细胞分选方法技术

本发明专利技术提供一种可提高细胞分选的精准度与捕捉纯度的细胞分选方法，包括以下步骤。提供血液样品。对血液样品进行离心，以获取含有目标细胞与非目标细胞的细胞混合物。加入荧光标记物至细胞混合物，使荧光标记物与目标细胞结合。加入水胶溶液使细胞混合物与水胶溶液混合，形成混合溶液。将混合溶液加入至阵列晶片的细胞井中，细胞混合物中的目标细胞与非目标细胞以大致单层的方式平铺于所述细胞井的底部。使混合溶液固化。进行荧光影像分析，挑选出与荧光标记物结合后发出荧光的目标细胞，以分离所挑选的目标细胞。离所挑选的目标细胞。离所挑选的目标细胞。

【技术实现步骤摘要】
细胞分选方法


[0001]本专利技术涉及一种细胞分选方法，尤其涉及一种透过使用阵列晶片与水胶溶液来筛选捕捉非贴附(non
‑
adhesive)细胞的细胞分选方法。

技术介绍

[0002]血液样本中如循环肿瘤细胞(CTCs)、胎儿有核红血球(FnRBCs)、干细胞等皆为典型的稀少细胞(rare cells)，可应用于医疗、检测分析等领域，诸如辅助癌症预后分析、产前检测或病毒感染检测分析等应用。由于此类稀少细胞的数量极为稀少且为非贴附细胞(non
‑
adhesive)(即悬浮型细胞)，因此，开发一套具高纯度、高细胞回收率、高效率或低细胞损害等特性之细胞分选平台为目前致力于努力的方向。

