apoea基因缺失斑马鱼突变体的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种apoea基因缺失斑马鱼突变体的制备方法，将人工合成的SgRNA片段和商业化的Cas9蛋白混合后，通过显微注射将混合液注射到1细胞期的斑马鱼受精卵中，受精卵培养后孵化，即得；SgRNA片段具有序列表SEQ.ID.NO.1的碱基序列。据此，还建立了一种动脉粥样硬化或高脂血症动物模型。相比传统方法，本发明专利技术具有如下显著优势(1)实验周期短；(2)过程简单方便，且基因编辑成功率高；(3)建模时间短，效果稳定的特点。因此，本发明专利技术可缩短高脂血症及动脉粥样硬化发病进程、加深发病程度，造模时间短，在幼鱼期实现疾病造模，有利于实验过程中的活体实施观察，可成为斑马鱼高脂血症及动脉粥样硬化疾病良好的动物模型。血症及动脉粥样硬化疾病良好的动物模型。

【技术实现步骤摘要】
apoea基因缺失斑马鱼突变体的制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于基因编辑
，尤其涉及一种apoea基因缺失斑马鱼突变体的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]心血管疾病已经成为威胁人类健康的首要因素，动脉粥样硬化是心血管疾病的最主要也是最关键的疾病类型，这种病与其他形式的心血管病有关，如冠状动脉疾病、缺血性中风、高血压和外周动脉疾病，动脉粥样硬化斑块的破裂导致血栓形成是引发心脑血管死亡的重要原因之一。动脉粥样硬化发病机制复杂，其机制研究目前研究仍不充分，另外目前临床上用于动脉粥样硬化的治疗策略和手段仍比较有限，主要是通过降低血脂来实现的，针对关键发病机制的研究以及靶点药物研发扔需要更多的研究和验证。
[0003]动物疾病模型是现代医学研究的重要工具。最初的动脉粥样硬化动物模型是通过高胆固醇饮食诱导获得的，包括小鼠、兔子、猪和非人类灵长类动物等物种。目前大量的动脉粥样硬化研究依赖于小鼠疾病模型，主要为ApoE基因敲除小鼠以及LDL受体LDLr基因敲除小鼠。特别是ApoE基因敲除小鼠，因其可在正常饮食条件下会自发的形成本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种apoea基因缺失斑马鱼突变体的制备方法，其特征在于：将人工合成的SgRNA片段和商业化的Cas9蛋白混合后，通过显微注射将混合液注射到1细胞期的斑马鱼受精卵中，受精卵培养后孵化，即得；所述SgRNA片段具有序列表SEQ.ID.NO.1的碱基序列。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述SgRNA片段是采用一对基因编辑的靶位点序列，加入SgRNA骨架，利用RNA序列体外合成；所述靶位点序列为SgRNAEa1和SgRNAEa2，它们分别具有序列表SEQ.ID.NO.2和SEQ.ID.NO.3的碱基序列。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述SgRNA片段和Cas9蛋白按1:1摩尔比例混合。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：张帆，郝二伟，邓家刚，侯小涛，杜正彩，夏中尚，谢金玲，
申请(专利权)人：广西中医药大学，
类型：发明
国别省市：