一种测量血红蛋白类氧载体中血红蛋白含量的方法技术

本发明专利技术提供一种测量血红蛋白类氧载体中血红蛋白含量的方法，包括以下步骤：(1)配制多个已知浓度的血红蛋白标准工作溶液并测量其吸光度，建立吸光度与浓度的标准工作曲线或标准工作曲线方程，其中，所述血红蛋白标准工作溶液包含酸性物质；(2)配制待测样品溶液并测量其吸光度，其中所述待测样品溶液包含酸性物质；(3)根据步骤(2)获得的待测样品溶液的吸光度和步骤(1)得到的标准工作曲线或标准工作曲线方程，得到待测样品中血红蛋白的含量。本发明专利技术的方法测量结果准确、操作简单、对环境友好、对设备要求低。对设备要求低。

【技术实现步骤摘要】
一种测量血红蛋白类氧载体中血红蛋白含量的方法


[0001]本专利技术涉及血红蛋白类氧载体
，具体涉及一种测量血红蛋白类氧载体中血红蛋白含量的方法。

技术介绍

[0002]血液中的血红蛋白(Hb)在运输氧、二氧化碳及调节血液的酸碱平衡等方面具有重要作用，血红蛋白的测定是血液、尿液等临床检验的重要指标，已经在临床分析领域受到重视。血红蛋白类氧载体(Hemoglobin
‑
Based Oxygen Carriers，HBOCs)是一种新兴的具有携氧功能的血液代用品，具有可长时间保存、无需配型、便于运输、感染风险低等优点，但其表现出良好治疗效果的同时也存在氧化应激、影响血管收缩、产生肾毒性损伤等毒副作用。有研究将血红蛋白与超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和碳酸酐酶(CA)复合来制备PolyHb
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SOD
‑
CAT
‑
CA，以解决上述问题。为进一步优化此类HBOCs产品的性能，对其中血红蛋白浓度的测量很有必要。
[0003]但是现有技术中使用吸光度法测量Hb的含量仍然有较大难度，因为根据与氧结合的状态和未结合的状态的不同，显示吸收最大值的波长也不同，因此即使单纯地测定的吸光度也难以准确求出Hb的量。现有技术往往通过变性使Hb稳定化后再来测定其吸光度，如，国际标准的HiCN法已经得到广泛的采用。但是这种方法会产生对环境污染的含氰废液。
[0004]因此，亟需一种操作简单、对环境友好、结果准确的测量血红蛋白含量的方法。/>
技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种操作简单、对环境友好、结果准确的测量血红蛋白含量的方法。
[0006]为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]一种测量血红蛋白类氧载体中血红蛋白含量的方法，包括以下步骤：
[0008](1)配制多个已知浓度的血红蛋白标准工作溶液并测量其吸光度，建立吸光度与浓度的标准工作曲线或标准工作曲线方程，其中，所述血红蛋白标准工作溶液包含酸性物质；
[0009](2)配制待测样品溶液并测量其吸光度，其中所述待测样品溶液包含酸性物质；
[0010](3)根据步骤(2)获得的待测样品溶液的吸光度和步骤(1)得到的标准工作曲线或标准工作曲线方程，得到待测样品中血红蛋白的含量。
[0011]根据本专利技术的一些实施方式，所述所述血红蛋白标准工作溶液的个数为3个或以上，优选为5
‑
10个，如5个，6个，7个，8个，9个或10个。
[0012]根据本专利技术的一些实施方式，所述血红蛋白标准工作溶液为牛血红蛋白标准工作溶液。
[0013]根据本专利技术的一些实施方式，所述血红蛋白标准工作溶液的浓度为0.04mg/mL
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1.0mg/mL，优选为0.08mg/mL
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0.80mg/mL，更优选为0.08
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0.48mg/ml。
[0014]根据本专利技术的优选实施方式，所述血红蛋白标准工作溶液的浓度为0.08mg/mL、0.16mg/mL、0.24mg/mL、0.32mg/mL、0.40mg/mL、0.48mg/mL。
[0015]根据本专利技术的一些实施方式，以标准工作溶液的血红蛋白浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，制作标准工作曲线。
[0016]根据本专利技术的优选实施方式，所述标准工作曲线方程为y＝1.9859x+0.1038，其中y表示吸光度，x表示血红蛋白浓度，x的单位是mg/mL。
[0017]根据本专利技术的一些实施方式，所述血红蛋白标准工作溶液中，酸性物质的质量浓度为0.05％
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0.20％，优选为0.08％
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0.12％。
[0018]根据本专利技术的优选实施方式，血红蛋白标准工作溶液中，所述酸性物质的质量浓度为0.1％。
[0019]根据本专利技术的一些实施方式，待测样品溶液中，所述酸性物质的质量浓度为0.05％
‑
0.20％，优选为0.08％
‑
0.12％。
[0020]根据本专利技术的优选实施方式，待测样品溶液中，所述酸性物质的质量浓度为0.1％。
[0021]根据本专利技术的一些实施方式，所述酸性物质为三氟乙酸。
[0022]根据本专利技术的一些实施方式，所述酸性物质为质量浓度是0.05％
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0.20％的三氟乙酸。
[0023]根据本专利技术的优选实施方式，所述酸性物质为质量浓度是0.08％
