的代数差绝对值作 为定量计算用的导数荧光强度。在步骤1)中，所述高脂食品样品的量可为0. 4 2. 0g，所述正己烷的加入量可为 10 30mL，所述加入氢氧化钾-甲醇溶液的量可为15 25mL，所述氢氧化钾-甲醇溶液 的摩尔浓度可为lmol/L，所述水的量可为400 600mL ；所述微波炉的输出功率可为140 420W，所述萃取的时间可为10 20min。在步骤1)中，所述高脂食品样品的量最好为l.Og，所述正己烷的加入量最好为 20mL ；所述微波炉的输出功率最好为140W，所述萃取的时间最好为lOmin，每5min停一次。在步骤2)中，所述恒能量同步荧光光谱的测绘条件可为带有导数一恒能量同步 扫描的荧光分光光度计的扫描速率为240nm/min，恒能量差Δv = 1100 1500 cm·1;带有导 数一恒能量同步扫描的荧光分光光度计的起始激发波长为260nm，波长扫描范围为220nm。在步骤2)中，所述带有导数一恒能量同步扫描的荧光分光光度计的恒能量差Δν 最好为HOOcnT1。本专利技术针对现有的高脂食品中苯并(a)芘的检测方法所存在的缺点，对前处理过 程的萃取效率和操作时间两个因素进行了改进，利用微波萃取效率高、节省时间等特点，采 用价格低廉的家用微波炉，将皂化和微波辅助萃取两个步骤同时进行，与现有技术相比，本4专利技术具有以下显著的特点1)可使用价格低廉的家用微波炉作为微波萃取系统，二阶导数一恒能量同步荧光 光谱法检测，设备简单、低廉、易操作，便于推广和使用；2)在样品整个前处理过程中，操作简单、快捷、省溶剂，定量方法结果准确可靠；3)采用常压、低功率、短时间微波萃取处理后，溶剂温度一般维持在50 55°C，减 少了冷却时间，同时也可以避免样品中可能含有的杂质如含铁、含碳物质容易形成局部热 点而带来的安全隐患；4)本专利技术无需纯化、分离过程，不仅减少了操作步骤，而且避免了苯并(a)芘的损失。附图说明图1为香辣鱼丝样品的零阶-恒能量同步荧光光谱。在图1中，横坐标为激发波长 (nm)，纵坐标为相对荧光强度(a. u.)；恒能量差Δν = 1400 cm—1，在386. 6nm处为苯并(a) 芘的荧光峰。图2为香辣鱼丝样品的二阶导数-恒能量同步荧光光谱。在图2中，横坐标为激 发波长(nm)，纵坐标为导数荧光强度(a. u.)；恒能量差Δν =本文档来自技高网...

【技术保护点】
高脂食品中苯并（ａ）芘的快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：１）样品处理取高脂食品样品放入磨口抽滤瓶中，加入氢氧化钾－甲醇溶液，再加入正己烷，盖上磨口塞后与装有水的容器一起放入微波炉内萃取后，取出冷却至室温，用水冲洗，静置分层后取出正己烷清液，旋转蒸发至干，用二氯甲烷定容，得处理后的待测样品溶液；２）定性测量：使用带有导数－恒能量同步扫描的荧光分光光度计，对所述待测样品溶液进行恒能量同步荧光光谱的测绘，用于苯并（ａ）芘的鉴别和粗略测定；３）定量测量：在步骤２）所述恒能量同步荧光光谱的测绘条件下，加置二阶求导功能，进行二阶导数－恒能量同步荧光光谱的测绘，数据读取方式采用导数基线法，利用连续标准加入法对待测样品溶液中苯并（ａ）芘进行定量；所述导数基线法为：分别读取待测样品溶液负峰基线和苯并（ａ）芘负峰于３９７．５ｎｍ处的信号强度值，将二者的代数差绝对值作为定量计算用的导数荧光强度。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李耀群，林丽容，周娜，李呐，李秀英，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：92[中国|厦门]