一种降低ADE效应的抗西尼罗病毒中和性抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种降低ADE效应的抗西尼罗病毒中和性抗体及其应用，本发明专利技术提供了一种抗西尼罗病毒中和性抗体，以及包含所述抗体的衍生物，所述衍生物包括编码所述抗体的核酸分子、包含所述核酸分子的表达载体、包含所述表达载体的宿主细胞、药物组合物、检测试剂、检测试剂盒等，本发明专利技术提供的抗体不仅具有较强的病毒中和活性，而且能够降低ADE效应，可作为临床抗西尼罗病毒药物的候选，具有良好的应用前景。景。景。

【技术实现步骤摘要】
一种降低ADE效应的抗西尼罗病毒中和性抗体及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体地，本专利技术涉及一种降低ADE效应的抗西尼罗病毒中和性抗体及其应用。

技术介绍

[0002]西尼罗病毒（West Nile virus，WNV）是一种粒子直径45
‑
50 nm、有囊膜的单股正链RNA病毒。WNV属于黄病毒科、黄病毒属的成员。该属中的其它成员还包括寨卡病毒（ZIKV）、登革病毒（DENV）、黄热病毒（YFV）、流行性乙型脑炎病毒（JEV）等。WNV病毒基因组中的单一开放阅读框（open reading frame，ORF）编码由病毒和细胞内蛋白酶共翻译和翻译后加工成的10种成熟蛋白，包括3种结构蛋白（衣壳蛋白C、膜蛋白prM/M和包膜蛋白E）和7种非结构蛋白（NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5），其中，结构蛋白主要参与WNV病毒颗粒的形成，非结构蛋白参与WNV病毒RNA复制，E蛋白的功能区由3个结构域（DⅠ、DⅡ和DⅢ）构成。
[0003]西尼罗热（West Nile fever）是由WNV引起的一种人畜共患病。WNV主要经蚊传播，可导致人类罹患神经系统疾病甚至死亡，也可引起马、禽类、猫等动物发病。WNV在非洲、欧洲、中东、北美和西亚广泛流行。目前尚无针对西尼罗病毒的特效治疗药物。抗体依赖增强效应（Antibody
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dependent enhancement，ADE）被认为是导致患者继发感染后病情加重的一个重要原因，ADE效应一般由非中和性抗体介导，但中和性抗体在亚中和浓度下也会诱发ADE，尤其是针对黄病毒包膜（E）蛋白的交叉反应抗体可能会增强异种黄病毒的感染，诱发ADE。由于ADE可能会放大西尼罗病毒感染的严重程度，因此降低ADE已成为基于抗体的疗法发展的主要焦点。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种降低ADE效应的抗西尼罗病毒中和性抗体及其应用。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种抗西尼罗病毒的抗体。
[0006]进一步，所述抗体的重链可变区中HCDR1、HCDR2、HCDR3的氨基酸序列为如SEQ ID NO:4所示的重链可变区中的CDR1、CDR2、CDR3；所述抗体的轻链可变区中LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列为如SEQ ID NO:8所示的轻链可变区中的CDR1、CDR2、CDR3。
[0007]进一步，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示或分别为与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3对应的氨基酸序列具有至少90%同源性的氨基酸序列；所述LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7所示或分别为与SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7对应的氨基酸序列具有至少
90%同源性的氨基酸序列。
[0008]在一些实施方案中，与本专利技术所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3对应的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同源性的氨基酸序列也均在本专利技术的保护范围内，所述具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同源性的氨基酸序列包括通过对亲本序列进行一个或者多个氨基酸或核苷酸缺失、插入或替换突变获得。
[0009]在一些实施方案中，本专利技术所述HCDR1、HCDR2、HCDR3对应的氨基酸序列并不局限于如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，本专利技术所述LCDR1、LCDR2、LCDR3对应的氨基酸序列也并不局限于如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，采用任何CDR编号方案（现有的CDR编号方案或将来产生的新的CDR编号方案）分别对如SEQ ID NO:4所示的重链可变区中的CDR1、CDR2、CDR3进行定义、对如SEQ ID NO:8所示的轻链可变区中的CDR1、CDR2、CDR3进行定义得到的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3对应的氨基酸序列或核苷酸序列均在本专利技术的保护范围内。
[0010]在一些实施方案中，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3是根据IMGT编号方案、Chothia编号方案、Kabat编号方案、Martin（增强型Chothia）编号方案、AbM编号方案、Aho编号方案中的任意一种定义或任意多种（两种或两种以上）组合定义得到的，经上述定义方式定义得到的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3对应的序列同样包含在本专利技术的保护范围内。
[0011]本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如采用定向点突变的方法，对本专利技术所述抗体对应的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的、具有与本专利技术所述抗体对应的核苷酸序列75%或75%以上同源性的核苷酸，只要编码本专利技术第一方面所述的抗体，均是衍生于本专利技术的核苷酸序列并且等同于本专利技术的序列，同样包含在本专利技术的保护范围内。
[0012]第二方面，本专利技术提供了一种降低ADE效应的抗西尼罗病毒中和性抗体。
