本发明专利技术公开了一种利用组织培养进行耐旱芦竹快速筛选的方法，该利用组织培养进行耐旱芦竹快速筛选的方法包括如下步骤：步骤一、山梨醇模拟水分胁迫；步骤二、材料的培养和处理；步骤三、生长指标测定。本发明专利技术相较于现有技术，创新的以山梨醇作为筛选剂，同时利用组织培养技术进行体外筛选的方法，首先选用山梨醇，可以一定程度规避因为PEG含有有毒杂质，同时高密度阻滞培养基中O2的传递，从而减缓对植物的生长的影响；同时利用组织培养技术相对于盆栽和大田试验，试验条件可控，不受外界条件的影响，而且可以在有效的空间和时间内筛选大量样本，节约时间、空间和成本。空间和成本。
【技术实现步骤摘要】
一种利用组织培养进行耐旱芦竹快速筛选的方法
[0001]本专利技术涉及植物抗逆筛选领域，尤其涉及一种利用组织培养进行耐旱芦竹快速筛选的方法。
技术介绍
[0002]芦竹(Arundo donax)是禾本科、芦竹属多年生植物，根状茎发达，茎秆高大，分蘖能力强，是可以在废弃的边际土地大规模种植的能源植物，可替代燃煤用于火力发电，也可以通过热转化技术用来制取氢气、天然气、生物炭等，从而替代化石能源负碳生产高端能源和高端化工品。
[0003]生物和非生物压力对植物生长构成重大威胁。因此，努力培育耐胁迫植物对提高其适应性至关重要。干旱是限制能源植物芦竹生长和分布的重要因素。筛选耐旱抗性品种/种质是克服这个问题的有效方法，从而可以充分利用干旱地区的边际土地获得植物能源的原料。
[0004]现有甘薯耐干旱品种的快速选育方法(申请公布号CN 105010127 A)其是研发了一种快速选育耐旱品种的方法。该技术只是适用于甘薯，由于芦竹耐干旱的能力与甘薯不同，若将该方法施用到芦竹上，将无法对芦竹不同品种进行筛选。而本专利技术正是针对芦竹对于干旱的耐受情况而研发的，适合芦竹的品种筛选。
[0005]为了了解PEG
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8000模拟干旱胁迫对11个马铃薯品种的组培苗生长指标的影响，邓珍等人(PEG
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8000模拟干旱胁迫对11个马铃薯品种的组培苗生长指标的影响(华北农学报，2014)。以11个马铃薯主栽品种的脱毒组培苗为试验材料，PEG
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8000浓度为15％时，11个品种间的差异最大。对11个马铃薯品种的干旱敏感性进行聚类分析，11个马铃薯品种可分为3类，综合聚类分析和植株含水量的结果，筛选到坝薯10号和高原7号2个耐旱品种。该技术是研究PEG
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8000模拟干旱胁迫对马铃薯品种的组培苗生长指标的影响，由于芦竹作为禾本科多年生高大草本对于PEG
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8000的响应与马铃薯不同，若将该方法施用到芦竹上，将无法对芦竹不同品种进行筛选。
技术实现思路
[0006]为了克服现有技术中相关产品的不足，本专利技术提出一种利用组织培养进行耐旱芦竹快速筛选的方法。
[0007]本专利技术提供了一种利用组织培养进行耐旱芦竹快速筛选的方法，包括如下步骤：
[0008]步骤一、山梨醇模拟水分胁迫：将0
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0.6M的山梨醇加入MS培养基，同时添加萘乙酸0.5mg/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，高温灭菌，其中利用添加山梨醇的培养基进行模拟干旱胁迫处理，未添加山梨醇的培养基作为对照；
[0009]步骤二、材料的培养和处理：剪取芦竹组培苗生长状态一致，高度2
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3cm的嫩芽，接种在含山梨醇浓度分别为0
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0.6M的MS固体培养基中，培养室中培养，温度25
±
2℃，光周期为12h/d光照条件下培养4周，分别选择三份种质ad01、ad02、ad03进行处理，其中ad01收集
于降雨量小于300mm的偏干旱地区，ad02、ad03均来自于沿海地区；
[0010]步骤三、生长指标测定：干旱胁迫4周后，用无菌水把植物根部含山梨醇的培养基清洗干净，用吸水纸吸去附着的水分，分别测定相应的生长指标，包括根长、根数、鲜重、干重以及株高，将根与茎叶部分从根基部剪开，测量根长和株高，用分析天平称取鲜重并记录，将植株置于80℃烘箱内烘干24h，至恒重为止，称取干重并记录。
[0011]在本专利技术的某些实施方式中，包括如下步骤：
[0012]步骤一、山梨醇模拟水分胁迫：将0.2M的山梨醇加入MS培养基，同时添加萘乙酸0.5mg/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，高温灭菌，其中利用添加0.2M山梨醇的培养基进行模拟干旱胁迫处理，未添加山梨醇的培养基作为对照；
[0013]步骤二、材料的培养和处理：剪取芦竹组培苗生长状态一致，高度2
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3cm的嫩芽，接种在含山梨醇浓度分别为0
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0.6M的MS固体培养基中，培养室中培养，温度27℃，光周期为12h/d光照条件下培养4周，分别选择三份种质ad01、ad02、ad03进行处理，其中ad01收集于降雨量小于300mm的偏干旱地区，ad02、ad03均来自于沿海地区，每个培养瓶接种10株幼苗，每份种质接种6瓶组培苗；
[0014]步骤三、生长指标测定：干旱胁迫4周后，用无菌水把植物根部含山梨醇的培养基清洗干净，用吸水纸吸去附着的水分，分别测定相应的生长指标，包括根长、根数、鲜重、干重以及株高，将根与茎叶部分从根基部剪开，测量根长和株高，用分析天平称取鲜重并记录，将植株置于80℃烘箱内烘干24h，至恒重为止，称取干重并记录。
