一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养方法技术

本发明专利技术涉及间充质干细胞培养技术领域，且公开了一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养方法，包括下列步骤：S1：取新鲜采集的人腿部脂肪组织液体100ml静置6

【技术实现步骤摘要】
一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养方法


[0001]本专利技术涉及间充质干细胞培养
，更具体地说，尤其涉及一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养方法。

技术介绍

[0002]自体脂肪间充质干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种APSC多能细胞，是一类具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞。自体干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，改变了人类疾病的应对方法，医学界称为“万用细胞”。
[0003]自体脂肪间充质干细胞是“种子细胞”。动物体就是通过自体干细胞的分裂来实现细胞的更新，从而保证动物体持续生长发育的。当遭遇疾病，某一器官罢工或受伤时，自体干细胞会第一时间作出反应，促进分化成身体所需的专属细胞，从而提供足够数量的专属细胞帮助修复和愈合。在神经系统疾病、免疫系统疾病等诸多疾病的治疗有着广泛的应用。并且欧洲已经把这项技术运用到抗衰老和疾病早期预防当中。
[0004]自体脂肪间充质干细胞移植具备其它注射材料所无可比拟的良好效果，而目前自体脂肪间充质干细胞的诱化分导用于毛囊活化修复的方法基本缺失或效果不佳；为此，我们提出一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养方法。

