一种人源性血红蛋白类氧载体的制备方法及其产品和应用技术

本发明专利技术实施例提供了一种人源性血红蛋白类氧载体的制备方法、产品和应用，采用本申请的方法制备人源性血红蛋白类氧载体，由于加入了特定的酶活保护剂，能够有效提高聚合过程中酶活的回收率，从而获得一种酶活性更高，进而具有更高的载氧能力的人源性血红蛋白类氧载体。体。体。

【技术实现步骤摘要】
一种人源性血红蛋白类氧载体的制备方法及其产品和应用


[0001]本专利技术涉及血红蛋白类氧载体
，特别是涉及一种人源性血红蛋白类氧载体的制备方法及其产品和应用。

技术介绍

[0002]输血是临床重要的救助治疗措施，但同时存在着需进行交叉配型、存在各种病毒交叉感染的危险、血源紧张、贮存期较短等诸多限制。血红蛋白类氧载体(Hemoglobin
‑
Based Oxygen Carriers,HBOCs)是一种新兴的具有携氧功能的血液代用品，具有可长时间保存、无需配型、便于运输、感染风险低等优点，其表现出良好治疗效果的同时也存在诸多问题，诸如在氧化应激、影响血管收缩、产生肾毒性损伤等毒副作用。Polymerized hemoglobin
‑
superoxide dismutase
‑
catalase
‑
Carbonic Anhydrase(PolyHb
‑
SOD
‑
CAT
‑
CA)是一种为解决上述问题进行优化的HBOCs产品。
[0003]PolyHb
‑
SOD
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CAT
‑
CA是一种血红蛋白与超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和碳酸酐酶(CA)复合而成的血红蛋白类氧载体，其中，超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和碳酸酐酶也来源于原料血中，从原料血中和血红蛋白一起被提取出来，并在体外进一步与血红蛋白交联、聚合；在体外的聚合过程中，酶会发生变性失活或是未交联被筛除，尤其是以人源性血红蛋白时，二聚体的产生使酶的交联更加困难，导致酶活的损失率较大。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种人源性血红蛋白类氧载体的制备方法及其产品和应用。
[0005]本申请第一方面提供了一种人源性血红蛋白类氧载体的制备方法，其包括：
[0006](1)将人源血液进行清洗、破膜、有机溶剂萃取，取水相，离心，取上清液，得到血红蛋白溶液；
[0007](2)调节反应体系的pH为7
‑
9，向所述血红蛋白溶液中加入浓度为1.5
‑
2.5mol/L的赖氨酸，和终浓度为0.5
‑
2％(w/v)的酶活保护剂，搅拌并加入浓度为0.5
‑
1.5％(w/v)的戊二醛，其中，戊二醛与血红蛋白的摩尔比为(10
‑
20)：1，赖氨酸与血红蛋白的摩尔比为(5
‑
10):1；
[0008](3)2℃
‑
25℃的反应温度下进行聚合反应，反应时间2
‑
6小时；
[0009](4)加入浓度为1.5
‑
2.5mol/L的赖氨酸终止反应，其中，赖氨酸与血红蛋白的物质的量之比为(180
‑
220):1；
[0010](5)离心，取上清液，获得人源性血红蛋白类氧载体溶液。
[0011]本申请第二方面提供了采用本申请第一方面的方法制备的人源性血红蛋白类氧载体。
[0012]本申请第三方面提供了采用本申请第一方面的方法制备的人源性血红蛋白类氧载体作为血液代用品的用途。
[0013]采用本申请的方法制备人源性血红蛋白类氧载体，由于加入了特定的酶活保护剂，能够有效提高聚合过程中酶活的回收率，从而获得一种酶活性更高，进而具有更高的载氧能力的人源性血红蛋白类氧载体。
附图说明
[0014]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0015]图1为实施例1
‑
20的人源性血红蛋白类氧载体中SOD的酶活回收率结果；
[0016]图2为实施例1
‑
20的人源性血红蛋白类氧载体中CAT的酶活回收率结果；
[0017]图3为实施例1
‑
20的人源性血红蛋白类氧载体中CA的酶活回收率结果。
