【技术实现步骤摘要】
一种玉米根系原生质体制备与转化方法
[0001]本专利技术涉及原生质体制备与转化
,尤其是涉及一种玉米根系原生质体制备与转化方法。
技术介绍
[0002]瞬时转化系统能够吸收外源基因并快速表达,相较于稳定转化其时间更短,效率更高,在解析基因功能方面发挥重要作用,已在多种植物中被广泛应用(张小莉,王鹏程,宋纯鹏.基于基因枪技术的拟南芥瞬时表达转化方法的建立[J].河南大学学报(自然科学版),2008,(05):506
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509)。其中原生质体介导的瞬时转化体系具备高效率、易操作的特点,且不需要特殊的仪器设备、不依赖于物种并能快速得到结果,使其成为目前应用最广的瞬时转化系统之一(彭小群,王梦龙.水稻遗传转化研究进展[J].中国农学通报,2021,37(27):1
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5)。但由于原生质体细胞保留了源细胞生理活性与调节能力,因此分离与制备不同植物组织的原生质体对于研究组织特异基因的功能至关重要。
[0003]目前,根系原生质体的制备体系在许多植物中都已建立,不同植物由于根系的差异,制备根系原生质体的酶解液和酶解时间差异较大。研究表明在1%果胶酶、4%纤维素酶R
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10、3%纤维素酶RS的条件下,酶解4h后可以分离得到酸枣幼根的原生质体(武延生,邢翠娟,李敏等.酸枣幼根原生质体的制备[J].耕作与栽培,2021,41(01):25
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31)。分离紫花苜蓿原生质体的方法是将清水紫花苜蓿根系在2%纤维素酶、0.5%果胶酶、0.3%崩溃酶中酶解10 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种玉米根系原生质体制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)选取Mo17种子,获取玉米根系;(2)将玉米根系用13
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15%(m/v)的甘露醇溶液进行高渗处理;(3)配制酶解液,将经过高渗处理的玉米根系放入酶解液中,在23
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28℃,50
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60rpm条件下避光酶解4
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8小时;所述酶解液是按照以下方法配制的:按照终浓度为1
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2%(m/v)纤维素酶、0.5
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0.8%(m/v)离析酶、0.4
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0.8M甘露醇、10mM MES补足ddH2O至10mL;55℃水浴10min,每隔2min颠倒摇匀一次,然后加入终浓度为10mM CaCl2、0.1%(v/v)BSA,用0.45mm滤膜过滤灭菌备用;(4)收集玉米根系原生质体;(5)原生质体活性鉴定。2.根据权利要求1所述的一种玉米根系原生质体制备方法,其特征在于,所述步骤(1)包括以下步骤:将Mo17种子清洗后杀菌;用温水浸泡6
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8h使种子吸涨萌动,催芽;待种子破胸后移至海绵中进行水培。3.根据权利要求2所述的一种玉米根系原生质体制备方法,其特征在于,所述步骤(2)包括以下步骤:水培5
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9d后,将玉米根系切成1mm长的圆柱体;把切好的玉米根系放入13%(m/v)的甘露醇溶液中,室温黑暗处理1h。4.根据权利要求1所述的一种玉米根系原生质体制备方法,其特征在于,所述步骤(4)包括以下步骤:将酶解完成的玉米根系取出放置于冰上,加入与酶解液等体积的W5溶液终止反应,4℃1000rpm离心3min,收集原生质体;再加入5mL W5溶液轻轻重悬原生质体,4℃1000rpm离心3min;再加入5mL W5溶液重悬原生质体细胞,4℃1000rpm离心3min;加入W5溶液调整细胞浓度至5
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105cells/mL。5.根据权利要求4所述的一种玉米根系原生质体制备方法,其特征在于,所述W5溶液包括以下终浓度的组分:2mM MES、154mM NaCl、125mM CaCl2、5mM KCl。6.根据权利要求1所述的一...
【专利技术属性】
技术研发人员:傅竞也,燕杰,王强,王丽平,陈懿瑶,裴文争,马奔,何林倩,朱丽,
申请(专利权)人:四川农业大学,
类型:发明
国别省市:
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