MOTOR基因在制备用于治疗脓毒症的药物中的应用和药物制造技术

本发明专利技术公开了一种hsa_circRNA基因MOTOR在制备用于治疗脓毒症的药物中的应用和药物，属于circRNA编码小肽的基因技术领域。根据hsa_circRNA_056558的基因序列，通过分子克隆构建过表达hsa_circRNA_056558的载体，将该载体转染到细胞中，并通过超速离心收集该细胞产生的外泌体，外泌体中包含MOTOR。MOTOR可增强单核细胞的功能，用于脓毒症免疫调节治疗。用于脓毒症免疫调节治疗。用于脓毒症免疫调节治疗。

【技术实现步骤摘要】
MOTOR基因在制备用于治疗脓毒症的药物中的应用和药物


[0001]本专利技术涉及circRNA编码小肽的基因
，具体涉及一种MOTOR基因在制备用于治疗脓毒症的药物中的应用和药物。

技术介绍

[0002]脓毒症(sepsis)是机体对感染的反应失调而导致危及生命的器官功能障碍，给人类健康带来了巨大威胁。我国多中心横断面研究显示：我国脓毒症患者约占ICU住院人数的20.6％，90天病死率高达35.5％。因此，深入研究脓毒症的发病机制和寻找新的治疗靶标分子，既是国家和社会重大疾病的防治需求，也是临床面临的巨大挑战。
[0003]免疫失衡是脓毒症发生发展的根本机制。虽然过度炎症反应导致的多器官损伤是脓毒症致病的重要环节，但脓毒症的高炎状态往往伴随着长期而持久的免疫抑制。单核细胞LPS耐受是脓毒症免疫抑制的关键特征。LPS耐受的单核细胞内化杀伤病原微生物的能力降低，在二次感染时不能做出有效的反应，使脓毒症患者二次感染的风险增加，而二次感染恰恰是脓毒症患者死亡的最主要原因。但是单核细胞发生LPS耐受的确切机制尚未阐明，目前缺乏调控单核细胞LPS耐受的分子药物，这是亟待重点攻关的核心问题。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的不足，本专利技术提出了hsa_circRNA基因MOTOR在制备用于治疗脓毒症的药物中的应用，MOTOR逆转脓毒症单核细胞LPS耐受，延长小鼠的生存时间。
[0005]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0006]本申请第一方面提出MOTOR基因或其药用衍生物在制备治疗脓毒症的药物中的应用，所述MOTOR基因的核苷酸序列如SEQ NO.1所示。
[0007]进一步地，所述药物以适合于在使用者的外周血释放MOTOR基因或其药用衍生物的剂型使用。
[0008]本申请还提供一种药物，所述药物包括含有MOTOR基因的外泌体；所述MOTOR基因的核苷酸序列如SEQ NO.1所示。
[0009]将本专利技术的药物加入常规辅料，按照常规工艺，可以制成药学上可接受的各种剂型，如片剂、胶囊剂、口服液剂、锭剂、注射剂、软膏剂、颗粒剂或各种缓控释制剂等。
[0010]本专利技术药物的载体是药学领域中可得到的常见类型，包括：黏合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稀释剂、稳定剂、悬浮剂或基质等。
[0011]优选地，所述剂型为注射剂。
[0012]本专利技术的有益效果：
[0013]本申请的hsa_circRNA_056558的基因序列能够逆转脓毒症时单核细胞LPS耐受，促进细菌感染下单细细胞分泌的趋化因子、促炎细胞因子和抗原提呈基因的表达，调节脓毒症患者的固有免疫和适应性免疫功能，预防二次感染，提高生存时间。
附图说明
[0014]下面结合附图对本专利技术作进一步的说明。
[0015]图1为本申请的MOTOR定位于细胞质的小肽结构示意图；
[0016]图2为本申请的敲低MOTOR抑制炎症因子和趋化因子的表达图；
[0017]图3为本申请的过表达MOTOR促进炎症因子和趋化因子的表达图；
[0018]图4为本申请的Motor外泌体的粒径分析图。
具体实施方式
[0019]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0020]在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本专利技术的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。
[0021]本专利技术采用以下步骤进行验证MOTOR对脓毒症时单核细胞LPS耐受的影响，具体步骤参见附图1
‑
4；
[0022]实施例1MOTOR是具有编码能力的circRNA，能翻译出137aa的小肽
[0023]1.1通过PCR和Sanger鉴定MOTOR是一个circRNA，利用生物信息学预测MOTOR的编码能力，通过Westernblot和免疫荧光技术验证MOTOR的编码能力和亚细胞定位，发现MOTOR可翻译出定位于细胞质的小肽(见图1)。
[0024]1.1.1PCR及Sanger测序实验
[0025](1)RNA提取：
[0026]a)准备所需试剂与耗材：Trizol；氯仿；异丙醇；DEPC水；Rnase
‑
free不同规格枪头；1.5mLRnase
‑
freep EP管
[0027]b)操作具体如下：收集人单核细胞THP1置于EP管中，每个EP管加入1ml的Trizol后，用移液器反复吹打至看不到细胞沉淀；离心机预冷至4℃，每个EP管中加入0.2ml氯仿，涡旋15s，室温静置5min；随后设置离心条件为12000rcf，离心15分钟；离心结束后分为三层，上层为无色水状RNA，中间层与下层为有机苯酚氯仿层，小心取出EP管，垂直吸取上清0.4ml，加入0.5ml的异丙醇，颠倒混匀十次，室温静置10分钟；设置离心条件为12000rcf，10分钟；随后弃去上清，每个EP管中加入DEPC水配置的75％的乙醇，颠倒混匀；设置离心条件为7500rcf，5分钟，取出弃上清；瞬离15秒，弃上清，保留RNA沉淀；随后加入DEPC水30ul溶解沉淀后使用分光光度计测RNA浓度，随后使用DEPC水调整浓度至1ng/ul。
[0028](2)逆转录PCR：使用逆转录试剂盒(PrimeScript
TM
RT reagent Kit with gDNA Eraser，TAKARA，RR047A)对500ng的RNA进行逆转录PCR。
[0029](3)PCR：将上一步逆转录得到的cDNA使用Rnase
‑
free水稀释三倍，按照下面的体系配置：
[0030]2×
PCRbufferforKODFX25.0μlPrimer1(10μM)0.4μl
Primer2(10μM)0.4μl2mMdNTPs10.0μlTemplateDNA/cDNA2.0μlKODFX(1.0U/μl)1.0μlddH2OTo20.0μl
[0031]PCR引物序列如下：
[0032]MOTOR
‑
FGGCAGAAGTGAAAGATACAACCMOTOR
‑
RACTCCTCCTGCCAGATTACAGAT
[0033]将配置好PCR体系后使用Bio
‑
Rad PCR仪进行反应，将PCR产物送上海生工进行Sanger测序(附图1)。
[0034]1.1.2Western Blot实验
[0035](1)提蛋白实验：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.MOTOR基因或其药用衍生物在制备治疗脓毒症的药物中的应用，其特征在于，所述MOTOR基因的核苷酸序列如SEQNO.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物以适合于在使用者的外周血释放MOTOR基因或其药用衍生物的剂型使用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述剂型为片剂、胶囊剂、服液剂、锭剂、气雾剂、注射剂、软膏剂、颗粒剂。4.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄蔚，邱海波，方可，谢剑锋，刘玲，杨毅，杨然，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：