一种基于酶联免疫法的快速检测系统技术方案

本发明专利技术公开了一种基于酶联免疫法的快速检测系统，包括以下组件：ａ、检测构件；ｂ、用于放置目标样品的空瓶；ｃ、装有经冷冻干燥后抗体的试剂瓶；ｄ、装有酶标标记物的试剂瓶；ｅ、装有用于定性的底物的试剂瓶；ｆ、装有用于定量的底物的试剂瓶；ｇ、装有缓冲溶液的试剂瓶；本发明专利技术公开了该系统的检测方法，还公开了可以同时吸附或共价连接各种不同分子量的反应物的固相载体，其基质主体为聚羟基丁酸酯，所述基质里还嵌入带有活性功能团的聚氨基酸，该嵌入的聚氨基酸与聚羟基丁酸酯基质的质量比为（０．１－８）∶１００。本发明专利技术不需要前期的样品制备，且制成的检测棒体系亦可适用于单个样品，小巧便携，有现场可操作性，效果比传统酶联免疫试剂盒更方便准确。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基于酶联免疫法的快速检测系统及其检测方法，本专利技术还涉及一种可包被反应物的固相载体。
技术介绍
本专利技术的基本理论体系是利用酶联免疫法(ELISA)中的双抗体夹心法测定未知 抗原。将抗原免疫动物获得的抗体吸附于固相表面，加抗原，形成抗原-抗体复合物；加与 前一步同样的抗体，形成抗体_抗原_抗体复合物，再加入酶标标记物；加入底物，结果判 定有色产物的生成量与抗原量成正相关。 现有酶联免疫试剂盒的基本特征是将抗原或抗体固定在固相载体上制成微孔 板，利用酶标记的抗原或抗体及底物，检测样品中与固相载体上的抗原或抗体相应的抗原 或抗体。传统材质一般采用聚苯乙烯作为免疫吸附的载体，具有一定的局限性，其包埋率及 亲水性都有限，所以对样品的前期处理要求严格，耗费大量时间，需要专业的技术人员和实 验室环境，在产品的使用操作和检测灵敏度方面都受到了很大的限制，而且作为不可降解 的传统聚苯乙烯塑料，不利于环保。试剂盒通常设计为96孔或48孔的板状，微孔板在操作 上十分不便，样品容易混淆，用肉眼辨别微孔上的变化容易误判，若样品数量较少则会造成 微孔的闲置浪费。并且所有操作不能为普通使用者所掌握。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种基于酶联免疫法的快速检测系统。 本专利技术的第二个目的是提供上述检测系统的检测方法。 本专利技术的第三个目的是提供一种可包被反应物的固相载体。 本专利技术采用的技术方案是 —种基于酶联免疫法的快速检测系统，包括置于一个检测盒中的以下组件a、检 测构件；b、用于放置目标样品的空瓶；C、装有经冷冻干燥后抗体的试剂瓶；d、装有酶标标 记物的试剂瓶；e、装有用于定性的底物的试剂瓶；f、装有用于定量的底物的试剂瓶；g、装 有缓冲溶液的试剂瓶。 所述检测构件为包被有抗体的固相载体，并套有一个比色杯。 该固相载体的基质主体为聚羟基丁酸酯，其基质里还嵌入带有活性功能团的化合 物。 此化合物为聚氨基酸，嵌入的聚氨基酸与聚羟基丁酸酯基质的质量比为(o. l-8) : ioo。 聚氨基酸为聚天门冬氨酸、聚赖氨酸或聚谷氨酸。 所述以聚羟基丁酸酯为基质主体的固相载体形状为棒状，即检测棒。 所述检测棒的制备方法为将聚氨基酸与聚羟基丁酸酯按(0. 1-8) : 100的质量比混合均匀后，送入压塑机在110-21(TC的加工温度下进行压塑并制成珠粒状，然后再将珠4粒状压塑物通过常规工艺制成棒状，即得。所述抗体可为任何种类的免疫球蛋白IgG，所述抗体的包被方法为首先将抗体以20i! g/ml溶于磷酸盐缓冲溶液，将检测棒浸入到抗体溶液中，放入冰箱冷藏过夜；然后取出检测棒，再将其浸入封闭液中，封闭液为溶有体积浓度lX的Tween20的磷酸盐缓冲溶液，室温下静置两小时后，取出自然晾干；检测棒套入比色杯中，2-8t:冷藏保存。 所述装有经过冷冻干燥后的抗体的试剂瓶的制备方法为将抗体以lmg/ml溶于磷酸盐缓冲溶液，取20iU注入试剂瓶中，放入冷冻干燥器中过夜冻干，取出后2-『C冷藏保存； 所述装有酶标标记物试剂瓶的制备方法为将lmg金黄色葡萄球菌蛋白A偶联碱 性磷酸酶保存于1ml的50X 10—3mol/L Tris溶液中，然后再加入氯化镁、氯化锌、牛血清蛋 白、甘油和叠氮化钠，使氯化镁达到1. 0X10—^01/L、氯化锌达到0. 1X10—^01/L、牛血清白 蛋白的体积浓度达到1%、甘油的体积浓度达到50%和叠氮化钠达到15X10—^Ql/L，调pH 值为8. 