[0015]在本专利技术的某些实施方式中，包括如下步骤：
[0016]步骤一、山梨醇模拟水分胁迫：将0.4M的山梨醇加入MS培养基，同时添加萘乙酸0.5mg/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，高温灭菌，其中利用添加0.4M山梨醇的培养基进行模拟干旱胁迫处理，未添加山梨醇的培养基作为对照；
[0017]步骤二、材料的培养和处理：剪取芦竹组培苗生长状态一致，高度2
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3cm的嫩芽，接种在含山梨醇浓度分别为0
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0.6M的MS固体培养基中，培养室中培养，温度25℃，光周期为12h/d光照条件下培养4周，分别选择三份种质ad01、ad02、ad03进行处理，其中ad01收集于降雨量小于300mm的偏干旱地区，ad02、ad03均来自于沿海地区，每个培养瓶接种10株幼苗，每份种质接种6瓶组培苗；
[0018]步骤三、生长指标测定：干旱胁迫4周后，用无菌水把植物根部含山梨醇的培养基清洗干净，用吸水纸吸去附着的水分，分别测定相应的生长指标，包括根长、根数、鲜重、干重以及株高，将根与茎叶部分从根基部剪开，测量根长和株高，用分析天平称取鲜重并记录，将植株置于80℃烘箱内烘干24h，至恒重为止，称取干重并记录。
[0019]在本专利技术的某些实施方式中，包括如下步骤：
[0020]步骤一、山梨醇模拟水分胁迫：将0.6M的山梨醇加入MS培养基，同时添加萘乙酸0.5mg/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，高温灭菌，其中利用添加0.6M山梨醇的培养基进行模拟干旱胁迫处理，未添加山梨醇的培养基作为对照；
[0021]步骤二、材料的培养和处理：剪取芦竹组培苗生长状态一致，高度2
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3cm的嫩芽，接种在含山梨醇浓度分别为0
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0.6M的MS固体培养基中，培养室中培养，温度23℃，光周期为12h/d光照条件下培养4周，分别选择三份种质ad01、ad02、ad03进行处理，其中ad01收集于降雨量小于300mm的偏干旱地区，ad02、ad03均来自于沿海地区；
[0022]步骤三、生长指标测定：干旱胁迫4周后，用无菌水把植物根部含山梨醇的培养基清洗干净，用吸水纸吸去附着的水分，分别测定相应的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种利用组织培养进行耐旱芦竹快速筛选的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、山梨醇模拟水分胁迫：将0
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0.6M的山梨醇加入MS培养基，同时添加萘乙酸0.5mg/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，高温灭菌，其中利用添加山梨醇的培养基进行模拟干旱胁迫处理，未添加山梨醇的培养基作为对照；步骤二、材料的培养和处理：剪取芦竹组培苗生长状态一致，高度2
‑
3cm的嫩芽，接种在含山梨醇浓度分别为0
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0.6M的MS固体培养基中，培养室中培养，温度25
±
2℃，光周期为12h/d光照条件下培养4周，分别选择三份种质ad01、ad02、ad03进行处理，其中ad01收集于降雨量小于300mm的偏干旱地区，ad02、ad03均来自于沿海地区；步骤三、生长指标测定：干旱胁迫4周后，用无菌水把植物根部含山梨醇的培养基清洗干净，用吸水纸吸去附着的水分，分别测定相应的生长指标，包括根长、根数、鲜重、干重以及株高，将根与茎叶部分从根基部剪开，测量根长和株高，用分析天平称取鲜重并记录，将植株置于80℃烘箱内烘干24h，至恒重为止，称取干重并记录。2.根据权利要求1所述的利用组织培养进行耐旱芦竹快速筛选的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、山梨醇模拟水分胁迫：将0.2M的山梨醇加入MS培养基，同时添加萘乙酸0.5mg/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，高温灭菌，其中利用添加0.2M山梨醇的培养基进行模拟干旱胁迫处理，未添加山梨醇的培养基作为对照；步骤二、材料的培养和处理：剪取芦竹组培苗生长状态一致，高度2
‑
3cm的嫩芽，接种在含山梨醇浓度分别为0
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0.6M的MS固体培养基中，培养室中培养，温度27℃，光周期为12h/d光照条件下培养4周，分别选择三份种质ad01、ad02、ad03进行处理，其中ad01收集于降雨量小于300mm的偏干旱地区，ad02、ad03均来自于沿海地区，每个培养瓶接种10株幼苗，每份种质接种6瓶组培苗；步骤三、生长指标测定：干旱胁迫4周后，用无菌水把植物根部含山梨醇的培养基清洗干净，用吸水纸吸去附着的水分，分别测定相应的生长指标，包括根长、根数、鲜重、干重以及株高，将根与茎叶部分从根基部剪开，测量根长和株高，用分析天平称取鲜重并记录，将植株置于80℃烘箱内烘干24h，至恒重为止，称取干重并...
【专利技术属性】
技术研发人员：韩晓红，张方静，李泊玉，王兆强，
申请(专利权)人：武汉兰多生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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