具体实施方式
[0018]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0019]本申请第一方面提供了一种人源性血红蛋白类氧载体的制备方法，其包括：
[0020](1)将人源血液进行清洗、破膜、有机溶剂萃取，取水相，离心，取上清液，得到血红蛋白溶液；
[0021](2)调节反应体系的pH为7
‑
9，向所述血红蛋白溶液中加入浓度为1.5
‑
2.5mol/L的赖氨酸，和终浓度为0.5
‑
2％(w/v)的酶活保护剂，搅拌并加入浓度为0.5
‑
1.5％(w/v)的戊二醛，其中，戊二醛与血红蛋白的摩尔比为(10
‑
20)：1，赖氨酸与血红蛋白的摩尔比为(5
‑
10):1；
[0022](3)2℃
‑
25℃的反应温度下进行聚合反应，反应时间2
‑
6小时；
[0023](4)加入浓度为1.5
‑
2.5mol/L的赖氨酸终止反应，其中，赖氨酸与血红蛋白的物质的量之比为(180
‑
220):1；
[0024](5)离心，取上清液，获得人源性血红蛋白类氧载体溶液。
[0025]本申请对步骤(1)中提取血红蛋白溶液的条件(包括清洗、破膜、萃取剂离)不做限定，只要能够实现本专利技术本专利技术的目的即可，本领域技术人员可采用现有技术得到血红蛋白溶液，例如，采用生理盐水清洗，采用纯净水破膜，采用正己烷进行萃取等。
[0026]超氧化物歧化酶与过氧化氢酶在体内的半衰期极短，通过聚合将其交联在聚合血红蛋白上，能有效延长其作用周期，同时交联碳酸酐酶分解二氧化碳，起到天然红细胞中运输二氧化碳的功能；然而人源性血红蛋白在体外条件下容易降解成为二聚体状态，使酶的交联更加困难，在交联过程中，酶容易失活，专利技术人在研究中发现，当采用本申请的特定的反应条件，包括反应温度、反应时间、pH值以及戊二醛和赖氨酸的用量，配合特定浓度的酶活保护剂，可以使人源性血红蛋白与酶聚合成人源性血红蛋白类氧载体的过程中，有效的提高酶活回收率，从而使产物具有更高的酶活性和携氧能力。
[0027]在本申请第一方面的一些实施方式中，所述酶活保护剂选自海藻糖、葡萄糖、甘露醇、羟丙基
‑
β
‑
环糊精和蔗糖中的至少一种。专利技术人发现，当加入本申请的酶活保护剂后，SOD、C本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人源性血红蛋白类氧载体的制备方法，其包括：(1)将人源血液进行清洗、破膜、有机溶剂萃取，取水相，离心，取上清液，得到血红蛋白溶液；(2)调节反应体系的pH为7
‑
9，向所述血红蛋白溶液中加入浓度为1.5
‑
2.5mol/L的赖氨酸，和终浓度为0.5
‑
2％(w/v)的酶活保护剂，搅拌并加入浓度为0.5
‑
1.5％(w/v)的戊二醛，其中，戊二醛与血红蛋白的摩尔比为(10
‑
20)：1，赖氨酸与血红蛋白的摩尔比为(5
‑
10):1；(3)2℃
‑
25℃的反应温度下进行聚合反应，反应时间2
‑
6小时；(4)加入浓度为1.5
‑
2.5mol/L的赖氨酸终止反应，其中，赖氨酸与血红蛋白的物质的量之比为(180
‑
220):1；(5)离心，取上清液，获得人源性血红蛋白类氧载体溶液。2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述酶活保护剂选自海藻糖、葡萄糖、甘露醇、羟丙基
‑
β
‑
环糊精和蔗糖中的至少一种。3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(2)中，赖氨酸、戊二醛与血红蛋白的摩尔比为(6.5
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7.5)：(15
‑
20)：1。4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(2)中，反应体系的pH为7
‑
8。5.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王瑶曦，陈刚，
申请(专利权)人：云锦华彰北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：