【技术实现步骤摘要】
一种同步检测建兰花叶病毒、齿兰环斑病毒和建兰环斑病毒的引物探针及其应用
[0001]本申请涉及病原体检测
,尤其涉及一种同步检测建兰花叶病毒CymMV、齿兰环斑病毒ORSV和建兰环斑病毒CymRSV的引物探针及其应用。
技术介绍
[0002]蝴蝶兰等兰科植物有重要的观赏价值和经济价值,但是近年来随着蝴蝶兰等兰科植物产品的国内外贸易和种质交流频率的增加,病毒病的发生有蔓延趋势,加速了一些种传病害如病毒病等的发生和蔓延;目前世界上已有30多种病毒可感染兰科植物,其中建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspotvirus,ORSV)在兰花中最常见,分布最广,危害最严重,以一种或两种病毒复合侵染的占多数,和其他病毒共同侵染造成三种病毒复合侵染的现象也有发生。建兰环斑病毒(Cymbidium ringspotvirus,CymRSV)也是感染较严重的病毒种类之一,目前主要在欧洲、北美洲、南美洲等地发生较严重。目前国际上对蝴蝶兰等花卉的病毒病还未有防治的有效药剂,为培养健康优质的种苗以及观赏价值高的花卉产品,需要对感染病毒病的植株进行早期发现、早期隔离处理,因此建立一套高效、灵敏,可同步检测CymMV、ORSV和CymRSV的方法非常重要。
[0003]目前,病毒的检测方法包括指示植物法、酶联免疫吸附法、电子显微镜技术、逆转录环介导的等温扩增、RT
‑
PCR和实时荧光定量PCR(qRT
‑
PC ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种同步检测建兰花叶病毒CymMV、齿兰环斑病毒ORSV和建兰环斑病毒CymRSV的引物探针,其特征在于,所述引物和探针包括:CymMV的上游引物CymMV
‑
F、下游引物CymMV
‑
F和探针CymMV
‑
Probe;ORSV的上游引物ORSV
‑
F、下游引物ORSV
‑
R和探针ORSV
‑
Probe;CymRSV的上游引物CymRSV
‑
F、下游引物CymRSV
‑
R和探针CymRSV
‑
Probe;引物序列和探针序列具体如下:CymMV的引物对和探针为:CymMV的上游引物CymMV
‑
F:5
’‑
CTGATGCTGGCCACTAACGA
‑3’
;CymMV的下游引物CymMV
‑
R:5
’‑
CACGTTCACGGTCAGTAGGG
‑3’
;CymMV的探针CymMV
‑
Probe:FAM
‑
CCGCCAACTGGGCCAAGGCT
‑
BHQ1;ORSV的引物对和探针为:ORSV的上游引物ORSV
‑
F:5
’‑
TTGACCAGTAGGTTCCCTGC
‑3’
;ORSV的下游引物ORSV
‑
R:5
’‑
TAGTTGTCGGATTCTGCGGAT
‑3’
;ORSV的探针ORSV
‑
Probe:HEX
‑
TGGTTACTTCAGAGTTTATCGCTATG
‑
BHQ1;CymRSV的引物对和探针为:CymRSV的上游引物CymRSV
‑
F:5
’‑
CGCAGTGGGTGACTTATT
‑3’
;CymRSV的下游引物CymRSV
‑
R:5
’‑
CGTCGTGGCTGTGGTAG
‑3’
;CymRSV的探针CymRSV
‑
Probe:Cy5
‑
CACAGTAACCTTCTACGAACCGCAACCG
‑
BHQ3。2.一种实时荧光定量PCR扩增体系,其特征在于,所述扩增体系包括:PremixExTaq(2
×
)混合液12.5μL和RNasefreeddH2O3.7μL。3.一种同步检测建兰花叶病毒CymMV、齿兰环斑病毒ORSV和建兰环斑病毒CymRSV的引物探针在对建兰花叶病毒CymMV、齿兰环斑病毒ORSV、建兰环斑病毒CymRSV进行同步检测的检测方法中的应用,其特征在于,所述检测方法采用权利要求1所述的引物和探针,以及权利要求2所述的实时荧光定量PCR扩增体系。4.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于,所述方法包括:(1)提取待测样品中的总RNA,合成cDNA,并以cDNA为模板;(2)利用权利要求1所述的引物和探针在权利要求2所述的实时荧光定量PCR扩增体系中进行实时荧光定量PCR扩增循环反应,分别得到所述CymMV、ORSV以及CymRSV的扩增曲线以及Cq值;(3)构建CymMV、ORSV以及CymRSV的质粒标准品,并以其为模版,获取所述CymMV、ORSV以及CymRSV三种病毒的同步多重检测标准曲线,通过拟合分别得到所述...
【专利技术属性】
技术研发人员:王丽花,孙爱青,吴学尉,杨秀梅,张艺萍,瞿素萍,许凤,苏艳,张丽芳,蒋亚莲,
申请(专利权)人:云南大学,
类型:发明
国别省市:
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