GUCY2C结合分子及其用途制造技术

提供了结合至GUCY2C的单结构域抗体，以及包含所述单结构域抗体的嵌合抗原受体。还提供了包含所述嵌合抗原受体的工程化免疫效应细胞(例如T细胞)。还提供了治疗疾病或病症的药物组合物、试剂盒和方法。试剂盒和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】GUCY2C结合分子及其用途
[0001]本申请要求2020年12月17日提交的国际申请号PCT/CN2020/137164的优先权益，该申请以引用的方式整体并入本文中并用于所有目的。
[0002]1.领域
[0003]本公开涉及抗GUCY2C单结构域抗体、嵌合抗原受体、工程化免疫效应细胞及其使用方法。本公开还涉及用于治疗用途的细胞的激活和扩增，尤其是基于嵌合抗原受体的T细胞免疫疗法。
2.
技术介绍

[0004]结直肠癌是全球最常见的癌症类型之一，占所有肿瘤病例的约10％和所有癌症死亡病例的8.5％。结直肠癌的发病逐渐趋于年轻化，并且40岁以下患者的数量占所有结直肠癌患者的2％
‑
8％。目前，结直肠癌的治疗以手术、放射疗法和化学疗法的组合为主。大多数早期患者经传统疗法治疗后预后良好，但对于转移的结直肠癌患者，预后较差，而且5年存活率很低。当前的治疗不能消除潜伏的残留肿瘤细胞，也不能抑制转移的生长。嵌合抗原受体T(CAR
‑
T)细胞疗法是一种新兴且有前途的癌症免疫疗法。
[0005]促进肠道肿瘤产生的结肠上皮细胞的不平衡稳态是由鸟苷酸环化酶C(GUCY2C；GCC)配体缺乏引起的(Waldman，S.A.和M.Camilleri，Gut，67(8):1543
‑
1552(2018))。GUCY2C是N
‑
连接糖蛋白的鸟苷酸环化酶受体家族的成员，并且是一种肠组织特异性多肽。它在位于小肠至直肠的肠粘膜中的上皮细胞中表达，但在正常的胃和食道组织中不表达。GUCY2C受体可通过环磷酸鸟嘌呤(cGMP)依赖性机制调控小肠粘膜上皮细胞的增殖和分化。经显示，GUCY2C在原发性结直肠癌细胞中稳定表达，并且GUCY2C在转移性结直肠癌细胞中的表达量是正常肠上皮细胞中的表达量的2
‑
10倍(Carrithers等人，Proceedings of the National Academy of Sciences，93(25):14827
‑
14832(1996))，使GUCY2C成为治疗结直肠癌的潜在靶标。本领域需要改良的GUCY2C结合分子和工程化的靶向GUCY2C的细胞，例如用于更有效或高效的CAR
‑
T疗法。
3.
技术实现思路

