鉴别小麦红粒和白粒的分子标记技术制造技术

本发明专利技术公开了一种鉴别小麦红粒和白粒的分子标记技术，利用人工合成小麦衍生品种红粒小麦川麦４２和四川栽培白粒小麦川Ｗ５６５杂交，构建Ｆ２群体用于红粒基因的遗传分析，１０１５个Ｆ２植株被收获用于鉴定籽粒颜色和川麦４２红粒基因的遗传分析与分子标记，其中，Ｆ２群体中２４１个白粒单株被选出，构建Ｆ２－３家系，用于验证Ｆ２的结果；本发明专利技术利用ＳＳＲ分子标记，对人工合成小麦衍生品种川麦４２携带的红粒基因进行作图，从而更快速、准确、有效的选择白粒品种、淘汰红粒品种，加快了白粒小麦育种进程。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种鉴别川麦４２红粒和白粒的分子标记技术，利用人工合成小麦衍生品种红粒小麦川麦４２和四川栽培白粒小麦川Ｗ５６５杂交，构建Ｆ２群体用于红粒基因的遗传分析，１０１５个Ｆ２植株被收获用于鉴定籽粒颜色和川麦４２红粒基因的遗传分析与分子标记，其中，Ｆ２群体中２４１个白粒单株被选出，构建Ｆ２－３家系，用于验证Ｆ２的结果；其特征在于：该分子标记技术具体步骤如下：　　（１）ＤＮＡ提取和ＳＳＲ标记：苗期取双亲、Ｆ２和Ｆ２－３幼嫩叶片，利用ＣＴＡＢ法提取ＤＮＡ；选用小麦３Ｄ染色体长臂上ＳＳＲ引物筛选双亲川麦４２和川Ｗ５６５的遗传差异；　　ＰＣＲ反应条件、扩增体系如下：１５ｕｌ体系：　　１×ＰＣＲ缓冲液，模板１．５ｕｌ，镁离子浓度１．５ｍＭ，ｄＮＴＰ浓度０．２ｍＭ，引物浓度为０．２ｕＭ，ｒＴａｑ酶１Ｕ，加无菌去离子水或ｄｄＨ↓［２］Ｏ水至１５ｕｌ；　　ＰＣＲ程序为：　　１）９４℃预变性５ｍｉｎ　　２）降落ＰＣＲ程序共１１个循环每一循环降低１℃　　９４℃，４５秒　　６５℃，４５秒　　７２℃，４５秒　　３）常规ＰＣＲ程序３０个循环　　９４℃，４５秒　　５５℃，４５秒　　７２℃，４５秒　　４）最后一步扩增：７２℃，１０ｍｉｎ　　电泳检测：聚丙烯酰胺凝胶浓度为６％，其中，丙烯酰胺∶甲叉双丙烯酰胺＝３９∶１，每个点样孔内扩增产物的上样量为５－８ｕｌ，２２０Ｖ恒压条件下预电泳２０ｍｉｎ后４００Ｖ恒压条件下电泳１ｈ后０．１％硝酸银染色１０分钟，２％的ＮａＯＨ和１．５％甲醛显影至条带出现，最后照相保存；　　（２）性状鉴定：小麦完全成熟时，收获Ｆ１种子、Ｆ２单株和Ｆ２－３家系种子，每一株系取３０－４０粒种子放在５％ＮａＯＨ溶液里浸泡过夜，肉眼鉴定籽粒颜色，种子为黑红色的是红粒，为稻草黄色的是白粒；　　（３）遗传距离计算和连锁图构建：利用双亲具有多态性的引物扫描Ｆ２群体中白粒单株，结合鉴定籽粒颜色的结果，通过卡方检验估算Ｆ２群体观察值和预期值间分离比的适合度，用Ｍａｐｍａｋｅｒ３．０计算标记与抗病基因之间的遗传距离，用Ｋｏｓａｍｂｉ功能计算图距，ＬＯＤ值为３．０，用Ｍａｐｄｒａｗ绘制遗传图谱；　　（４）结果　　１）根据籽粒颜色鉴定，川麦４２红粒基因Ｒ－Ｄ１是显性遗传的，１０１５个Ｆ２植株中有７７４株红粒、２４１株白粒，分离比为３∶１，表明川麦４２携带的红粒基因受单基因控制；　　２）８个３Ｄ染色体长臂上的ＳＳＲ引物被用于扫描Ｆ２群体中２４１个隐性单株，根...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨武云，李俊，胡晓蓉，
申请(专利权)人：四川省农业科学院作物研究所，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]