本发明专利技术公开一种制备酵母基因组DNA模板的方法，其方法步骤如下：使用超纯水来重悬菌体，放进液氮速冻，然后将其超声溶解，重复多次即可PCR鉴定。与现有的制备方法对比，本发明专利技术的制备方法高效简便；提取成本大幅降低；提取时间很短；能够一次制备多个不同分子量DNA模板，30min左右即可PCR；所制备的基因组DNA模板完整；并且可确保成功地制备酵母细胞基因组DNA模板。模板。模板。
【技术实现步骤摘要】
一种制备基因组DNA模板的方法
[0001]本专利技术属于分子生物学领域，特别地涉及一种制备基因组DNA模板的方法。
技术介绍
[0002]现有的酵母细胞基因组DNA提取的方法有很多，包括酶解法、酵母基因组DNA提取法和液氮研磨法等。酶解法提取过程需要进行DNA纯化等诸多步骤而耗时；再者是超声和液氮提取需大量样本培养，所需耗材多、耗时长。更甚市场上现有的酵母基因组DNA提取试剂盒由于需要纯化柱而费材成本高，并且操作步骤繁琐。
技术实现思路
[0003]本专利技术的目的在于克服现有的基因组DNA模板的制备方法存在的缺陷，提供一种高效、快速、低成本、批量制备基因组DNA模板的方法，其包括如下步骤：
[0004](1)将菌液吸取至EP管中进行离心，收集菌体；
[0005](2)向收集的菌体中加入一定量的超纯水重悬，获得重悬液；
[0006](3)将重悬液放入液氮中冷冻，获得冷冻样品；
[0007](4)将冷冻样品进行超声溶解；
[0008](5)将步骤(3)和(4)重复多次；
[0009](6)在冷冻样品最后一次溶解后，获取所得悬浮液作为基因组DNA模板进行PCR。
[0010]根据本专利技术的一个实施方案，其中菌液为酵母细胞培养液。
[0011]根据本专利技术的一个实施方案，其中超纯水的量为使得收集的菌体能够重悬以形成重悬液的量。
[0012]根据本专利技术的一个实施方案，其中冷冻样品的温度范围为
‑
20至
‑
196℃、优选
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40至
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150℃，并且冷冻为速冻。
[0013]根据本专利技术的一个实施方案，其中超声溶解在超声仪中进行。
[0014]根据本专利技术的一个实施方案，其中上述步骤(5)中的多次为2至6次、优选3至5次、更优选4次。
[0015]根据本专利技术的一个实施方案，其中基因组DNA模板进行PCR所获核酸产物的条带长度范围为100至10000bp、优选200至7000bp、更优选300至5000bp。
[0016]与现有制备基因组DNA模板的方法相比，本专利技术的制备方法存在如下优点：高效简便；提取成本大幅降低；提取时间很短；能够一次制备多个不同分子量DNA模板，30min左右即可PCR；所制备的基因组DNA模板完整；并且可确保成功地制备酵母细胞基因组DNA模板。
附图说明
[0017]下面结合附图来说明本专利技术，但本专利技术并不因此而受任何限制。其中：
[0018]图1显示通过根据本专利技术一个实施方案的制备方法和现有技术的制备方法制备野生型X33毕赤酵母基因组DNA模板效果核酸电泳图；
[0019]图2显示通过根据本专利技术一个实施方案的制备方法和现有技术的制备方法制备基因重组X33毕赤酵母工程菌(XP
‑
CA)基因组DNA模板效果核酸电泳图；
[0020]图3显示通过根据本专利技术一个实施方案的制备方法和现有技术的制备方法制备基因重组X33毕赤酵母工程菌(XP
‑
CT)基因组DNA模板效果核酸电泳图；
[0021]图4显示通过根据本专利技术另一个实施方案的制备方法和现有技术的制备方法制备基因重组X33毕赤酵母工程菌(XP
‑
HSO)基因组DNA模板效果核酸电泳图；
[0022]图5显示通过根据本专利技术另一个实施方案的制备方法和现有技术的制备方法制备基因重组X33毕赤酵母工程菌(XP
‑
HCT)基因组DNA模板效果核酸电泳图；
[0023]图6显示通过根据本专利技术另一个实施方案的制备方法和现有技术的制备方法制备基因重组GS115毕赤酵母工程菌(GP
‑
CT)基因组DNA模板效果核酸电泳图；