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0.12％的三氟乙酸。
[0024]根据本专利技术的一些实施方式，所述吸光度的测量波长为380nm
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410nm，优选为390nm
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400nm。
[0025]根据本专利技术的优选实施方式，所述吸光度的测量波长为393nm
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397nm。
[0026]根据本专利技术的一些实施方式，待测样品溶液为牛血稀释液，优选稀释倍数是250
‑
500倍。
[0027]根据本专利技术的一些实施方式，待测样品溶液为血红蛋白类氧载体原液稀释液，优选稀释倍数是250
‑
500倍。
[0028]根据本专利技术的一些实施方式，所述血红蛋白标准工作溶液与酸性物质的体积比为1:(3
‑
25)。
[0029]根据本专利技术的一些实施方式，所述待测样品溶液与酸性物质的体积比为1:(490
‑
510)。
[0030]根据本专利技术的一些实施方式，所述步骤(1)的具体操作包括：
[0031]a.用三氟乙酸配制6个浓度分别为0.06mg/mL
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0.10mg/mL、0.14mg/mL
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0.18mg/mL、0.22mg/mL
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0.26mg/mL、0.30mg/mL
‑
0.34mg/mL、0.38mg/mL
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0.42mg/mL、0.46mg/mL
‑
0.5mg/mL的血红蛋白标准工作溶液，所述三氟乙酸的质量浓度优选为0.08％
‑
0.12％；
[0032]b.以步骤a所述三氟乙酸作为空白调零，测量标准工作溶液的吸光度，建立吸光度与浓度的标准工作曲线或标准工作曲线方程；所述吸光度的测量波长优选为390nm
‑
400nm。
[0033]与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：本专利技术选择特定的酸性物质，使血红蛋白在某一波长处具有最大吸收峰，并通过建立血红蛋白的标准工作曲线，实现对血红蛋白类氧载体中血红蛋白浓度的准确测定，且操作简单、对环境友好、对设备要求低。
附图说明
[0034]图1为实施例1中建立的标准工作曲线。
具体实施方式
[0035]为使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例和附图，对本专利技术进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测量血红蛋白类氧载体中血红蛋白含量的方法，包括以下步骤：(1)配制多个已知浓度的血红蛋白标准工作溶液并测量其吸光度，建立吸光度与浓度的标准工作曲线或标准工作曲线方程，其中，所述血红蛋白标准工作溶液包含酸性物质；(2)配制待测样品溶液并测量其吸光度，其中所述待测样品溶液包含酸性物质；(3)根据步骤(2)获得的待测样品溶液的吸光度和步骤(1)得到的标准工作曲线或标准工作曲线方程，得到待测样品中血红蛋白的含量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述血红蛋白标准工作溶液的个数为3个或以上，优选为5
‑
10个。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述血红蛋白标准工作溶液为牛血红蛋白标准工作溶液；和/或所述血红蛋白标准工作溶液的浓度为0.04mg/mL
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1.0mg/mL，优选为0.08mg/mL
‑
0.80mg/mL，更优选为0.08
‑
0.48mg/ml。4.根据权利要求1
‑
3任意一项所述的方法，其特征在于：所述标准工作曲线方程为y＝1.9859x+0.1038，其中y表示吸光度，x表示血红蛋白浓度，x的单位是mg/mL。5.根据权利要求1
‑
4任意一项所述的方法，其特征在于：血红蛋白标准工作溶液中，所述酸性物质的质量浓度为0.05％
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0.20％，优选为0.08％
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0.12％；和/或待测样品溶液中，所述酸性物质的质量浓度为0.05％
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0.20％，优选为0.08％
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0.12％。6.根据权利要求1
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5任意一项所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈刚，蔡伟江，夏烈文，李露，郑春辉，莫德欢，王瑶曦，万章，
申请(专利权)人：云锦华彰北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：