抗人CD31兔单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术属于抗体制备技术领域，尤其涉及抗人CD31兔单克隆抗体及其应用。所述抗人CD31兔单克隆抗体的轻链互补决定区1

【技术实现步骤摘要】
抗人CD31兔单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及抗体制备
，特别涉及抗人CD31兔单克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]CD31也被称为血管内皮细胞粘附分子
‑
1(PECAM
‑
1)，是相对分子质约为130kDa左右I型跨膜糖蛋白，正常表达于内皮细胞、循环的血小板、单核细胞、中性粒细胞、T细胞、B细胞、树突状细胞的表面，是参与血小板黏附和聚集的关键因子，对整合素的功能具上调作用，同时在白细胞跨内皮细胞迁移、调节血小板功能、抑制细胞凋亡、介导信号转到等过程中发挥重要作用。由于在发育和成熟个体的所有血管内皮细胞都高度表达CD31，因此，CD31常被用作血管内皮细胞的标志物，可通过标记CD31蛋白精确定位血管组织。
[0003]越来越多的研究表明，CD31的异常表达可引发多种疾病，例如在一些炎性疾病包括动脉粥样硬化和败血症中观察到可溶性CD31的循环水平增加，在某些肿瘤也观察到CD31的表达，如上皮样血管内皮瘤、上皮样肉瘤样血管内皮瘤、其他血管肿瘤和组织细胞性恶性肿瘤。有研究发现CD31在肾癌、肝癌、肺癌、胰腺癌和乳腺癌等肿瘤血管中过表达，其异常高水平被认为与肿瘤的恶性程度成正比，可反应肿瘤生长的程度，并意味着较差的预后，且CD31在非血管源性的肿瘤不表达，因此，CD31对于研究血管源性肿瘤具有非常高的特异性和敏感性，又被用于识别良/恶性血管源性肿瘤以及肿瘤间质中血管生成状况。
[0004]基于CD31的诊断和标记价值，目前临床上常用免疫学方法检测其表达状况，核心为开发特异性结合CD31蛋白的单克隆抗体，抗体性能的优劣直接决定着整个检测的灵敏度和特异性。因此，研制出一种结合特异性较高的针对CD31蛋白的单克隆抗体以在分子、细胞水平特异性研究CD31表达水平具有重要的意义。
[0005]目前，虽然已有专利公开了靶向CD13的单克隆抗体的开发，但主要应用于免疫组织化学法(IHC)、免疫印迹法(WB)等的研究，尚未有满足流式细胞分析应用的抗体，这是因为流式细胞检测过程中，目标抗原含量低且干扰因素多，抗体的特异性和/或亲和性偏低容易导致非特异性结合，使得背景噪音明显，故而市面上少有满足流式细胞分析应用的CD31单克隆抗体。因此开发一种能满足流式细胞分析应用场景的高特异性、高灵敏度的CD31单克隆抗体对于临床诊断和科学研究有重要意义。

