表达人源化Fcα受体的小鼠制造技术

本文提供了与从位于小鼠白细胞受体复合物(LRC)中的FcαR基因座表达人或人源化Fcα受体(FcαR)的小鼠相关的方法和组合物。在某些实施方案中，此类小鼠可用于包含人IgA Fc的治疗剂的体内测试(例如，此类治疗剂的药代动力学和/或药效学特性及给药方案的测试)。本文还提供了使用此类小鼠的方法、来自此类小鼠的细胞、制备此类小鼠的方法以及包含与此类小鼠相同的遗传修饰的ES细胞。本文提供了与从位于小鼠白细胞受体复合物(LRC)中的FcαR基因座表达人或人源化Fcα受体(FcαR)的小鼠相关的方法和组合物。在某些实施方案中，此类小鼠可用于包含人IgA Fc的治疗剂的体内测试(例如，此类治疗剂的药代动力学和/或药效学特性及给药方案的测试)。本文还提供了使用此类小鼠的方法、来自此类小鼠的细胞、制备此类小鼠的方法以及包含与此类小鼠相同的遗传修饰的ES细胞。胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达人源化Fc
α
受体的小鼠
[0001]相关申请
[0002]本申请要求2020年12月16日提交的美国临时申请第63/126,326号的优先权，所述美国临时申请在此通过引用整体并入。

技术介绍

[0003]由于与较大的哺乳动物模型(例如灵长类动物)相比，小鼠体型小，生理学特征明确，且维护费用相对低廉，因此小鼠是治疗剂临床前测试的基本体内模型。在进行人临床研究之前，小鼠模型通常用于评估治疗剂的毒性和药代动力学。尽管有这些优点，抗体和Fc融合蛋白的体内测试仍有严重的缺点，因为这些治疗剂在小鼠中的表现与在人体中的表现不同。这对于在小鼠中测试基于IgA的治疗尤其如此，因为它们不表达用于结合IgA抗体的Fc受体。因此，小鼠模型尚未被广泛表征或用于预测基于IgA的治疗剂的安全性、功效和最佳剂量。需要新型小鼠模型和方法，其允许对基于IgA的治疗剂进行精确的临床前测试，该测试可预测此类治疗剂在人患者中的特性。

