本发明专利技术公开了生物医药技术领域的NFIL3基因的靶向K562细胞在红系造血分化中的应用，所述应用为将NFIL3基因靶向K562细胞应用于红系造血分化中。本发明专利技术首次提出了NFIL3基因与K562细胞产生血红蛋白量有显著的关系。发现上调NFIL3基因的表达，相对应的K562细胞的血红蛋白量减少的效果。同时在设计的NFIL3siRNA载体表达载体可以增加K562细胞的血红蛋白量，提高K562细胞的红系造血分化能力。高K562细胞的红系造血分化能力。高K562细胞的红系造血分化能力。
【技术实现步骤摘要】
NFIL3基因的靶向K562细胞在红系造血分化中的应用
[0001]本专利技术属于生物医药
，具体是指NFIL3基因的靶向K562细胞在红系造血分化中的应用。
技术介绍
[0002]红系分化是指由造血干细胞发育为成熟红细胞的过程。这一过程受到细胞内多种基因和细胞因子的调控，慢性粒细胞性白血病细胞K562是1975年从1例处于原始细胞危象中的慢性髓系白血病患者的胸膜渗出液中建立的，具有费城染色体。K562细胞在某些条件下可以向红系、粒系和巨核细胞系方向分化，表现出相应细胞类型的特异性的成熟标志。
[0003]核因子白介素
‑
3(nuclearfactorinterleukin
‑
3，NFIL3)是一种关键的转录抑制因子，对于NK细胞和先天淋巴细胞的发育至关重要。研究发现NFIL3可通过靶向胰岛素样生长因子2受体抑制缺氧诱导的凋亡细胞死亡，但是现阶段未见有关于NFIL3基因的靶向K562细胞而影响红系造血分化的报道。
技术实现思路
[0004]针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本专利技术提供了NFIL3基因的靶向K562细胞在红系造血分化中的应用，为了解决上述提出的问题，本专利技术提出提供了NFIL3基因的靶向K562细胞在红系造血分化中的应用。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：本专利技术提出了NFIL3基因的靶向K562细胞在红系造血分化中的应用，所述应用为将NFIL3基因靶向K562细胞应用于红系造血分化中。/>[0006]作为本专利技术进一步地，所述应用的方法包括如下步骤：
[0007](1)培养K562细胞，然后使用六孔板对细胞进行铺板；
[0008](2)将在K562细胞中使用试剂盒转染NFIL3表达载体；
[0009](3)在转染NFIL3表达载体24h后，使用终浓度为50μM的Hemin诱导K562细胞向红系分化；
[0010](4)收集诱导不同时间的K562细胞；
[0011](5)检测红系诱导情况及表达情况。
[0012]优选地，所述NFIL3表达载体为NFIL3 siRNA。
[0013]优选地，所述NFIL3表达载体的浓度为5μg/mL。
[0014]进一步地，所述NFIL3基因的表达水平与K562细胞的红系造血分化能力呈负相关。
[0015]另一方面，本专利技术提供了将NFIL3基因用于制备提高K562细胞的红系造血分化的药物中。
[0016]另一方面，本专利技术还提供了一种NFIL3基因的靶向K562细胞在红系造血分化的试剂盒，所述试剂盒包括如下引物序列：
[0017]NFIL3基因正向扩增引物：TCCTCAGTAGAACACACGCAG；
[0018]NFIL3基因反向扩增引物：TCATCTCTTGGCTCCCTTGT。
[0019]本专利技术取得的有益效果如下：
[0020]本申请通过研究分析发现，首次提出了NFIL3基因与K562细胞产生血红蛋白量有显著的关系。发现上调NFIL3基因的表达，相对应的K562细胞的血红蛋白量减少的效果。同时在设计的NFIL3 siRNA表达载体可以增加K562细胞的血红蛋白量，提高K562细胞的红系造血分化能力。
[0021]总之，NFIL3是一个慢性粒细胞性白血病治疗的潜在新靶标。该专利技术对研究白血病的发生、诊断和治疗具有重大意义。
附图说明
[0022]图1为NFIL3的基因表达量结果图；
[0023]图2为血红蛋白检测结果图；
[0024]图3为沉默载体NFIL3 siRNA转染到K562细胞24h后的联苯胺染色结果图；
[0025]图4为NFIL3沉默后与红系分化相关的显著差异表达基因的热图。
