一种用于治疗心血管的三七干粉外泌体提取方法及应用技术

本发明专利技术属于生物与新医药技术领域，公开了一种用于治疗心血管的三七干粉外泌物提取方法及应用，包括：从市面购买得到三七成品纯干粉，将三七干粉过筛，加入适量PBS，放入匀浆机中制成糊状匀浆，过滤；加入蛋白酶抑制剂，并用1mol/L Tris

【技术实现步骤摘要】
一种用于治疗心血管的三七干粉外泌体提取方法及应用


[0001]本专利技术属于生物与新医药
，尤其涉及一种用于治疗心血管的三七干粉外泌体提取方法及应用。

技术介绍

[0002]外泌体(Exosomes)产生于细胞中的多泡体，是活细胞分泌的直径约为30～150nm的膜性囊泡，密度为1.13
‑
1.19g/ml，有典型的“杯盘”形态。人体中几乎所有类型的细胞均能产生外泌体，近乎于平均每个人体细胞产生1000
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10000个。通常1ml血液中存在1
×
10
12
个外泌体。外泌体具有异质性，即使是同一种细胞分泌的外泌体都有可能具有很大功能区别。外泌体几乎存在于所有的组织、细胞间隙、体液中，包括血液、唾液、尿液和母乳。外泌体携带了参与细胞内信号转导的蛋白、miRNA、lncRNA、circRNA、mRNA以及其降解片段，参与细胞活动的重要调控；在肿瘤转移、免疫调控机制、疾病发生发展、阿兹海默症和免疫疾病等疑难杂症的治疗方面崭露头角，有望成为多种疾病的早期诊断标志物。已有研究报道，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗心血管的三七干粉外泌物提取方法，其特征在于，所述用于心血管疾病治疗的三七干粉提取方法包括：步骤一，从市面购买得到三七成品纯干粉，将三七干粉过筛，加入适量PBS，放入匀浆机中制成糊状匀浆，过滤；步骤二，加入蛋白酶抑制剂，并用1mol/L Tris
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HCl调节pH至7，依次500g、1000g、15000g离心20min，取上清后，再100000g离心1h；步骤三，取沉淀，用20mmol/L Tris
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HCl重悬沉淀，并充分涡旋；步骤四，保存在
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80℃或更低温度下备用检测。2.根据权利要求1所述的用于心血管疾病治疗的三七干粉提取方法，其特征在于，所述将三七干粉过筛溶解，采用差速离心法离心。3.一种实施如权利要求1
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2任意一项所述用于治疗心血管的三七干粉外泌物提取方法的应用，其特征在于，所述用于治疗心血管的三七干粉外泌物提取方法的应用包括三七干粉外泌体的鉴定和三七干粉外泌体对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的表型影响。4.根据权利要求3所述的用于治疗心血管的三七干粉外泌物提取方法的应用，其特征在于，所述三七干粉外泌体的鉴定，包括：(1)外泌体样品透射电镜观察将外泌体取出10μL，吸取样品10μL滴加于铜网上沉淀1min，滤纸吸去浮液，醋酸双氧铀10μL滴加于铜网上沉淀1min，滤纸吸去浮液，常温干燥数分钟，100kv进行电镜检测成像，获得透射电镜成像结果；(2)外泌体样品粒径分析，取冻存样本，25℃水浴解冻，冰上放置，外泌体样本用1
×
PBS进行稀释，直接用于NTA检测。5.根据权利要求3所述的用于治疗心血管的三七干粉外泌物提取方法的应用，其特征在于，所述三七干粉外泌体对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的表型影响，包括：(1)细胞培养，复苏人脐静脉内皮细胞，传代培养待用；(2)HUVECs细胞铺板后，将三七干粉外泌体转染至HUVECs培养24小时检测转染效率；(3)细胞活力检测，...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋立虹，邵瑞飞，滕兆伟，姚梦瑜，曹宇，刘劼，赵婕，程雪梅，罗建丽，陈锐，李昆林，杨童硕，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：