技术实现思路

[0006]针对现有技术中抗CD31单克隆抗体的特异性和/或亲和性差导致难以用于流式细胞分析领域等问题，本专利技术提供了抗人CD31兔单克隆抗体，并提供了该单克隆抗体在制备人CD31蛋白检测试剂和/或试剂盒中的应用，尤其是的流式细胞分析检测试剂和/或试剂盒。
[0007]为实现上述目的，本专利技术具体通过以下技术方案实现：
[0008]本专利技术第一方面提供了一种抗人CD31兔单克隆抗体，包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区和所述重链可变区包括互补决定区，其中，轻链互补决定区1(CDR1)、轻
链互补决定区2(CDR2)和轻链互补决定区3(CDR3)的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示；重链互补决定区1、重链互补决定区2和重链互补决定区3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。
[0009]进一步地，所述轻链可变区的氨基酸序列SEQ ID NO.2所示，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
[0010]进一步地，所述抗人CD31兔单克隆抗体还包括轻链恒定区和重链恒定区，所述轻链恒定区和所述轻链可变区构成完整轻链，所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述重链恒定区和所述重链可变区构成完整重链，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
[0011]进一步地，所述重链恒定区的亚型为IgG型，所述轻链恒定区的亚型为κ型。
[0012]进一步地，所述抗人CD31兔单克隆抗体为全长抗体或具有免疫活性的抗体片段，所述抗体片段选自Fab片段、F(ab)2片段、Fv片段、(Fv)2片段、scFv片段和sc(Fv)2片段中的至少一种。
[0013]本专利技术第二方面提供了一种核酸分子，所述核酸分子用于编码如上所述的抗人CD31兔单克隆抗体。
[0014]进一步地，编码轻链可变区的核酸序列如SEQ.NO.11所示或是与之互补的序列，编码重链可变区的核酸序列如SEQ.NO.12所示或是与之互补的序列。
[0015]更进一步，编码轻链的核酸序列如SEQ.NO.13所示或是与之互补的序列，编码重链的核酸序列如SEQ.NO.14所示或是与之互补的序列。
[0016]本专利技术第三方面提供了一种重组载体，所述重组载体携带如上所述的核酸分子。
[0017]本专利技术第四方面提供了如上所述的抗人CD31兔单克隆抗体、如上所述的核酸分子、如上所述的重组载体在制备人CD31蛋白检测试剂和/或检测试剂盒中的应用，检测方法包括酶免疫分析法、酶联免疫吸附法、酶联免疫斑点法、免疫组织化学法、免疫荧光法、免疫印迹法和流式细胞分析法中的至少一种。
[0018]进一步地，检测方法为流式细胞分析方法。
[0019]本专利技术的优点及积极效果为：
[0020]本专利技术提供的具备上述CDR的抗人CD31蛋白的兔单克隆抗体能够特异性识别和结合重组表达以及人血清或组织细胞表面的天然CD31蛋白，应用于人CD31蛋白的免疫学检测，尤其是采用流式细胞分析检测时，与细胞表达的人CD31蛋白结合之后荧光跃迁良好，阳性信号强且单一，而且无非特异性结合，证实该抗体具有良好的特异性和高的亲和力，且对多种荧光都具有良好的适应性，本专利技术的抗体能够作为流式细胞分析的抗体原材料，用于定性和定量研究组织或细胞内的CD31蛋白的分布、表达或生物学功能。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0022]图1为本专利技术实施例1采用酶联免疫吸附法检测CD31蛋白免疫后的新西兰大白兔
的血清效价图；
[0023]图2为本专利技术实施例1新西兰大白兔免疫血清与阳性细胞HEL结合的流式细胞分析检测图，从左之右，血清稀释度分别为1：500、1：200和1：100，图中红色曲线为阴性对照，蓝色曲线为同型对照，黄色曲线为待测血清；
[0024]图3为本专利技术实施例1新西兰大白兔免疫血清与阴性性细胞SK
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BR
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3结合的流式细胞分析检测图，从左之右，血清稀释度分别为1：500、1：200和1：100，图中红色曲线为阴性对照，蓝色曲线为同型对照，黄色曲线为待测血清；
[0025]图4本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人CD31兔单克隆抗体，其特征在于，包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区和所述重链可变区均包括互补决定区，其中：轻链互补决定区1、轻链互补决定区2和轻链互补决定区3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示；重链互补决定区1、重链互补决定区2和重链互补决定区3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。2.根据权利要求1所述的抗人CD31兔单克隆抗体，其特征在于，所述轻链可变区的氨基酸序列SEQ ID NO.2所示，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。3.根据权利要求2所述的抗人CD31兔单克隆抗体，其特征在于，还包括轻链恒定区和重链恒定区，所述轻链恒定区的亚型为κ型，所述重链恒定区的亚型为IgG型；所述轻链恒定区和所述轻链可变区构成完整轻链，所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述重链恒定区和所述重链可变区构成完整重链，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。4.根据权利要求1或2所述的抗人CD31兔单克隆抗体，其特征在于，所述抗人CD31兔单克隆抗体为全长抗体或具有免疫活性的抗体片段；所述抗体片段选自Fab片段、...

【专利技术属性】
技术研发人员：王雪，吴海，郭夏阳，孙倩，黄谧，黄长青，
申请(专利权)人：武汉爱博泰克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：