[0024]图1中，M表示DNA Marker 2000，泳道1表示酵母基因组提取法，泳道2表示超声破壁法，泳道3表示液氮研磨法，泳道4表示溶菌酶破壁法，泳道5表示蜗牛酶破壁法，泳道6表示反复冻融法，泳道7表示液氮超声法；图2至5中，M均表示DNA Marker 5000，泳道1均表示酵母基因组提取法，泳道2均表示蜗牛酶破壁法，泳道3均表示溶菌酶破壁法，泳道4均表示液氮研磨法，泳道5均表示超声破壁法，泳道6均表示反复冻融法，泳道7均表示液氮超声法；图6中，M表示DNA Marker 10000，泳道1表示酵母基因组提取法，泳道2表示超声破壁法，泳道3表示液氮研磨法，泳道4表示溶菌酶破壁法，泳道5表示蜗牛酶破壁法，泳道6表示反复冻融法，泳道7表示液氮超声法。图1至6中，泳道1至6均表示现有技术的制备方法，泳道7表示本专利技术的制备方法。
具体实施方式
[0025]为了更好地理解本专利技术，下面通过特定实施方案并且结合附图来详细描述本专利技术，但是本专利技术并不限于此。
[0026]需要说明的是，本专利技术中提及但未解释说明和详述的科学术语和测试方法，与本领域技术人员所理解的含义和内容均是相同的。除非另外说明，否则本专利技术中的份、％均基于质量，所有的设备、原料和试剂均为本领域已知和商购可得的。
[0027]另外，需要说明的是，本专利技术中的数值范围均包括端值以及端值之间的任何点值。例如，数值范围1～10包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10；数值范围0.1～0.9包括0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9；数值范围0.01～0.09包括0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09；数值范围0.08～0.21包括0.08、0.09、0.10、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.20、0.21。另外，本专利技术中的“以上”、“以下”和“以内”均包括本数，“大于/高于”、“小于/不到”和“不足”均不包括本数。
[0028]本专利技术所用的术语“基因组”是指是指生物体所有遗传物质的总和，这些遗传物质包括DNA或RNA。
[0029]本专利技术所用的术语“模板”是指一条DNA单链，是合成RNA互补链或mRNA的模板，又是合成核酸或蛋白质的模板。
[0030]本专利技术所用的术语“菌体”是指单细胞蛋白，也叫微生物蛋白，是由蛋白质、脂肪、碳水化合物、核酸及不是蛋白质的含氮化合物、维生素和无机化合物等混合物组成的细胞质团。单细胞蛋白中重要的是真菌蛋白、细菌蛋白和藻类蛋白，它们的化学组成中一般以核
酸、蛋白质、脂肪为主。
[0031]本专利技术所用的术语“冷冻”是指降低温度，使物体凝固、冻结。
[0032]本专利技术所用的术语“凝胶电泳”又称“胶体电泳”，是指DNA分子提取得到以后，需要通过电泳技术来检测其数量和质量。自从琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶被引入核酸研究以来，按相对分子质量大小分离DNA的凝胶电泳技术，已发展成为一种分析鉴定DNA分子的重要实验手段。琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是基因操作的核心技术之一，它能够用于本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种制备基因组DNA模板的方法，其包括如下步骤：(1)将菌液吸取至EP管中进行离心，收集菌体；(2)向收集的菌体中加入一定量的超纯水重悬，获得重悬液；(3)将所述重悬液放入液氮中冷冻，获得冷冻样品；(4)将所述冷冻样品进行超声溶解；(5)将步骤(3)和(4)重复多次；(6)在所述冷冻样品最后一次溶解后，获取所得悬浮液作为所述基因组DNA模板进行PCR。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述菌液为酵母细胞培养液。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述一定量为使得所述收集的菌体能够重悬以形成重悬液的量。4.根据权利要求1所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈刚，郑春辉，丁贵蓉，马福军，朱燕，夏烈文，
申请(专利权)人：云锦华彰北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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