【技术实现步骤摘要】
α
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突触核蛋白检测测定法和用于诊断
α
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突触核蛋白病的方法
[0001]本申请是申请人为爱丁堡大学管理处、申请日为2017年7月6日、申请号为201780041987.3、专利技术名称为“α
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突触核蛋白检测测定法和用于诊断α
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突触核蛋白病的方法”的分案申请。
[0002]本专利技术涉及用于检测生物样品中的聚集蛋白质的测定法,更具体地涉及用于检测生物样品中的聚集α
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突触核蛋白的测定法。
技术介绍
[0003]α
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突触核蛋白(a
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syn)是一种140个氨基酸的非常保守的酸性小蛋白质,分子量为19kDa,其由位于4号染色体上的SNCA基因编码1。它以高浓度位于中枢神经系统的突触前神经末梢,在此其对突触小泡生物学发挥作用2。突触核蛋白病是一组与神经元和神经胶质的选择性群体中a
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syn的纤维性聚集体的沉积有关的神经退行性病症。这些沉积物可见于神经胞体(如路易体(LB))中或如帕金森病(PD)或路易体痴呆(DLB)的疾病的营养不良神经突起中;或多系统萎缩症(MSA)的神经胶质细胞质包涵体中3。
[0004]已经在如脑脊液(CSF)4和血清5的生物流体中检测到存在a
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syn。已经提议将由ELISA测量CSF中的a
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syn浓度作为用于与a
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syn相关病症的生物标志物。然而,尽管许多研究表明在P ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测生物样品中α
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突触核蛋白聚集体存在的方法,所述方法包括以下步骤:(i)提供生物样品;(ii)提供反应样品,所述反应样品包含珠粒群体、适合于结合蛋白质聚集体并在与蛋白质聚集体结合时荧光增强的荧光团、和α
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突触核蛋白或其片段或变体;(iii)将所述生物样品和所述反应样品混合以形成反应混合物;(iv)以间歇式搅拌循环孵育所述反应混合物;(v)用激发所述反应样品的所述荧光团的波长的光照射所述样品;和(vi)确定在孵育期间所述反应混合物的荧光水平,其中步骤(iv)至(vi)同时进行,并且在步骤(iv)至(vi)期间所述反应混合物的所述荧光显著增加表明在所述反应混合物中存在α
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突触核蛋白聚集体,并且其中在所述反应混合物中存在α
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突触核蛋白聚集体表明在所述生物样品中存在α
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突触核蛋白聚集体。2.根据权利要求1所述的方法,其中所述生物样品是体液样品。3.根据权利要求2所述的方法,其中所述体液选自包括脑脊液、血液或血液成分、鼻部液体或组织、尿液、粪便和淋巴的组。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述反应样品是经过缓冲的反应样品。5.根据权利要求4所述的方法,其中将所述反应样品缓冲以维持所述反应样品的pH在约pH 6至约pH 8.5。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述蛋白质聚集体包含显著含量的β
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折叠。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述荧光团是硫黄素或花青T
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284。8.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述反应样品包含约0.01mg/mL的α
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突触核蛋白至约10mg/mL的α
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突触核蛋白以充当聚集底物。9.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述反应样品的所述α
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突触核蛋白是全长α
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突触核蛋白的片段。10.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述反应样品中所述珠粒群体的所述珠粒包括氧化锆,二氧化硅,玻璃,石英或聚合物,如聚苯乙烯,聚四氟乙烯(PTFE),聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA),或其组合。11.根据权利要求10所述的方法,其中所述珠粒群体的所述珠粒包括氧化锆、二氧化硅或玻璃。12.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述珠粒群体的平均珠粒直径为约1...
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