[0006]一方面，本文提供一种抗GUCY2C单结构域抗体(sdAb)，其包含：(i)含氨基酸序列X1YGMX2的CDR1，其中X1是A、I或V，并且X2是D或G(SEQ ID NO:64)；(ii)含氨基酸序列X3IX4LSGRX5X6YX7DAVX8G的CDR2，其中X3是A、S或T；X4是F、W或Y；X5是S或T；X6是E、N或T；X7是A、S或T；并且X8是K或Q(SEQ ID NO:65)；以及(iii)含氨基酸序列GX9X
10
TAX
11
SX
12
RQY的CDR3，其中X9是A、E或P；X
10
是P或T；X
11
是S或T；并且X
12
是G或V(SEQ ID NO:66)。
[0007]在一些实施方案中，CDR1包含选自由SEQ ID NO:19至26组成的组的氨基酸序列；CDR2包含选自由SEQ ID NO:27至34组成的组的氨基酸序列；并且CDR3包含选自由SEQ ID NO:35至42组成的组的氨基酸序列。
[0008]在一些实施方案中，本文所提供的抗GUCY2C sdAb包含：(i)含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR1；含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的CDR2；和含SEQ ID NO:35的氨基酸序列
的CDR3；(ii)含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR1；含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的CDR2；和含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR3；(iii)含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR1；含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的CDR2；和含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR3；(iv)含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR1；含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR2；和含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR3；(v)含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的CDR1；含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的CDR2；和含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR3；(vi)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的CDR1；含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的CDR2；和含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的CDR3；(vii)含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的CDR1；含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR2；和含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR3；或(viii)含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的CDR1；含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR2；和含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR3。
[0009]在一些实施方案中，本文提供一种抗GUCY2C单结构域抗体(sdAb)，其包含：(i)分别具有如SEQ ID NO:3中所示的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3；(ii)分别具有如SEQ ID NO:4中所示的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3；(iii)分别具有如SEQ ID NO:5中所示的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3；(iv)分别具有如SEQ ID NO:6中所示的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3；(v)分别具有如SEQ ID NO:7中所示的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3；(vi)分别具有如SEQ ID NO:8中所示的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3；(vii)分别具有如SEQ ID NO:9中所示的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3；或(viii)分别具有如SEQ ID NO:10中所示的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施方案中，CDR1、CDR2或CDR3是根据Kabat编号方案、IMGT编号方案、AbM编号方案、Chothia编号方案、Contact编号方案或其组合确定。
[0010]在一些实施方案中，本文所提供的sdAb还包含一个或多个如SEQ ID NO:3至10中的任一者中所示的FR区。
[0011]在一些实施方案中，本文所提供的抗GUCY2C sdAb包含SEQ ID NO:3至10中的任一者的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所提供的抗GUCY2C sdAb包含与SEQ ID NO:3至10中的任一者的序列具有至少75％、80％、85％、9本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗GUCY2C单结构域抗体(sdAb)，其包含：(i)含氨基酸序列X1YGMX2的CDR1，其中X1是A、I或V，并且X2是D或G(SEQ ID NO:64)；(ii)含氨基酸序列X3IX4LSGRX5X6YX7DAVX8G的CDR2，其中X3是A、S或T；X4是F、W或Y；X5是S或T；X6是E、N或T；X7是A、S或T；并且X8是K或Q(SEQ ID NO:65)；以及(iii)含氨基酸序列GX9X
10
TAX
11
SX
12
RQY的CDR3，其中X9是A、E或P；X
10
是P或T；X
11
是S或T；并且X
12
是G或V(SEQ ID NO:66)。2.如权利要求1所述的抗GUCY2C sdAb，其中所述CDR1包含选自由SEQ ID NO:19至26组成的组的氨基酸序列；所述CDR2包含选自由SEQ ID NO:27至34组成的组的氨基酸序列；并且所述CDR3包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10。3.如权利要求1或权利要求2所述的抗GUCY2C sdAb，其包含：(i)含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR1；含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的CDR2；和含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR3；(ii)含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR1；含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的CDR2；和含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR3；(iii)含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR1；含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的CDR2；和含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR3；(iv)含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR1；含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR2；和含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR3；(v)含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的CDR1；含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的CDR2；和含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR3；(vi)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的CDR1；含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的CDR2；和含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的CDR3；(vii)含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的CDR1；含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR2；和含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR3；或(viii)含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的CDR1；含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR2；和含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR3。4.一种抗GUCY2C单结构域抗体(sdAb)，其包含：(i)分别具有如SEQ ID NO:3中所示的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3；(ii)分别具有如SEQ ID NO:4中所示的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3；(iii)分别具有如SEQ ID NO:5中所示的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3；(iv)分别具有如SEQ ID NO:6中所示的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3；(v)分别具有如SEQ ID NO:7中所示的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3；(vi)分别具有如SEQ ID NO:8中所示的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的CDR1、CDR2和
CDR3；(vii)分别具有如SEQ ID NO:9中所示的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3；或(viii)分别具有如SEQ ID NO:10中所示的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3。5.如权利要求4所述的抗GUCY2C sdAb，其中所述CDR1、CDR2或CDR3是根据Kabat编号方案、IMGT编号方案、AbM编号方案、Chothia编号方案、Contact编号方案或其组合确定。6.如权利要求1至5中任一项所述的抗GUCY2C sdAb，其还包含一个或多个如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10中的任一者中所示的FR区。7.如权利要求1至6中任一项所述的抗GUCY2C sdAb，其包含SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10中的任一者的氨基酸序列。8.如权利要求1至6中任一项所述的抗GUCY2C sdAb，其中抗GUCY2C sd...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺玲，汪霖，王维，
申请(专利权)人：合肥梧桐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：