技术实现思路

[0004]本文提供了与表达人或人源化Fcα受体(FcαR)的小鼠相关的方法和组合物，以及与在此类小鼠中对包含人IgA Fc的治疗剂进行体内测试相关的方法和组合物(例如，对此类治疗剂的药代动力学和/或药效动力学特性以及给药方案进行测试)。如本文所述，小鼠是用于测试治疗性抗体和Fc融合蛋白的便捷的动物模型，这是由于它们体积小、生理学特征明确以及易于遗传修饰。不幸的是，由于野生型小鼠缺乏FcαR，含有人IgA Fc区的药物(如IgA抗体和Fcα融合蛋白)在向此类小鼠施用时与向人施用时相比，通常表现出非常不同的药代动力学和药效动力学特性。因此，本文提供的小鼠可用作用于开发、筛选和测试用于治疗用途的人IgA抗体和Fcα融合蛋白的体内系统。
[0005]在某些方面，本文提供了一种小鼠，其在基因组中包含位于小鼠白细胞受体复合物(LRC)中的Fcα受体(FcαR)基因座，其中FcαR基因座(诸如人或人源化FcαR基因座)包含编码FcαR多肽的核酸序列，所述FcαR多肽包含人胞外结构域和人或啮齿类动物胞质结构域。在一些实施方案中，小鼠在小鼠嗜中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和树突细胞(例如浆细胞样树突细胞)上表达FcαR多肽。在一些实施方案中，嗜中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和/或树突细胞(例如浆细胞样树突细胞)来自小鼠的血液。在一些实施方案中，嗜中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和树突细胞(例如浆细胞样树突细胞)来自小鼠的脾脏。
[0006]在一些方面，本文提供了一种小鼠胚胎干细胞(ES细胞)，在其基因组中包含位于小鼠基因组的白细胞受体复合物(LRC)中的Fcα受体(FcαR)基因座，其中FcαR基因座包含编码FcαR多肽的核酸序列，所述FcαR多肽包含人胞外结构域和人或啮齿类动物胞质结构域。
[0007]在一些实施方案中，FcαR基因座位于Tthy1蛋白和Rdh13蛋白的基因基因座之间的基因间区域。在一些实施方案中，FcαR基因座位于Lilra5蛋白和Gp6蛋白的基因基因座之间
的基因间区域。在一些实施方案中，FcαR基因座位于Pira6蛋白和Gp6蛋白的基因基因座之间的基因间区域。在一些实施方案中，FcαR基因座位于Pira6蛋白和Ncr1蛋白的基因基因座之间的基因间区域。在一些实施方案中，FcαR基因座位于Pira6蛋白和Ncr1蛋白的编码核酸序列之间的基因间区域。在一些实施方案中，基因间区域是Pira6和Ncr1基因座之间的54kb区域。在一些实施方案中，FcαR基因座位于小鼠7号染色体(+链，GRCm38组装)上的坐标4,303,905
–
4,312,280之间。
[0008]在一些实施方案中，FcαR基因座包含编码人FcαR多肽的核酸序列。在一些实施方案中，FcαR基因座包含人Fcα受体基因的人外显子1
‑
5。在一些实施方案中，FcαR基因座包含啮齿类动物(非小鼠)FcαR外显子1的非编码部分、人FcαR外显子1和2、人FcαR外显子3和4以及啮齿类动物(非小鼠)FcαR外显子5的编码部分。在一些实施方案中，人或人源化FcαR受体基因座包含在人19号染色体(+链，GRCh38组装)上坐标54,862,297和54,906,185之间发现的基因组序列。在一些实施方案中，FcαR基因座还包含存在于人KIR3DL2基因中的核酸序列。在一些实施方案中，基因座还包含存在于人NCR1基因的5
’
UTR中的核酸序列。
[0009]在一些实施方案中，小鼠或小鼠ES细胞对于FcαR基因座是杂合的。在一些实施方案中，小鼠或小鼠ES细胞对于FcαR基因座是纯合的。
[0010]在一些实施方案中，任何上述方面或实施方案所述的小鼠或小鼠ES细胞在其基因组中还包含人或人源化Fcγ受体(FcγR)基因座、人或人源化IgH基因座、人或人源化Igκ基因座、人或人源化Igλ基因座、人或人源化FcRn基因座、人或人源化β2M基因座和/或人或人源化FcεR1α基因座。在一些实施方案中，小鼠或小鼠ES细胞对于人或人源化FcγR基因座、人或人源化IgH基因座、人或人源化Igκ基因座、人或人源化Igλ基因座、人或人源化FcRn基因座、人或人源化β2M基因座和/或人或人源化FcεR1α基因座是杂合的。在一些实施方案中，小鼠或小鼠ES细胞对于人或人源化FcγR基因座、人或人源化IgH基因座、人或人源化Igκ基因座、人或人源化Igλ基因座、人或人源化FcRn基因座、人或人源化β2M基因座和/或人或人源化FcεR1α基因座是纯合的。