[0026]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。
具体实施方式
[0027]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例；基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0028]除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本专利技术中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用，但不能限制本申请的内容。
[0029]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试验材料及试验菌株，如无特殊说明，均为从商业渠道购买得到的。NFIL3siRNA购于广州锐博生物技术有限公司。NFIL3基因的NCBI号为：Gene ID:4783。
[0030]本专利技术提出了NFIL3基因的靶向K562细胞在红系造血分化中的应用，所述应用为将NFIL3基因靶向K562细胞应用于红系造血分化中。
[0031]作为本专利技术进一步地，所述应用的方法包括如下步骤：
[0032](1)培养K562细胞，然后使用六孔板对细胞进行铺板；
[0033](2)将在K562细胞中使用试剂盒转染NFIL3表达载体；
[0034](3)在转染NFIL3表达载体24h后，使用终浓度为50μM的Hemin诱导K562细胞向红系分化；
[0035](4)收集诱导不同时间的K562细胞；
[0036](5)检测红系诱导情况及表达情况。
[0037]优选地，所述NFIL3表达载体为NFIL3 siRNA。
[0038]优选地，所述NFIL3表达载体的浓度为5μg/mL。
[0039]进一步地，所述NFIL3基因的表达水平与K562细胞的红系造血分化能力呈负相关。
[0040]另一方面，本专利技术提供了将NFIL3基因用于制备提高K562细胞的红系造血分化的药物中。
[0041]另一方面，本专利技术还提供了一种NFIL3基因的靶向K562细胞在红系造血分化的试剂盒，所述试剂盒包括如下引物序列：
[0042]NFIL3基因正向扩增引物：TCCTCAGTAGAACACACGCAG；
[0043]NFIL3基因反向扩增引物：TCATCTCTTGGCTCCCTTGT。
[0044]实施例1
[0045](1)复苏K562细胞
[0046]提前照半个小时台子，在液氮罐中取出K562细胞于37℃水浴锅中快速解冻，转移到生物安全柜中操作，并将细胞转至15mL离心管中，以1000rpm离心4min，弃去上清液。移入细胞培养皿中，从上到下和从侧边轻轻摇动培养皿，使细胞均匀分布，最后放入培养箱中进行培养。
[0047](2)传代细胞
[0048]从培养箱中取出细胞，观察其形态及密度(约80％)，吹打转移至离心管中本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.NFIL3基因的靶向K562细胞在红系造血分化中的应用，其特征在于：所述应用为将NFIL3基因靶向K562细胞应用于红系造血分化中。2.根据权利要求1所述的NFIL3基因的靶向K562细胞在红系造血分化中的应用，其特征在于：所述应用的方法包括如下步骤：(1)培养K562细胞，然后使用六孔板对细胞进行铺板；(2)将在K562细胞中使用试剂盒转染NFIL3表达载体；(3)在转染NFIL3表达载体24h后，使用终浓度为50μM的Hemin诱导K562细胞向红系分化；(4)收集诱导不同时间的K562细胞；(5)检测红系诱导情况及表达情况。3.根据权利要求2所述的NFIL3基因的靶向K562细胞在红系造血分化中的应用，其特征在于：所述NFIL3表达载体为NFIL3siRNA。4.根据权利要求3所述的NFIL3基因的靶向K562细胞在红系造...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔蕊，于海川，杜晓妍，陈孟姚，白启荣，
申请(专利权)人：新乡医学院，
类型：发明
国别省市：
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