本申请公开了一种抗Claudin18.2重组单克隆抗体及其制备与应用，属于生物技术领域。该抗Claudin18.2重组单克隆抗体是以SEQ ID NO.1所示的人工合成多肽作为免疫原，免疫新西兰大白兔并经细胞分选和有限稀释等步骤获得，包括重链可变区及轻链可变区，相比市售的抗人Claudin18.2单克隆抗体，本申请提供的重组单克隆抗体，与Claudin18.2蛋白具有更高亲和力，可高特异性和高灵敏度地识别和检测肿瘤细胞或免疫细胞上Claudin18.2蛋白的表达，可应用于免疫组织化学、间接ELISA、流式细胞术等检测与筛查领域，有利于获得更准确的检测和评估结果，并降低检测成本和背景信号的干扰。并降低检测成本和背景信号的干扰。并降低检测成本和背景信号的干扰。
【技术实现步骤摘要】
NO.8所示的氨基酸序列，轻链可变区包括SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列。
[0011]进一步地，上述一种抗Claudin18.2重组单克隆抗体，重链可变区包括SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列，轻链可变区包括SEQ ID NO.12所示的氨基酸序列。
[0012]进一步地，上述一种抗Claudin18.2重组单克隆抗体，重链可变区包括SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列，轻链可变区包括SEQ ID NO.13所示的氨基酸序列。
[0013]本申请还提供了一种核酸，该核酸编码上述抗Claudin18.2重组单克隆抗体。
[0014]进一步地，上述编码抗Claudin18.2重组单克隆抗体的核酸，包括：
[0015]如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，用于编码上述抗Claudin18.2重组兔单克隆抗体的包括SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列的重链可变区；
[0016]如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，用于编码上述抗Claudin18.2重组兔单克隆抗体的包括SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列的重链可变区；
[0017]如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列，用于编码上述抗Claudin18.2重组兔单克隆抗体的包括SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列的重链可变区；
[0018]如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列，用于编码上述抗Claudin18.2重组兔单克隆抗体的包括SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列的轻链可变区。
[0019]如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列，用于编码上述抗Claudin18.2重组兔单克隆抗体的包括SEQ ID NO.12所示的氨基酸序列的轻链可变区。
[0020]如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列，用于编码上述抗Claudin18.2重组兔单克隆抗体的包括SEQ ID NO.13所示的氨基酸序列的轻链可变区。
[0021]本申请还提供了一种重组表达载体，该重组表达载体含有上述编码抗Claudin18.2重组单克隆抗体的核酸，可以表达抗Claudin18.2重组单克隆抗体。
[0022]进一步地，上述重组表达载体包括：含有上述编码抗Claudin18.2重组单克隆抗体的核酸的pcDNA3.4++质粒。
[0023]本申请还提供了一种重组表达细胞，该重组表达细胞包括上述重组表达载体或上述编码抗Claudin18.2重组单克隆抗体的核酸，可以表达抗Claudin18.2重组单克隆抗体。
[0024]进一步地，上述重组表达细胞包括：293细胞系。
[0025]本申请还提供了上述核酸、重组表达载体、重组表达细胞在制备抗Claudin18.2重组单克隆抗体中的应用。
[0026]本申请还提供了一种上述抗Claudin18.2重组单克隆抗体的制备方法，包括：采用上述重组表达载体转染细胞获得重组表达细胞；培养转染后的重组表达细胞；收集上清液并纯化，得到抗Claudin18.2重组单克隆抗体。
[0027]本申请还提供了一种标记抗体，包括上述抗Claudin18.2重组单克隆抗体，并偶联了酶、荧光素、磁珠等偶联剂。
[0028]本申请还提供了上述抗Claudin18.2重组单克隆抗体、核酸、重组表达载体、重组表达细胞或抗Claudin18.2重组单克隆抗体的制备方法在检测Claudin18.2蛋白分子，或制备检测Claudin18.2蛋白分子设备中的应用。
[0029]进一步地，上述检测Claudin18.2蛋白分子包括免疫组织化学、ELISA、免疫荧光、流式细胞术等检测方法中任意一种或多种。
[0030]进一步地，上述检测Claudin18.2蛋白分子设备包括试剂盒、抗体偶联、抗体芯片
等中的任意一种或多种。
[0031]本申请还提供了一种检测Claudin18.2蛋白分子的试剂盒，该试剂盒包括上述抗Claudin18.2重组单克隆抗体，以抗Claudin18.2重组单克隆抗体为一抗。
[0032]进一步地，上述试剂盒为流式细胞检测试剂盒，包括上述抗Claudin18.2重组单克隆抗体，还包括流式细胞检测试剂。
[0033]进一步地，上述流式细胞检测试剂盒还包括：荧光标记二抗、PBS、牛血清白蛋白、Human IgG、7
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AAD等试剂。
[0034]进一步地，上述试剂盒为免疫组织化学检测试剂盒包括：包括上述抗Claudin18.2重组单克隆抗体，还包括免疫组织化学检测试剂。
