用于检测或诊断新型布尼亚病毒的单克隆抗体、其应用及产品制造技术

本发明专利技术涉及用于检测或诊断新型布尼亚病毒的单克隆抗体、其应用及产品。该单克隆抗体选自单克隆抗体SF

【技术实现步骤摘要】
用于检测或诊断新型布尼亚病毒的单克隆抗体、其应用及产品


[0001]本专利技术涉及一种用于检测或诊断新型布尼亚病毒的单克隆抗体，其相关应用，以及相关产品(如试剂盒等)，属于生物医药


技术介绍

[0002]新型布尼亚病毒又称发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus，SFTSV)，会引发疾病发热伴血小板减少综合征，这是一种严重危害人类健康的烈性传染病。该病毒于2009年在中国首次分离，2011年首次报道
[1]，目前主要流行于我国中部和东部至少16个省，日本、韩国和美国均有相关病例报道
[2
‑
4]。该病毒主要通过蜱虫传播，密切接触患者、直接接触患者血液、体液及气溶胶等的医务人员或其陪护者均可被感染
[5
‑
8]。目前研究证实了人与人接触传播为新型布尼亚病毒的传播途径之一
[9,10]。
[0003]新型布尼亚病毒为布尼亚病毒科，白蛉病毒属，分节段的单负链RNA病毒，病毒颗粒呈球形，直径为80～100nm，内有病毒基因组RNA、核壳蛋白和RNA依赖的RNA聚合酶蛋白所组成的RNP复合物，外有脂质包膜，表面可见刺突
[11]。迄今为止人类对新型布尼亚病毒感染既无特效治疗药物，也无安全有效疫苗，人群普遍易感。国内报道危重患者死亡率极高(6.3％
‑
30％)
[12]，而韩国报道的病死率更高32.6％
[13]，总死亡率达18％
[14]。危重患者即使治疗康复，但仍因该病导致终身严重后遗症。大量临床数据表明，早期诊断、及时临床救治可以大大减少发热伴血小板减少综合征重症患者的发生率和病死率
[15,16]。但由于多数SFTSV感染者早期缺乏特异的临床表现，仅有发热、血小板和白细胞减少，胃肠道，神经及多功能脏器损伤等临床症状，难以和其它出血热病毒如人类无形体病、出血热、钩端螺旋体病、莱姆病相区分。因此，迫切需要开发快速、可靠、标准化的SFTSV早期、特异的抗原、抗体检测试剂盒，为我国应对SFTS突发疫情提供检测试剂储备，平时为临床救治、流行病学疫情的监测与预警提供技术方法。
[0004]目前SFTSV的诊断方法主要包括病毒分离、血清学抗体和核酸检测。病毒分离是SFTSV感染实验室诊断的金标准，但病毒分离需要在三级生物安全实验室进行，分离时间长，很难达到早期诊断，更不利于基层单位的推广；当前，SFTSV感染诊断主要依赖于抗体诊断，但有文献报道，IgM在SFTSV患者发热11天后，血清抗体滴度仍然很低，甚至还检测不到抗体。Wu等
[17]建立的N
‑
IgM检测方法在发病6天内检测抗体的阳性率为18％，发病7
‑
12天检测的阳性率只有58％。虽然目前已经有商品化的抗体检测方法，该方法对动物血清和患者血清检测结果与中和实验结果完全一致
[18]。但是抗体检测方法始终无法达到早期诊断的目的，且抗体诊断与布尼亚病毒其他成员间存在交叉现象，在疫区中往往是几种出血热病毒同时流行，血清学抗体诊断方法显然已经无法满足早期、确切诊断的目的。而核酸检测方法，虽然可以达到早期诊断的目的，但目前来说，核酸检测方法仍然无法做到大规模的快速筛查。正如新型冠状病毒引起的肺炎，为达到早期诊断，早期隔离，使用核酸检测方法进行
progression of severe fever with thrombocytopenia syndrome.Ticks Tick Borne Dis.2019.10(3):639
‑
646.
[0024][18]Jiao Y,Zeng X,Guo X,Qi X,Zhang X,Shi Z,Zhou M,Bao C,Zhang W,Xu Y,Wang H.Preparation and evaluation of recombinant severe fever with thrombocytopenia syndrome virus nucleocapsid protein for detection of total antibodies in human and animal sera by double
‑
antigen sandwich enzyme
‑
linked immunosorbent assay.J Clin Microbiol.2012.50(2):372
‑
7.
[0025][19]Fukuma A,Fukushi S,Yoshikawa T,Tani H,Taniguchi S,Kurosu T,Egawa K,Suda Y,Singh H,Nomachi T,Gokuden M,Ando K,Kida K,Kan M,Kato N,Yoshikawa A,Kitamoto H,Sato Y,Suzuki T,Hasegawa H,Morikawa S,Shimojima M,Saijo M.Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome Virus Antigen Detection Using Monoclonal Antibodies to the Nucleocapsid Protein.PLoS Negl Trop Dis.2016.10(4):e0004595.

