一种检测血红蛋白类氧载体中碳酸酐酶的酶活性的方法技术

本发明专利技术提供一种检测血红蛋白类氧载体中碳酸酐酶的酶活性的方法，包括以下步骤：(1)向N个酶活性已知但不同的碳酸酐酶标准品中加入缓冲溶液、反应底物和酸碱指示剂，得到反应液n，建立反应液n的吸光度与反应时间的关系曲线，得到反应速率k，建立碳酸酐酶标准品的酶活性与反应速率k的标准工作曲线；其中，所述反应底物包含二氧化碳；(2)向待测样品中加入步骤(1)中的缓冲溶液、反应底物和酸碱指示剂，得到反应液n0，建立反应液n0的吸光度与反应时间的关系曲线，得到反应速率k0；(3)根据反应速率k0和标准工作曲线，得到待测样品中碳酸酐酶的酶活性。本方法操作简单、准确度高、对设备要求低且适用测量生物样品中碳酸酐酶的酶活性。且适用测量生物样品中碳酸酐酶的酶活性。

【技术实现步骤摘要】
一种检测血红蛋白类氧载体中碳酸酐酶的酶活性的方法


[0001]本专利技术涉及血红蛋白类氧载体
，具体涉及检测血红蛋白类氧载体中碳酸酐酶的酶活性的方法。

技术介绍

[0002]血红蛋白类氧载体(Hemoglobin
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Based Oxygen Carriers，HBOCs)是一种新兴的具有携氧功能的血液代用品，具有可长时间保存、无需配型、便于运输、感染风险低等优点，但其表现出良好治疗效果的同时也存在氧化应激、影响血管收缩、产生肾毒性损伤等毒副作用。有研究将血红蛋白与超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和碳酸酐酶(CA)复合来制备PolyHb
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SOD
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CAT
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CA，以解决上述问题。为进一步优化此类HBOCs产品的性能，对以上三种酶进行酶活性测定很有必要。其中碳酸酐酶(CA)广泛存在哺乳动物的组织中并参与机体多种生命活动，其作用主要使催化二氧化碳转化为碳酸、控制生物流体(如血液)的酸度。常见的CA的酶活测定方法有测压法、比色法、电极法和酯酶测定法等，但测压法本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测血红蛋白类氧载体中碳酸酐酶的酶活性的方法，包括以下步骤：(1)向N个酶活性已知但不同的碳酸酐酶标准品中加入缓冲溶液、反应底物和酸碱指示剂，得到反应液n，建立反应液n的吸光度与反应时间的关系曲线，得到反应速率k，建立碳酸酐酶标准品的酶活性与反应速率k的标准工作曲线；其中，所述反应底物包含二氧化碳；(2)向待测样品中加入步骤(1)中的缓冲溶液、反应底物和酸碱指示剂，得到反应液n0，建立反应液n0的吸光度与反应时间的关系曲线，得到反应速率k0；(3)根据反应速率k0和标准工作曲线，得到待测样品中碳酸酐酶的酶活性。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中待测样品为牛血或血红蛋白类氧载体原液稀释液；和/或步骤(1)中缓冲溶液为Tris
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HCl缓冲溶液；和/或步骤(1)中反应底物为二氧化碳饱和溶液；和/或步骤(1)中酸碱指示剂为溴百里酚蓝。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(1)中缓冲溶液的pH为6.50
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8.30，优选为7.60
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8.30；和/或步骤(1)中缓冲溶液的浓度为0.01mol/L
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0.03mol/L，优选为0.015
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0.025mol/L。4.根据权利要求1
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3任意一项所述的方法，其特征在于：步骤(1)中酸碱指示剂的浓度为0.01g/L
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0.03g/L，优选为0.012g/L
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0.02g/L。5.根据权利要求1
‑
4任意一项所述的方法，其特征在于：在波长570nm
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650nm，优选为600nm
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈刚，蔡伟江，邓蓉琪，夏烈文，郑春辉，万章，莫德欢，王瑶曦，
申请(专利权)人：云锦华彰北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：