[0035]进一步地，上述免疫组织化学检测试剂盒包括：HRP酶标二抗、EDTA修复液、过氧化氢酶封闭液、DAB浓缩液、DAB缓冲液、苏木素、返蓝液等。
[0036]本申请还提供了上述一种检测Claudin18.2蛋白分子的试剂盒在检测Claudin18.2蛋白分子中的应用。
[0037]进一步地，上述流式细胞检测试剂盒应用包括：细胞复苏、FC受体阻断、一抗孵育、二抗孵育、7
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AAD活性染色、上机收集数据等。
[0038]进一步地，上述免疫组织化学检测试剂盒应用包括：脱蜡、抗原修复、内源性过氧化物酶失活、封闭、一抗孵育、二抗孵育、DAB显色、复染、脱水、封片和镜检等。
[0039]3.有益效果
[0040]本申请与现有技术相比，其有益效果在于：
[0041](1)本申请提供的提供一种抗Claudin18.2重组单克隆抗体及其制备与应用，与Claudin18.2蛋白分子的结合具有高特异性和高灵敏度，能够特异性地识别和检测肿瘤组织上Claudin18.2蛋白的表达，在检测Claudin18.2蛋白时呈阳性高表达，因此该抗体可应用于免疫组织化学、间接ELISA、抗体芯片制备、流式细胞术、免疫荧光等检测与筛查领域，有利于获得准确的评估和检测结果。
[0042](2)本申请提供的提供一种兔抗人/鼠Claudin18.2重组单克隆抗体及其制备与应用，由于其特异性好、与Claudin18.1不存在交叉、阳性信号强等特点，更容易区分胃癌特异性的阳性，有利于靶向治疗的伴随诊断精准性。
附图说明
[0043]图1为免疫组织化学检测本申请制备的抗Claudin18.2重组单克隆抗体SDT
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102
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clone A，SDT
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102
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clone B和SDT
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102
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clone C在人胃癌组织、人胃正常组织和人肺组织上的表达与市售的进口抗体比较结果，验证其只特异性识别Claudin18.2。
[0044]图2为免疫荧光检测本申请的抗Claudin18.2重组单克隆抗体SDT
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102
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clone A，SDT
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102
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clone B和SDT
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种抗Claudin18.2重组单克隆抗体，其特征在于，所述重组单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区包括SEQ ID NO.8
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10所示的氨基酸序列中的一种，轻链可变区包括SEQ ID NO.11
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13所示的氨基酸序列中的一种。2.根据权利要求1所述的一种抗Claudin18.2重组单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区包括SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，轻链可变区包括SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列；或所述重链可变区包括SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列，所述轻链可变区包括SEQ ID NO.12所示的氨基酸序列；或所述重链可变区包括SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列，所述轻链可变区包括SEQ ID NO.13所示的氨基酸序列。3.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求2所述的抗Claudin18.2重组单克隆抗体的重链可变区和/或轻链可变区。4.根据权利要求3所述的一种核酸，其特征在于，所述核酸包括SEQ ID NO.2
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7所示的核苷酸序列中的一种或多种。5.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体含有权利要求3或4所述的核酸。6.一种重组表达细胞，其特征在于，所述重组表达细胞包括权利要求5所述的重组表达载体，或权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘红阳，杨琼，魏力，皇甫虹姣，骆燕，
申请(专利权)人：杭州斯达特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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