[0013]进一步，所述抗体的重链可变区中HCDR1、HCDR2、HCDR3为如本专利技术第一方面中所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3；所述抗体的轻链可变区中LCDR1、LCDR2、LCDR3为如本专利技术第一方面中所述的LCDR1、LCDR2、LCDR3；所述抗体的Fc段的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示或为与SEQ ID NO:9对应的氨基酸序列具有至少90%同源性的氨基酸序列。
[0014]在本专利技术的具体实施方案中，所述降低ADE效应的抗西尼罗病毒中和性抗体是将本专利技术第一方面所述的抗体的Fc段的234以及235位点进行点突变（均由L突变为A）后得到的。所述降低ADE效应的抗西尼罗病毒中和性抗体的重链可变区和轻链可变区如本专利技术第一方面中所述，所述降低ADE效应的抗西尼罗病毒中和性抗体的Fc段的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，Fc段的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示。
[0015]第三方面，本专利技术提供了一种核酸分子。
[0016]进一步，所述核酸分子编码本专利技术第一方面所述的抗体或本专利技术第二方面所述的抗体。
[0017]在本专利技术的具体实施方案中，所述编码本专利技术第二方面所述抗体Fc段的核酸分子
的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。
[0018]在一些实施方案中，所述核酸分子是分离的或是纯化的。核本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗西尼罗病毒的抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区中HCDR1、HCDR2、HCDR3的氨基酸序列为如SEQ ID NO:4所示的重链可变区中的CDR1、CDR2、CDR3；所述抗体的轻链可变区中LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列为如SEQ ID NO:8所示的轻链可变区中的CDR1、CDR2、CDR3。2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示或分别为与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3对应的氨基酸序列具有至少90%同源性的氨基酸序列；所述LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7所示或分别为与SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7对应的氨基酸序列具有至少90%同源性的氨基酸序列。3.一种降低ADE效应的抗西尼罗病毒中和性抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区中HCDR1、HCDR2、HCDR3为如权利要求1或2中所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3；所述抗体的轻链可变区中LCDR1、LCDR2、LCDR3为如权利要求1或2中所述的LCDR1、LCDR2、LCDR3；所述抗体的Fc段的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示或为与SEQ ID NO:9对应的氨基酸序列具有至少90%同源性的氨基酸序列。4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1或2所述的抗体或权利要求3所述的抗体。5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包含权利要求4所述的核酸分子。6.一种工程化的宿主细胞，其特征在于，所述工程化的宿主细胞包含权利要求5所述的表达载体。7.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为pFRT
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IgG1κ
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FcM
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WNV；所述重组表达载体以抗体哺乳细胞表达载体pFRT
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IgG1κ为模板，将Fc段的234以及235位点由L突变为A得到。8.如下任一种物质，所述物质包括：(1) 一种抗体衍生物，其特征在于，所述抗体衍生物由权利要求1或2所述的抗体或权利要求3所述的抗体偶联至官能剂上得到；(2) 一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求1或2所述的抗体、权利要求3所述的抗体、权利要求4所述的核酸分子、权利要求5所述的表达载体、权利要求6所述的工程化的宿主细胞和/或所述抗体衍生物；(3) 一种检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包含权利要求1或2所述的抗体、权利要求3所述的抗体、权利要求4所述的核酸分子、权利要求5所述的表达载体、权利要求6所述的工程化的宿主细胞和/或所述抗体衍生物；(4) 一种检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包含所述检测试剂。9.如下任一种方法，所述方法包括：(1) 一种制备权利要求1或2所述的抗体或权利要求3所述的抗体的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：培养权利要求6所述的工程化的宿主细胞，从宿主细胞培养产物中分离纯化得到权利要求1或2所述的抗体或权利要求3所述的抗体；(2) 一种制备权利要求6所述的工程化的宿主细胞的方法，其特征在于，所述方法包括
如下步骤：将权利要求4所述的核酸分子或权...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖鹤，冯健男，沈倍奋，郝相君，朱婉露，陈国江，王晶，乔春霞，李新颖，刘成华，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：