【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】产生具有增加的核酸摄取的细胞群体的方法
[0001]交叉引用
[0002]本申请要求2020年11月13日提交的美国临时专利申请号63/113,471；和2021年3月19日提交的美国临时专利申请号63/163,585的权益；其各自通过引用整体并入本文。
技术介绍
[0003]对于许多患有癌症、自身免疫性疾病和遗传疾病的患者，细胞疗法是重要且日益增长的治疗选择。然而，这些疗法需要能够产生大量的赋予治疗益处的核酸转基因细胞。
技术实现思路
[0004]目前，需要用于从患者和/或个体中富集原代细胞的方法，使其具有高活力和用外源治疗性核酸进行转基因的高能力。许多基于细胞的疗法如嵌合抗原受体T细胞(CART
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细胞)或表达重组T细胞受体的T细胞通过表达这些重组分子的病毒转导。
[0005]本文描述了具有改善的用外源核酸(包括具有治疗潜力的核酸)基因工程化的能力的细胞的方法和组合物。核酸可通过病毒如慢病毒、腺病毒或腺相关病毒递送。这样的方法和细胞组合物允许改善治疗上有用的细胞的生产，允许产生更大量的基因...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种从来自对象的样品分离的细胞群体，其包括包含异源DNA的细胞，其中与通过密度梯度离心从所述样品分离的血沉棕黄层细胞群体相比：a)所述细胞群体中白细胞的数目比所述血沉棕黄层细胞群体中白细胞的数目多至少2倍；b)所述细胞群体中T细胞的数目比所述血沉棕黄层细胞群体中T细胞的数目多至少2倍；c)所述细胞群体中红细胞与T细胞的比率比所述血沉棕黄层细胞群体中红细胞与T细胞的比率小至少5倍；d)所述细胞群体中血小板与T细胞的比率比所述血沉棕黄层细胞群体中血小板与T细胞的比率小至少5倍；e)所述细胞群体中衰老细胞的百分比比所述血沉棕黄层细胞群体中衰老细胞的百分比低至少10％；f)所述细胞群体中耗竭细胞的百分比比所述血沉棕黄层细胞群体中耗竭细胞的百分比低至少10％；g)所述细胞群体中表达CD45Ra的T效应记忆细胞的百分比比所述血沉棕黄层细胞群体中表达CD45Ra的T效应记忆细胞的百分比低至少10％；h)所述细胞群体中T中央记忆细胞的百分比比所述血沉棕黄层细胞群体中T中央记忆细胞的百分比高至少10％；i)所述细胞群体中为T中央记忆细胞或T效应记忆细胞的细胞的百分比比所述血沉棕黄层细胞群体中为T中央记忆细胞或T效应记忆细胞的细胞的百分比高至少10％；j)所述细胞群体中包含所述异源DNA的细胞的百分比比所述血沉棕黄层细胞群体中包含所述异源DNA的细胞的百分比高至少20％；并且用包含所述异源DNA的病毒载体转导所述细胞群体和所述血沉棕黄层细胞群体；k)所述细胞群体能够在比所述血沉棕黄层细胞群体少至少30％的时间内扩增成包括至少2
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10e9个包含所述异源DNA的T细胞；并且用包含所述异源DNA的病毒载体转导所述细胞群体和所述血沉棕黄层细胞群体；l)所述细胞群体比所述血沉棕黄层细胞群体表达更多的干扰素γ；m)所述细胞群体比所述血沉棕黄层细胞群体表达更多的GM
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CSF；n)所述细胞群体比所述血沉棕黄层细胞群体分泌更少的IL
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6；o)所述细胞群体比所述血沉棕黄层细胞群体分泌更少的MCP
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1；p)所述细胞群体比所述血沉棕黄层细胞群体分泌更少的IL
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1Ra；q)所述细胞群体比所述血沉棕黄层细胞群体包含更高的平均绝对端粒长度；或r)所述细胞群体包括比从血沉棕黄层细胞群体中纯化的T细胞包含更高的平均绝对端粒长度的T细胞。2.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体中白细胞的数目比所述血沉棕黄层细胞群体中白细胞的数目多至少2倍。3.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体中T细胞的数目比所述血沉棕黄层细胞群体中T细胞的数目多至少2倍。4.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体中红细胞与T细胞的比率比所
述血沉棕黄层细胞群体中红细胞与T细胞的比率小至少5倍。5.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体中血小板与T细胞的比率比所述血沉棕黄层细胞群体中血小板与T细胞的比率小至少5倍。6.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体中衰老细胞的百分比比所述血沉棕黄层细胞群体中衰老细胞的百分比低至少10％。7.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体中耗竭细胞的百分比比所述血沉棕黄层细胞群体中耗竭细胞的百分比低至少10％。8.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体中表达CD45Ra的T效应记忆细胞的百分比比所述血沉棕黄层细胞群体中表达CD45Ra的T效应记忆细胞的百分比低至少10％。9.