[0011]在一些实施方案中，包含本文所述各种实施方案的FcαR基因座的小鼠或小鼠ES细胞在其基因组中包含人或人源化FcγR基因座，该基因座包含编码人或人源化FcγR的核酸序列。在一些实施方案中，人或人源化FcγR基因座包含编码一种或多种低亲和力FcγR的核酸序列，所述低亲和力FcγR选自Fcγ受体2a(FcγR2a)、Fcγ受体2b(FcγR2b)、Fcγ受体3a(FcγR3a)、Fcγ受体3b(FcγR3b)和/或Fcγ受体2c(FcγR2c)。在一些实施方案中，人或人源化FcγR基因座包含编码一种或多种FcγR的核酸序列，所述FcγR选自人或人源化Fcγ受体1α(FcγR1a)、Fcγ受体2a(FcγR2a)、Fcγ受体2b(FcγR2b)、Fcγ受体3a(FcγR3a)、Fcγ受体3b(FcγR3b)和/或Fcγ受体2c(FcγR2c)。在一些实施方案中，人或人源化FcγR包含人胞外结构域。在一些实施方案中，人或人源化FcγR包含小鼠跨膜结构域。在一些实施方案中，人或人源化FcγR包含人跨膜结构域。在一些实施方案中，人或人源化FcγR包含小鼠胞质结构域。在一些实施方案中，人或人源化FcγR包含人胞质结构域。在一些实施方案中，人或人源化FcγR基因座位于内源小鼠FcγR基因座。在一些实施方案中，编码人或人源化FcγR的核酸序列替换了内源小鼠FcγR基因的全部或部分。在一些实施方案中，编本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种小鼠，其在基因组中包含位于小鼠白细胞受体复合物(LRC)中的Fcα受体(FcαR)基因座，其中所述FcαR基因座包含编码FcαR多肽的核酸序列，所述FcαR多肽包含人胞外结构域和人或啮齿类动物胞质结构域。2.如权利要求1所述的小鼠，其中所述FcαR基因座位于Tthy1蛋白和Rdh13蛋白的基因基因座之间的基因间区域。3.如权利要求1或2所述的小鼠，其中所述FcαR基因座位于Lilra5蛋白和Gp6蛋白的基因基因座之间的基因间区域。4.如权利要求1
‑
3中任一项所述的小鼠，其中所述FcαR基因座位于Pira6蛋白和Ncr1蛋白的基因基因座之间的基因间区域，诸如Pira6蛋白和Ncr1蛋白的编码核酸序列之间的基因间区域。5.如权利要求4所述的小鼠，其中所述基因间区域是所述Pira6和Ncr1基因座之间的54kb区域。6.如权利要求1
‑
5中任一项所述的小鼠，其中所述FcαR基因座位于小鼠7号染色体(+链，GRCm38组装)上的坐标4,303,905
–
4,312,280之间。7.如权利要求1
‑
6中任一项所述的小鼠，其中所述FcαR基因座包含编码人FcαR多肽的核酸序列。8.如权利要求1
‑
7中任一项所述的小鼠，其中所述FcαR基因座包含人Fcα受体基因的人外显子1
‑
5。9.如权利要求1
‑
6中任一项所述的小鼠，其中所述FcαR基因座包含非小鼠啮齿类动物FcαR外显子1的非编码部分、人FcαR外显子1和2、人FcαR外显子3和4以及非小鼠啮齿类动物FcαR外显子5的编码部分。10.如权利要求7或8所述的小鼠，其中所述人或人源化FcαR受体基因座包含在人19号染色体(+链，GRCh38组装)上坐标54,862,297和54,906,185之间存在的基因组序列。11.如权利要求7或8所述的小鼠，其中所述FcαR基因座还包含存在于人KIR3DL2基因中的核酸序列，和/或存在于人NCR1基因的5
’
UTR中的核酸序列。12.如权利要求1
‑
11中任一项所述的小鼠，其中所述小鼠在小鼠嗜中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和树突细胞(例如浆细胞样树突细胞)上表达所述FcαR多肽。13.如权利要求1
‑
12中任一项所述的小鼠，其中所述小鼠对于所述FcαR基因座是杂合的或纯合的。14.如权利要求1
‑
13中任一项所述的小鼠，在其基因组中还包含人或人源化Fcγ受体(FcγR)基因座、人或人源化IgH基因座、人或人源化Igκ基因座、人或人源化Igλ基因座、人或人源化FcRn基因座、人或人源化β2M基因座和/或人或人源化FcεR1α基因座。15.一种小鼠胚胎干细胞(ES细胞)，在其基因组中包含位于小鼠基因组的白细胞受体复合物(LRC)中的Fcα受体(FcαR)基因座，其中所述FcαR基因座包含编码FcαR多肽的核酸序列，所述FcαR多肽包含人胞外结构域和人或啮齿类动物胞质结构域。16.如权利要求15所述的小鼠ES细胞，其中所述FcαR基因座位于Tthy1蛋白和Rdh13蛋白的基因基因座之间的基因间区域。17.如权利要求15或16所述的小鼠ES细胞，其中所述FcαR基因座位于Lilra5蛋白和Gp6蛋白的基因基因座之间的基因间区域。
18.如权利要求15
‑
17中任一项所述的小鼠ES细胞，其中所述Fcα受体(FcαR)基因座位于Pira6蛋白和Ncr1蛋白的基因基因座之间的基因间区域，诸如Pira6蛋白和Ncr1蛋白的编码核酸序列之间的基因间区域。19.如权利要求18所述的小鼠ES细胞，其中所述基因间区域是Pira6和Ncr1基因座之间的54kb区域。20.如权利要求15
‑
19中任一项所述的小鼠ES细胞，其中所述FcαR基因座位于小鼠7号染色体(+链，GRCm38组装)上的坐标4,303,905
–
4,312,280之间。21.如权利要求15
‑
20中任一项所述的小鼠ES细胞，其中所述FcαR基因座包含编码人FcαR多肽的核酸序列。22.如权利要求15
‑
21中任一项所述的小鼠ES细胞，其中所述FcαR基因座包含人Fcα受体基因的人外显子1
‑
5。23.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：