基于CBE介导的LGMD2G小鼠模型、构建方法及应用技术

本发明专利技术涉及基于CBE介导的LGMD2G小鼠模型、构建方法及应用，涉及动物基因工程技术领域，利用CBE单碱基基因编辑系统对小鼠Tcap基因c.244位点进行基因敲入，进而使所述小鼠的Tcap基因c.244位点由碱基C突变为碱基T，得到LGMD2G小鼠模型；所述CBE单碱基基因编辑系统包括sgRNA和BE4max mRNA；所述sgRNA的序列为SEQ ID NO.1。本发明专利技术成功的构建的LGMD2G小鼠(c.244T/T)模型，便于更加深入的探索LGMD2G的发病机理，筛选LGMD2G的治疗靶点，评估LGMD2G治疗策略的有效性和安全性、为开发普适性药物提供实验手段和技术。提供实验手段和技术。提供实验手段和技术。

【技术实现步骤摘要】
基于CBE介导的LGMD2G小鼠模型、构建方法及应用


[0001]本专利技术涉及动物基因工程
，具体涉及基于CBE介导的LGMD2G小鼠模型、构建方法及应用。

技术介绍

[0002]肢带型肌营养不良症2G(简称LGMD2G)是一类具有肢带肌无力、肌肉萎缩临床表现的常染色体隐性遗传的家族性疾病。患者的发病年龄在10岁以内，其临床主要表现为下肢近端盆带肌和下肢远端同等受累，上肢主要是近端受累；下肢远端主要为胫前肌萎缩无力，因而患者出现足下垂和足尖走路；腓肠肌多数肥大，但部分患者出现萎缩；肩胛肌萎缩出现翼状肩胛，通常没有颈肌和面肌受累或轻微受累；出现脊柱前突，踝、膝、肘关节的挛缩；血CK数倍到数十倍升高，但疾病晚期CK可以正常。多数患者在40岁后出现轮椅依赖。目前尚无有效治疗方法。
[0003]基因组编辑(简称为基因编辑)技术是利用人工核酸酶对基因组进行靶向修饰的遗传工程技术，是当今生命科学领域的研究热点。CRISPR/Cas9基因编辑系统虽然提高了基因敲除及定点修饰(包括定点突变及基因插入等)的效率，但是基于同源重组机制的基因定点突变本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于CBE介导的LGMD2G小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：利用CBE单碱基基因编辑系统对小鼠Tcap基因c.244位点进行基因敲入，进而使所述小鼠的Tcap基因c.244位点由碱基C突变为碱基T，得到LGMD2G小鼠模型；所述CBE单碱基基因编辑系统包括sgRNA和BE4max mRNA；所述sgRNA的序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述一种基于CBE介导的LGMD2G小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括使用所述sgRNA和所述BE4max mRNA的混合物的步骤。3.根据权利要求1或2所述基于CBE介导的LGMD2G小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下具体步骤：1)将所述sgRNA和所述BE4max mRNA混合，得到注射液，即为CBE单碱基基因编辑系统；2)采用显微注射的方法将所述注射液注射入小鼠受精卵的胞质中，得到注射后受精卵；3)将所述注射后受精卵移植入代孕母鼠的输卵管内，发育完成后，得到F1代小鼠；4)将所述F1代小鼠连续繁殖至少2代，并从后代中鉴定获得LGMD2G小鼠模...

【专利技术属性】
技术研发人员：李娜，宋亚锋，李善刚，陈丽娇，刘琳琳，杨戌妤，邓莉，李卓，肖红，夏侯志楷，张子莲，谢奇，
申请(专利权)人：北京体育大学，
类型：发明
国别省市：