0，即得工作浓度为lmg/ml的金黄色葡萄球菌蛋白A偶联碱性磷酸酶；取0. 4 iU注 入试剂瓶中，2-8t:冷藏保存； 所述用于定性测量的底物为5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐(BCIP)与氯 化硝基四氮唑蓝(NBT)的混合液，所述装有底物试剂瓶的制备方法为将摩尔浓度为 4. 8 X 10—4mol/L的BCIP和摩尔浓度为5. 1 X 10—4mol/L NBT混合，然后取lml混合液注入试 剂瓶中，2-『C冷藏并避光保存； 所述用于定量测量的底物为溶于体积浓度为10%的二羟乙基胺的硝基苯磷酸盐， 所述硝基苯磷酸盐的质量浓度为1. Omg/ml，所述溶液的pH值为9. 5，然后取lml混合液注 入试剂瓶中，2-8t:冷藏并避光保存； 所述装有缓冲溶液试剂瓶的制备方法将牛血清白蛋白溶于磷酸盐缓冲溶液中使 牛血清白蛋白的体积浓度达到1 % ，然后取5ml注入试剂瓶中，2-『C冷藏保存即得。 —种基于酶联免疫法的快速检测系统的检测方法包括以下步骤 (1)测试材料为固体适当研磨或打碎，液体无需制样，按体积比1 : l加入权利要 求9中制得的缓冲溶液并均匀混合，充分震荡；取震荡后的悬浮液注入用于放置目标样品 的空试剂瓶，液面至试剂瓶一半体积处为0. 7-0. 9ml，然后将检测棒插入装有样品液试剂瓶 中，室温下静置30分钟后，将检测棒取出，用水冲洗； (2)取缓冲溶液lml注入装有冻干抗体的试剂瓶，震荡让其中的冻干抗体溶解后， 将检测棒插入其中，室温下静置30分钟后，将检测棒取出，用水冲洗； (3)取缓冲溶液lml注入装有酶标标记物的试剂瓶，混合均匀后将检测棒插入其 中，室温下静置20分钟后，将检测棒取出，用水冲洗； (4)用于快速定性检测将装有用于定性测量的底物的试剂瓶中的底物lml注入 套装所配的比色杯中，将检测棒插入比色杯等待显色反应，10分钟后，取出检测棒观察。 此方法用于定性检测，其中棒上显示为蓝紫色，棒上颜色均匀的为阴性；棒的下半 部分颜色明显深于上半部分，并明显呈现深浅两极的为阳性；呈阳性的棒，根据棒下半部分 颜色深浅的比对也可进行半定量的估算。 (5)用于快速定量检测将装有用于定量测量底物的试剂瓶中的底物lml注入套 装所配的比色杯中，将检测棒插入比色杯，10分钟后，取出检测棒。碱性磷酸酶对该底物的5酶解产物呈可溶性黄色，最大吸收值在410nm，可直接将比色杯放入分光光度计中测量吸光值，通过对标准样品和目标样品吸光值的测定，对目标样品进行定量分析。 —种可包被反应物的固相载体，其基质主体为聚羟基丁酸酯，其基质里还嵌入有聚氨基酸，所嵌入的聚氨基酸与聚羟基丁酸酯基质的质量比为(0.1-8) : 100。 上述嵌入的聚氨基酸为聚天门冬氨酸、聚赖氨酸或聚谷氨酸。所述固相载体的外形可为微球状、管状、梳齿状或微孔板状；其可包被反应物的分子量范围为100Da-200000Da，所述反应物可为蛋白质、多肽、寡核苷酸、寡聚糖或低分子半抗原。 本专利技术的聚羟基丁酸酯分子式为 H-(0-CH(CH3)CH2COO-)nOH。 本专利技术的优点是采用新型的可再生的聚羟基丁酸酯作为免疫吸附的载体基质， 聚羟基丁酸酯是一种生物大分子，其聚合物和单体都是生物细胞的代谢产物，具有生物相 容性，无毒无害，可生物降解，非常环保。用此种新材料为基质包埋亲水性的活性功能团，可 以粘着吸附抗体分子，其表面结构优于酶联免疫法所用的传统聚苯乙烯材料，对抗体的包 埋容量极高且具有高亲水性，使反应更加灵敏，因此不需要样品的前期制备。由此制成的检 测棒体系亦可适用于单个样品，小巧便携，可携带至现场进行检测，快速定性不需要专业的 技术人员和实验室环境，也能够在实验室进行快速定量分析。本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于酶联免疫法的快速检测系统，其特征是包括置于一个检测盒中的以下组件：ａ、检测构件；ｂ、用于放置目标样品的空瓶；ｃ、装有经冷冻干燥后抗体的试剂瓶；ｄ、装有酶标标记物的试剂瓶；ｅ、装有用于定性的底物的试剂瓶；ｆ、装有用于定量的底物的试剂瓶；ｇ、装有缓冲溶液的试剂瓶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陶正杰，夏晶，
申请(专利权)人：陶正杰，夏晶，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]