一种能识别肠道病毒A种群病毒结构蛋白VP1的广谱单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种能识别肠道病毒A种群病毒结构蛋白VP1的广谱单克隆抗体及其应用，属于分子生物学和免疫分析技术领域。该单克隆抗体包含以下六个CDR区：重链的CDR区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1～No.3所示；轻链的CDR区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.4～No.6所示。本发明专利技术还提供了编码该单克隆抗体的核苷酸片段、包含该核苷酸片段的重组载体和工程细胞系、抗体偶联物以及他们的用途。该单克隆抗体为IgG1亚型非中和抗体，可广谱结合肠道病毒A种群病毒的结构蛋白VP1，可用于制备检测、抑制、预防或/和治疗肠道病毒A种群病毒的产品。预防或/和治疗肠道病毒A种群病毒的产品。预防或/和治疗肠道病毒A种群病毒的产品。

【技术实现步骤摘要】
一种能识别肠道病毒A种群病毒结构蛋白VP1的广谱单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学领域和免疫分析
，具体涉及一种能识别肠道病毒A种群病毒结构蛋白VP1的广谱单克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]随着手足口病(Hand
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foot
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mouth disease,HFMD)在亚太地区持续地区域性爆发，对引起手足口病的肠道病毒的研究越来越受到人们的重视。其中，单克隆抗体在肠道病毒的基础研究、疫苗研发、体外诊断和抗病毒药物开发等方面有着非常重要的作用。肠道病毒属于小RNA病毒科肠道病毒属。肠道病毒属包括肠道病毒A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K和L十二个种群以及鼻病毒A、B和C三个种群。其中，肠道病毒A种群病毒是引起婴幼儿手足口病的主要病原体，其次是肠道病毒B种群病毒。肠道病毒A种群包括25种血清型：柯萨奇病毒A组2型(Coxsackievirus A2,CV
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A2)、CV
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A3、CV
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A4、CV
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A5、CV
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A6、CV
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A7、CV
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A8、CV
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A10、CV
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A12、CV
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A14、CV
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A16，肠道病毒A组71型(Enterovirus A71,EV
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A71)、EV
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A76、EV
‑<br/>A89、EV
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A90、EV
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A91、EV
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A92、EV
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A114、EV
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A119、EV
‑
A120、EV
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A121，猿肠道病毒(Simian enteroviruses)SV19、SV43、SV46和狒肠道病毒(Baboon enterovirus)BA13。
[0003]在肠道病毒预防方面，国内已有多家EVA71疫苗产品上市，并随着疫苗的接种率不断上升，国内报道的EV
‑
A71引起的手足口病病例呈明显下降趋势。但与此同时，国内外相继出现了其他新的可以导致婴幼儿手足口病的肠道病毒血清型流行。这些血清型包括肠道病毒A种群的CV
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A16、CV
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A6、CV
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A10、CV
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A5、CV
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A4和CV
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A2，肠道病毒B种群的Echo6、Echo11、Echo18、Echo30，CVB1～B5等。近几年的流行病学调查显示CV
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A16、CV
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A6和CV
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A10是引起我国婴幼儿手足口病的主要血清型，并呈现多种血清型共感染的情况。
[0004]此前报道的肠道病毒广谱单克隆抗体文献较少，《Derivation and biochemical characterization of an enterovirus group
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specific monoclonal antibody》(GE Yousef,et al.Intervirology,1987,28(3):163
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170)中公开了广谱单克隆抗体5
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D8/1可同时识别柯萨奇病毒A和B组、脊髓灰质炎病毒和艾柯病毒，识别表位位于结构蛋白VP1。《Identification of specific and shared epitopes at the extreme N
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terminal VP1 of Coxsackievirus A4,A2 and A5 by monoclonal antibodies》(YX Tian,et al.Virus Research,2023,328:199074)中公开了通过CV
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A4免疫小鼠获得的单克隆抗体可以广谱识别CV
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A2、CV
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A4和CV
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A5，识别表位位于结构蛋白VP1的N末端。总之，随着多种肠道病毒血清型的流行，筛选和鉴定针对肠道病毒的广谱单克隆抗体在肠道病毒的基础研究、疫苗研发、体外诊断和抗病毒药物开发等方面有着非常重要的作用。

技术实现思路

[0005]针对上述问题，本专利技术的第一个目的是提供一种能识别肠道病毒A种群病毒结构蛋白VP1的广谱单克隆抗体。该单克隆抗体为IgG1亚型非中和抗体，可广谱识别肠道病毒A
种群病毒的结构蛋白VP1，命名为1H4。
[0006]具体地，该单克隆抗体包含以下六个互补决定区(Complementarity determining region,CDR)：
[0007](1)重链的互补决定区VHCDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；
[0008](2)重链的互补决定区VHCDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；
[0009](3)重链的互补决定区VHCDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；
[0010](4)轻链的互补决定区VLCDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示；
[0011](5)轻链的互补决定区VLCDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示；
[0012](6)轻链的互补决定区VLCDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.6所示。
[0013]所述单克隆抗体为IgG1型抗体，具有结合活性，没有中和活性；能广谱识别肠道病毒A种群病毒。具体地，所述单克隆抗体能识别肠道病毒A种群病毒的结构蛋白VP1，其可结合的线性表位的氨基酸序列如SEQ ID No.11所示。
[0014]在优选的实施方案中，所述肠道病毒A种群病毒包括CV
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A2、CV
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A3、CV
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A4、CV
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A5、CV
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A6、CV
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A7、CV
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A8、CV
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A10、CV
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A12、CV
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A14、CV
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A16，EV
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A71、EV
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A76、EV
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A89、EV
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A90、EV
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A91、EV
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A92、EV
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A114、EV
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A119、EV
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A120、EV
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A121，SV19、SV43、SV46，BA13。
[0015]在进一步优选的实施方案中，所述肠道病毒A种群病毒包括CV
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A2、CV
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能识别肠道病毒A种群病毒结构蛋白VP1的广谱单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包含以下六个互补决定区：(1)重链的互补决定区VHCDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；(2)重链的互补决定区VHCDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；(3)重链的互补决定区VHCDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；(4)轻链的互补决定区VLCDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示；(5)轻链的互补决定区VLCDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示；(6)轻链的互补决定区VLCDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.6所示。2.根据权利要求1所述的能识别肠道病毒A种群病毒结构蛋白VP1的广谱单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示或为与SEQ ID No.7所示的氨基酸序列具有至少95％同源性的序列；或/和所述单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.8所示或为与SEQ ID No.8所示的氨基酸序列具有至少95％同源性的序列。3.根据权利要求1所述的能识别肠道病毒A种群病毒结构蛋白VP1的广谱单克隆抗体，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：申硕，付烈，王晨，张小宇，王文辉，靳卫平，陈晓琦，王泽鋆，郭靖，孟胜利，
申请(专利权)人：武汉生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：