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体中为T中央记忆细胞的细胞的百分比比所述血沉棕黄层细胞群体中为T中央记忆细胞的细胞的百分比高至少10％。10.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体中为T中央记忆细胞或T效应记忆细胞的细胞的百分比比所述血沉棕黄层细胞群体中为T中央记忆细胞或T效应记忆细胞的细胞的百分比高至少10％。11.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体中包含所述异源DNA的细胞的百分比比所述血沉棕黄层细胞群体中包含所述异源DNA的细胞的百分比高至少20％；并且用包含所述异源DNA的病毒载体转导所述细胞群体和所述血沉棕黄层细胞群体。12.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体能够在比所述血沉棕黄层细胞群体少至少30％的时间内扩增成包括至少2
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109个包含所述异源DNA的T细胞；并且用包含所述异源DNA的病毒载体转导所述细胞群体和所述血沉棕黄层细胞群体。13.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体比所述血沉棕黄层细胞群体表达更多的干扰素γ。14.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体比所述血沉棕黄层细胞群体表达更多的GM
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CSF。15.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体比所述血沉棕黄层细胞群体分泌更少的IL
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6。16.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体比所述血沉棕黄层细胞群体分泌更少的MCP
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1。17.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体比所述血沉棕黄层细胞群体分泌更少的IL
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1Ra。18.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体比所述血沉棕黄层细胞群体包含更高的平均绝对端粒长度。19.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述细胞群体包括比从所述血沉棕黄层细胞群体中纯化的T细胞包含更高的平均绝对端粒长度的T细胞。20.根据权利要求1至19中任一项所述的细胞群体，其中，所述异源DNA包含反向末端重复序列或长末端重复序列。21.根据权利要求1至20中任一项所述的细胞群体，其中，所述密度梯度离心包括将所述样品铺在包含泛影酸钠、EDTA二钠钙和密度约为1.078g/ml的中性、高度支化、高质量亲
水性多糖[例如Ficoll]的水溶液上。22.根据权利要求1至21中任一项所述的细胞群体，其中，所述样品是leukopak。23.根据权利要求1至21中任一项所述的细胞群体，其中，所述样品是来自血小板捐献的残留白细胞。24.根据权利要求1至21中任一项所述的细胞群体，其中，所述样品是血液样品。25.根据权利要求24所述的细胞群体，其中，所述血液样品的血细胞比容＞2％。26.根据权利要求24所述的细胞群体，其中，所述血液样品的血细胞比容＞4％。27.根据权利要求24至26中任一项所述的细胞群体，其中，所述血液样品的血细胞比容＜30％。28.根据权利要求1至21中任一项所述的细胞群体，其中，所述样品是白细胞电泳或单采血液成分术样品。29.根据权利要求1至21中任一项所述的细胞群体，其中，所述样品是脂肪样品或骨髓样品。30.根据权利要求1至29中任一项所述的细胞群体，其中，所述对象是人。31.根据权利要求1至30中任一项所述的细胞群体，其中，所述对象是健康个体。32.根据权利要求1至30中任一项所述的细胞群体，其中，所述对象患有癌症。33.根据权利要求32所述的细胞群体，其中，所述癌症是白血病。34.根据权利要求1至33中任一项所述的细胞群体，其中，所述病毒载体是慢病毒载体。35.根据权利要求1至33中任一项所述的细胞群体，其中，所述病毒载体是腺病毒载体。36.根据权利要求1至33中任一项所述的细胞群体，其中，所述病毒载体是腺相关病毒载体。37.根据权利要求1至36中任一项所述的细胞群体，其中，所述异源DNA编码CRISPR指导RNA。38.根据权利要求1至36中任一项所述的细胞群体，其中，所述异源DNA编码siRNA或miRNA。39.根据权利要求1至36中任一项所述的细胞群体，其中，所述异源DNA编码多肽。40.根据权利要求39所述的细胞群体，其中，所述多肽是嵌合抗原受体。41.根据权利要求40所述的细胞群体，其中，所述嵌合抗原受体选自替沙仑赛、阿基仑赛、brexucabtagene autoleucel、利基迈仑赛、艾基维仑赛及其组合。42.根据权利要求39所述的细胞群体，其中，所述多肽是免疫球蛋白、T细胞受体、细胞因子或趋化因子。43.根据权利要求1至42中任一项所述的细胞群体，其中，所述细胞群体中至少90％的细胞是存活的。44.一种用于获得基因工程化的白细胞组合物的方法，其包括：(a)在不进行密度梯度离心的情况下从包括白细...
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