技术实现思路

[0026]本专利技术的主要目的是：克服现有技术存在的问题，提供用于检测或诊断新型布尼亚病毒的单克隆抗体，能特异性结合新型布尼亚病毒的核壳蛋白(即N蛋白)；同时还提供其相关应用、以及相关产品，例如免疫检测或诊断试剂盒，灵敏度高，特异性强，能快速、准确地检测出新型布尼亚病毒。
[0027]本专利技术解决其技术问题的技术方案如下：
[0028]一种用于检测或诊断新型布尼亚病毒的单克隆抗体，其特征是，所述抗体选自单克隆抗体SF
‑
M3或单克隆抗体SF
‑
M4；
[0029]所述单克隆抗体SF
‑
M3包括重链和轻链，所述重链包括：重链CDR1，其氨基酸序列为GFTFSSYT；重链CDR2，其氨基酸序列为ITSGGSYT；重链CDR3，其氨基酸序列为TRDNYGTFFDY；所述轻链包括：轻链CDR1，其氨基酸序列为QDVNTA；轻链CDR2，其氨基酸序列为SAS；轻链CDR3，其氨基酸序列为QQHFSTPLT；
[0030]所述单克隆抗体SF
‑
M4包括重链和轻链，所述重链包括：重链CDR1，其氨基酸序列为：GFNFNINA；重链CDR2，其氨基酸序列为：IRSKNNNYAT；重链CDR3，其氨基酸序列为：VRGDYAMDY；所述轻链包括：轻链CDR1，其氨基酸序列为：QGISNY；轻链CDR2，其氨基酸序列为：YTS；以及轻链CDR3，其氨基酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测或诊断新型布尼亚病毒的单克隆抗体，其特征是，所述抗体选自单克隆抗体SF
‑
M3或单克隆抗体SF
‑
M4；所述单克隆抗体SF
‑
M3包括重链和轻链，所述重链包括：重链CDR1，其氨基酸序列为GFTFSSYT；重链CDR2其氨基酸序列为ITSGGSYT；重链CDR3，其氨基酸序列为TRDNYGTFFDY；所述轻链包括：轻链CDR1，其氨基酸序列为QDVNTA；轻链CDR2，其氨基酸序列为SAS；轻链CDR3，其氨基酸序列为QQHFSTPLT；所述单克隆抗体SF
‑
M4包括重链和轻链，所述重链包括：重链CDR1，其氨基酸序列为：GFNFNINA；重链CDR2，其氨基酸序列为：IRSKNNNYAT；重链CDR3，其氨基酸序列为：VRGDYAMDY；所述轻链包括：轻链CDR1，其氨基酸序列为：QGISNY；轻链CDR2，其氨基酸序列为：YTS；以及轻链CDR3，其氨基酸序列为：QQYSKLPYT。2.根据权利要求1所述的用于检测或诊断新型布尼亚病毒的单克隆抗体，其特征是，所述单克隆抗体SF
‑
M3的重链还包括：重链FR1，其氨基酸序列为：DVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAAS；重链FR2，其氨基酸序列为：MSWVRQTPEKRLEW VAT；重链FR3，其氨基酸序列为：HYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMY YC；重链FR4，其氨基酸序列为：WGQGTTLTVSS；或者，所述单克隆抗体SF
‑
M3的轻链还包括：轻链FR1，其氨基酸序列为：DIVMTQSHKFMSTSVRDRVSITCRAS；轻链FR2，其氨基酸序列为：VAWYQQKPGQSPN LLIY；轻链FR3，其氨基酸序列为：YRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYY C；轻链FR4，其氨基酸序列为：FGAGTKLELK；或者，所述单克隆抗体SF
‑
M4的重链还包括：重链FR1，其氨基酸序列为：EVHLSETGGGLVQPKGSLRLSCAAS；重链FR2，其氨基酸序列为：MNWVRQAPGKGLDW VAR；重链FR3，其氨基酸序列为：YYADSVKDRFTISRDDSQSMLYLQMNNLKTEDTAVY YC；重链FR4，其氨基酸序列为：WGQGTSVIVSS；或者，所述单克隆抗体SF
‑
M4的轻链还包括：轻链FR1，其氨基酸序列为：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCSAS...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁细霞，周宏伟，蔡建飘，温坤，
申请(专利权)人：香港大学，
类型：发明
国别省市：