技术实现思路

[0005]针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本专利技术提供一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养方法，有效的解决了目前市场上的自体脂肪来源用于毛囊活化的间充质干细胞培养效果较差的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养方法，包括下列步骤：
[0007]S1：取新鲜采集的人腿部脂肪组织液体100ml静置6
‑
10min后分层，移除下层富含红细胞的液体，保留上层脂肪组织液体；
[0008]S2：用添加有青霉素和链霉素的β
‑
甘油磷酸钠溶液50ml对上层脂肪组织液体进行重置分层，期间加入5
‑
10ml的碳酸氢钠溶液保障脂肪组织液体的PH维持在7.1
‑
7.5，与此同时采用离心洗涤去除红细胞后的脂肪组织；
[0009]S3：将洗涤后的脂肪组织充分剪碎至1mm3大小，加入培养液置于37℃、5％的二氧化碳培养箱中静置培养，期间补充添加培养液；
[0010]S4：待脂肪组织培养生长融合至80％左右时，这时加入重组胰蛋白酶消化，待细胞缩小后用胰酶抑制剂终止消化，并随后离心洗涤2
‑
3遍，将收获的自体脂肪间充质干细胞与细胞外基质沉淀混合；
[0011]S5：将获得的自体脂肪间充质干细胞定为P0代并加入诱导培养基中并进行传代培养，并对传代培养的培养液24小时后换液1次，以后每3天换液1次；
[0012]S6：在细胞生长融合达到第一预设百分率时，经胰蛋白酶消化，进行二次传代培养；取经过二次传代培养的第三代脂肪间充质干细胞进行培养，在生长至培养瓶底的第二预设百分率的面积时，获得成品用于毛囊活化的自体脂肪间充质干细胞；
[0013]优选的，所述青霉素和链霉素在β
‑
甘油磷酸钠溶液的浓度为100
‑
150U/ml，且所述β
‑
甘油磷酸钠溶液的浓度为120mg/L，所述碳酸氢钠溶液的浓度为2200mg/L。
[0014]优选的，离心洗涤去除红细胞后的脂肪组织的离心转速为100
‑
1500r/min，离心时间为5
‑
8min。
[0015]优选的，所述培养液中含有的FBS所占百分比为15％，且所述培养液中含有青霉素、链霉素、D
‑
葡萄糖、丙酮酸钠、L
‑
谷氨酰胺、β
‑
甘油磷酸钠和抗坏血酸等物质。
[0016]优选的，所述FBS组成成分含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等。
[0017]本专利技术的技术效果和优点：
[0018]本专利技术成功从人腿部脂肪组织提取并培养了用于毛囊活化的脂肪间充质干细胞，该方法简单，效率高，制备的脂肪间充质干细胞具有毛囊活化和修复的功能，为将来实现毛囊移植和毛囊修复打下了良好的基础；通过使用低浓度FBS和极低浓度细胞因子的组合就能达到与使用高FBS浓度培养试剂持平甚至更好的促进细胞增殖的作用，可以利用此试剂将自体脂肪间充质干细胞有效诱导分化为用于毛囊活化的细胞，既证实了自体脂肪间充质干细胞的分化能力，又可得到大量用于毛囊活化的细胞，利于用于毛囊活化的细胞完成对人体毛囊的修复，利用本专利技术的培养试剂培养的细胞，不同批次之间的差异小，成本低，利于分离细胞下游产品，安全性好，适合于用作基因工程相关产物的病毒宿主、表达载体等。
具体实施方式
[0019]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0020]实施例一
[0021]一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养方法，包括下列步骤：
[0022]S1：取新鲜采集的人腿部脂肪组织液体100ml静置6
‑
10min后分层，移除下层富含红细胞的液体，保留上层脂肪组织液体；
[0023]S2：用添加有青霉素和链霉素的β
‑
甘油磷酸钠溶液50ml对上层脂肪组织液体进行重置分层，期间加入5
‑
10ml的碳酸氢钠溶液保障脂肪组织液体的PH维持在7.1
‑
7.5，与此同时采用离心洗涤去除红细胞后的脂肪组织；
[0024]S3：将洗涤后的脂肪组织充分剪碎至1mm3大小，加入培养液置于37℃、5％的二氧化碳培养箱中静置培养，期间补充添加培养液；
[0025]S4：待脂肪组织培养生长融合至80％左右时，这时加入重组胰蛋白酶消化，待细胞缩小后用胰酶抑制剂终止消化，并随后离心洗涤2
‑
3遍，将收获的自体脂肪间充质干细胞与细胞外基质沉淀混合；
[0026]S5：将获得的自体脂肪间充质干细胞定为P0代并加入诱导培养基中并进行传代培
养，并对传代培养的培养液24小时后换液1次，以后每3天换液1次；
[0027]S6：在细胞生长融合达到第一预设百分率时，经胰蛋白酶消化，进行二次传代培养；取经过二次传代培养的第三代脂肪间充质干细胞进行培养，在生长至培养瓶底的第二预设百分率的面积时，获得成品用于毛囊活化的自体脂肪间充质干细胞；
[0028]进一步的，所述青霉素和链霉素在β
‑
甘油磷酸钠溶液的浓度为100
‑
150U/ml，且所述β
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甘油磷酸钠溶液的浓度为120mg/L，所述碳酸氢钠溶液的浓度为2200mg/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养方法，其特征在于：包括下列步骤：S1：取新鲜采集的人腿部脂肪组织液体100ml静置6
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10min后分层，移除下层富含红细胞的液体，保留上层脂肪组织液体；S2：用添加有青霉素和链霉素的β
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甘油磷酸钠溶液50ml对上层脂肪组织液体进行重置分层，期间加入5
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10ml的碳酸氢钠溶液保障脂肪组织液体的PH维持在7.1
‑
7.5，与此同时采用离心洗涤去除红细胞后的脂肪组织；S3：将洗涤后的脂肪组织充分剪碎至1mm3大小，加入培养液置于37℃，5％的二氧化碳培养箱中静置培养，期间补充添加培养液；S4：待脂肪组织培养生长融合至80％左右时，这时加入重组胰蛋白酶消化，待细胞缩小后用胰酶抑制剂终止消化，并随后离心洗涤2
‑
3遍，将收获的自体脂肪间充质干细胞与细胞外基质沉淀混合；S5：将获得的自体脂肪间充质干细胞定为P0代并加入诱导培养基中并进行传代培养，并对传代培养的培养液24小时后换液1次，以后每3天换液1次；S6：在细胞生长融合达到第一预设百分率时，经胰蛋白酶消化，进行二次传代培养；取经过二次传代培养的第三代脂肪间充质干细胞进行培养，在生...

【专利技术属性】
技术研发人员：何文丽，
申请(专利权)人：上海中赛德康生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：