技术实现思路

[0003]本专利技术是针对一种细胞分选方法，可有效提高细胞分选的精准度与捕捉纯度，且同时具有低细胞损害的效果。
[0004]根据本专利技术的实施例，细胞分选方法包括以下步骤。提供血液样品。对血液样品进行离心，以获取含有目标细胞与非目标细胞的细胞混合物。加入荧光标记物至细胞混合物，使荧光标记物与目标细胞结合。加入水胶溶液使细胞混合物与水胶溶液混合，形成混合溶液。将混合溶液加入至阵列晶片的细胞井中，细胞混合物中的目标细胞与非目标细胞以大致单层的方式平铺于所述细胞井的底部。使混合溶液固化。进行荧光影像分析，挑选出与荧光标记物结合后发出荧光的目标细胞，以分离所挑选的目标细胞。
[0005]在根据本专利技术的实施例的细胞分选方法中，上述的水胶溶液包含温感型水胶溶液，且进行荧光影像分析步骤在使混合溶液固化步骤之后进行。使混合溶液固化步骤包括进行降温过程而固化混合溶液，固定目标细胞与非目标细胞的位置，然后，进行荧光影像分析，定位出发出荧光的目标细胞的所述位置，以挑选出与荧光标记物结合后发出荧光的目标细胞。。
[0006]在根据本专利技术的实施例的细胞分选方法中，上述的温感型水胶溶液的重量为100重量％，温感型水胶溶液包括3重量％至5重量％的明胶。
[0007]在根据本专利技术的实施例的细胞分选方法中，上述的水胶溶液包含光感型水胶溶液，且进行荧光影像分析步骤在使混合溶液固化步骤之前先进行。进行荧光影像分析步骤包括：进行荧光影像分析，以定位出发出荧光的第一区域与未发出荧光的第二区域。使混合溶液固化步骤包括：对第一区域照射紫外光，使位于第一区域的混合溶液固化，以固定目标细胞。
[0008]在根据本专利技术的实施例的细胞分选方法中，上述分离所挑选的目标细胞的方法包括以下步骤。对第一区域照射紫外光之后，移除位于第二区域未固化的所述混合溶液。然后，利用吸取器从第一区域吸取被固定的目标细胞。
[0009]在根据本专利技术的实施例的细胞分选方法中，上述的水胶溶液包含光感型水胶溶
液，且进行荧光影像分析步骤在使混合溶液固化步骤之前先进行。进行荧光影像分析步骤包括：进行荧光影像分析，以定位出发出荧光的第一区域与未发出荧光的第二区域。使混合溶液固化步骤包括：对第二区域照射紫外光，使位于第二区域的混合溶液固化。
[0010]在根据本专利技术的实施例的细胞分选方法中，上述分离所挑选的目标细胞步骤包括：对第二区域照射紫外光之后，利用吸取器从第一区域吸取未固化的混合溶液以获得目标细胞。
[0011]在根据本专利技术的实施例的细胞分选方法中，上述的光感型水胶溶液的重量为100重量％计，光感型水胶包括10重量％至20重量％的聚乙二醇二丙烯酸酯以及0.1重量％至1重量％的光启始剂。
[0012]在根据本专利技术的实施例的细胞分选方法中，上述的细胞混合物中的细胞为非贴附型细胞，包括单核淋巴细胞、循环肿瘤细胞、胎儿有核红血球、血小板或其组合。
[0013]在根据本专利技术的实施例的细胞分选方法中，上述的目标细胞为胎儿有核红血球，荧光标记物包括带有第一荧光物质的抗CD147抗体与带有第二荧光物质的抗CD71抗体。加入荧光标记物至细胞混合物的步骤包括：加入抗CD147抗体与抗CD71抗体，以使抗CD147抗体与抗CD71抗体结合至目标细胞，其中第一荧光物质不同于第二荧光物质。
[0014]在根据本专利技术的实施例的细胞分选方法中，上述的荧光标记物更包括4',6
‑
二脒基
‑2‑
苯基吲哚，以结合至目标细胞。
[0015]基于上述，在本专利技术一实施例的细胞分选方法中，借由将细胞混合物以大致单层的方式平铺于细胞井的底部的方式，可使目标细胞与非目标细胞在细胞井的法线方向上不会重叠；接着，透过固化含有水胶溶液的混合溶液的方式，可使目标细胞和/或非目标细胞固定于细胞井的底部；然后，透过荧光影像分析的方式，可定位出与荧光标记物结合后发出荧光的目标细胞，进而可从细胞混合物中精准地挑选并分离出目标细胞。借此，可使本实施例的细胞分选方法可提升细胞分选的精准度与捕捉纯度，以降低细胞损害并达到高细胞回收率的效果。
附图说明
[0016]包含附图以便进一步理解本专利技术，且附图并入本说明书中并构成本说明书的一部分。附图说明本专利技术的实施例，并与描述一起用于解释本专利技术的原理。
[0017]图1为本专利技术实施例的细胞分选方法的部分流程示意图；
[0018]图2A与图2B为本专利技术实施例的细胞自组装阵列晶片的示意图；
[0019]图3为本专利技术实施例的使用温感型水胶溶液的细胞分选方法的流程示意图；
[0020]图4为本专利技术实施例的使用光感型水胶溶液的细胞分选方法的流程示意图；
[0021]图5为本专利技术实施例的细胞分选方法中所使用光感型水胶溶液时照光所设计使用的光罩的示意图；
[0022]图6A为本专利技术实施例的细胞混合物混合温感型水胶溶液后的细胞存活率试验结果；
[0023]图6B为以本专利技术实施例的细胞分选方法抽取分离后所获得的细胞存活率试验结果。
[0024]附图标记说明
[0025]10：血浆；
[0026]20：细胞混合物；
[0027]25：混合溶液；
[0028]30：细胞/单核球分离液；
[0029]40：红血球；
[0030]100：细胞自组装阵列晶片；
[0031]110：上板；
[0032]120：下板；
[0033]130：孔槽；
[0034]132：细胞井；
[0035]134：蒸散槽；
[0036]140：间隙；
[0037]S：血液样品；
[0038]C1：目标细胞；
[0039]C2：非目标细胞；
[0040]PP：自动吸取器；
[0041]MEM：过滤膜；
[0042]LL：光。
具体实施方式
[0043]现将详细地参考本专利技术的示范性实施例，示范性实施例的实例说明于附图中。只要有可能，相同元件符号在图式和描述中用来表示相同或相似部分。
[0044]图1为本专利技术实施例的细胞分选方法的流程示意图。图2A与图2B为本专利技术实施例的细胞自组装阵列晶片的示意图。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞分选方法，其特征在于，包括：提供血液样品；对所述血液样品进行离心，以获取含有目标细胞与非目标细胞的细胞混合物；加入荧光标记物至所述细胞混合物，使所述荧光标记物与所述目标细胞结合；加入水胶溶液使所述细胞混合物与所述水胶溶液混合，形成混合溶液；将所述混合溶液加入至阵列晶片的细胞井中，所述细胞混合物中的所述目标细胞与所述非目标细胞以大致单层的方式平铺于所述细胞井的底部；使所述混合溶液固化；以及进行荧光影像分析，挑选出与所述荧光标记物结合后发出荧光的所述目标细胞，以分离所挑选的所述目标细胞。2.根据权利要求1所述的细胞分选方法，其特征在于，所述水胶溶液包含温感型水胶溶液，且进行荧光影像分析步骤在使所述混合溶液固化步骤之后进行，其中使所述混合溶液固化步骤包括进行降温过程而固化所述混合溶液，固定所述目标细胞与所述非目标细胞的位置，然后，进行荧光影像分析，定位出发出荧光的所述目标细胞的所述位置，以挑选出与所述荧光标记物结合后发出荧光的所述目标细胞。3.根据权利要求2所述的细胞分选方法，其特征在于，以所述温感型水胶溶液的重量为100重量％，所述温感型水胶溶液包括3重量％至5重量％的明胶。4.根据权利要求1所述的细胞分选方法，其特征在于，所述水胶溶液包含光感型水胶溶液，且进行荧光影像分析步骤在使所述混合溶液固化步骤之前先进行，其中进行荧光影像分析步骤包括：进行荧光影像分析，以定位出发出荧光的第一区域与未发出荧光的第二区域，且其中使所述混合溶液固化步骤包括：对所述第一区域照射紫外光，使位于所述第一区域的所述混合溶液固化，以固定所述目标细胞。5.根据权利要求4所述的细胞分选方法，其特征在于，分离所挑选的所述目标细胞步骤包括：对所述第一区域照射紫外光之后，移除位于所述第二区域未固化的所述混合...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾繁根，吴仁贵，简志轩，
申请(专利权)人：曾繁根，
类型：发明
国别省市：