一种人骨髓间充质干细胞永生化的方法技术

本发明专利技术公开了一种人骨髓间充质干细胞永生化的方法，涉及细胞永生化技术领域。本发明专利技术包括如下步骤：获取样本：在无菌条件下从人体骨髓中提取骨髓间充质干细胞；基因修饰：采用CRISPR/Cas9技术，针对ABCG2基因进行基因敲除或突变，从而抑制其表达；筛选：筛选出高度自我更新且具有多重分化潜能的骨髓间充质干细胞；永生化培养：将筛选出的骨髓间充质干细胞纳入由培养基、生长因子和细胞基质组成的永生化培养系统中。本发明专利技术通过基因修饰和筛选出高度自我更新且具有多重分化潜能的骨髓间充质干细胞，并将其纳入永生化培养系统中，实现干细胞的永生化，该方法具有简单高效、成本低廉、应用范围广泛等优点。范围广泛等优点。范围广泛等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种人骨髓间充质干细胞永生化的方法


[0001]本专利技术属于细胞永生化领域，具体地说，涉及一种人骨髓间充质干细胞永生化的方法。

技术介绍

[0002]骨髓间充质干细胞是从人体骨髓中分离出来的一类多能干细胞，具有广泛的分化潜能，近年来，骨髓间充质干细胞已经成为众多研究领域的热点，如组织工程、干细胞治疗等。
[0003]然而，传统的骨髓间充质干细胞在体内存在着自我更新周期限制、分化能力降低等问题，这限制了其在临床应用中的广泛应用。
[0004]有鉴于此，特提出一种人骨髓间充质干细胞永生化的方法，以解决上述弊端。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供一种人骨髓间充质干细胞永生化的方法。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术采用技术方案的基本构思是：
[0007]一种人骨髓间充质干细胞永生化的方法，包括如下步骤：
[0008]获取样本：在无菌条件下从人体骨髓中提取骨髓间充质干细胞；
[0009]基因修饰：采用CRISPR/Cas9技术，针本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人骨髓间充质干细胞永生化的方法，其特征在于，包括如下步骤：获取样本：在无菌条件下从人体骨髓中提取骨髓间充质干细胞；基因修饰：采用CRISPR/Cas9技术，针对ABCG2基因进行基因敲除或突变，从而抑制其表达；筛选：筛选出高度自我更新且具有多重分化潜能的骨髓间充质干细胞；永生化培养：将筛选出的骨髓间充质干细胞纳入由培养基、生长因子和细胞基质组成的永生化培养系统中；细胞永生化实验：对培养所得的骨髓间充质干细胞进行实验测试。2.根据权利要求1所述的一种人骨髓间充质干细胞永生化的方法，其特征在于，在基因修饰的过程中，先合成一段含有目标序列的sgRNA，并与Cas9蛋白结合，形成sgRNA/Cas9复合物，然后将该复合物导入到靶细胞中，与目标DNA序列发生剪切反应，实现基因敲除或突变。3.根据权利要求1所述的一种人骨髓间充质干细胞永生化的方法，其特征在于，在筛选的过程中，将绿色荧光蛋白基因导入到靶细胞中，使其表达绿色荧光蛋白形成绿色荧光标记，然后，通过流式细胞仪将绿色荧光蛋白高表达的干细胞群体筛选出来。4.根据权利要求1所述的一种人骨髓间充质干细胞永生化的方法，其特征在于，在细胞永生化实验的过程中，使用对照病毒进行MOI摸索，通过荧光表达情况，选择合适的MOI进行正式转染实验，将细胞接种至24孔板，分别更换不同浓度梯度的含药培养基，根据细胞死亡情况确定药筛浓度。5.根据权利要求4所述的一种人骨髓间充质干细胞永生化的方法，其特征在于，细胞接收后观察状态，常规传代至对数期生长，细胞计数后取3
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105cells接种...

【专利技术属性】
技术研发人员：张舒林，魏慧敏，胡芳琼，张则宇，万武，
申请(专利权)人：上海依赛洛森生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：