一种靶向于VEGFR2的抗体偶联药物及其制备与应用制造技术

本发明专利技术提供一种靶向于VEGFR2的抗体偶联药物及其制备与应用。该抗体偶联药物由抗体片段anti

【技术实现步骤摘要】
一种靶向于VEGFR2的抗体偶联药物及其制备与应用


[0001]本专利技术属生物技术药物领域，具体涉及一种靶向于VEGFR2的抗体偶联药物及其制备与应用，是一类靶向于VEGFR2的肾脏疾病靶向修复作用的抗体偶联药物、其制备方法及利用其为模板制备治疗肾脏相关疾病药物的应用。

技术介绍

[0002]肾脏疾病发病率逐年增高，已成为重要的公共卫生问题。开发高效肾病治疗药物仍面临巨大的临床需求。肾脏靶向药物递送是提高肾病治疗药物疗效的重要手段。抗体偶联药物将单克隆抗体药物的高特异性和小分子药物的高活性相结合，利用抗体选择性地将药物靶向递送到病灶部位，具有高特异性，低不良反应的特点，已成为近年来开发的主要一类新药，在肿瘤以外的免疫、代谢疾病中广泛应用。但是抗体偶联药物在肾脏疾病领域却应用较少，重要原因是其肾脏分布能力差，利用度低，反而导致副作用。研究表明，分子量是影响药物或载体肾脏分布的重要因素之一。对于IgG类型抗体(由F(ab
′
)2和Fc组成)，去除Fc段来减小单抗分子量，可在不显著影响其抗体
‑
受体特异性结合能力的同时，降低非特异性结合，有望成为抗体偶联药物应用于肾脏疾病领域的一种策略。
[0003]血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)过度激活广泛发生在多种与炎症和纤维化相关的慢性肾脏疾病(如糖尿病肾病、透明闭塞性肾小球微血管病、肾小球肾炎、肾小球硬化症)中。VEGFR2是VEGF和Gremlin的特异性受体。VEGF/VEGFR2的激活是刺激血管内皮细胞的主要机制，VEGF又称血管通透因子，通过与VEGFR2作用，以改变内皮细胞结构与功能、提高内皮细胞迁移与渗漏、增加肾小球毛细血管通透性、促进细胞外基质合成、肾脏肥大等机理参与慢性肾病进展；Gremlin激活VEGFR2主要发生在小管间质，通过损伤肾小管间质促进纤维化参与肾损害。研究显示，采用VEGFR2单抗(anti
‑
VEGFR2)特异性阻断VEGFR2通路，可改善肾功能、肾小球损伤(系膜基质扩张和基底膜增厚)、肾小管间质损伤，以及促炎症介质的下调。因此，anti
‑
VEGFR2是治疗炎症、纤维化相关的慢性肾病的候选抗体。由于慢性肾病的病理机制复杂，多靶点治疗有助于提高治疗效果，因此制备抗体偶联药物时可使用与anti
‑
VEGFR2不同靶点且适用于肾脏疾病治疗的(小分子、多肽、核酸等)药物，如抗炎药物糖皮质激素地塞米松、布地奈德，抑制细胞自噬凋亡天然产物提取物芍药苷，保护内皮屏障功能多肽中介素8
‑
47，线粒体靶向抗氧化肽SS31，抑制纤维化白介素11siRNA。值得一提的是，上述药物在应用中存在不足之处，包括副作用强、血浆稳定性差、细胞跨膜能力差，以anti
‑
VEGFR2的F(ab
′
)2片段(anti
‑
VEGFR2 F(ab
′
)2)偶联上述药物，可有效提高药物的肾脏递送效率并改善其缺点。另外，anti
‑
VEGFR
‑
2(Fab
′
)2可阻断VEGFR2，具有一定的治疗作用，这也为抗体和药物的多靶点治疗提供了可能。连接子负责连接抗体和药物，通过合理设计可提高药物血浆稳定性和实现可控释放。在肾脏疾病病理微环境中，氧化应激是典型特征之一，表现为细胞内ROS水平增加。酮缩硫醇键(TK键)具有ROS响应性，以其作为连接子，可在ROS水平增加的损伤细胞中释放药物从而发挥治疗作用。

技术实现思路

[0004]本专利技术的第一个目的是提供一种靶向于VEGFR2的抗体偶联药物，结构示意如式1所示：其中n＝1～8。
[0005]该抗体偶联药物由抗体片段anti
‑
VEGFR2 F(ab
′
)2(分子量110kDa)、连接键酮缩硫醇(NHS
‑
TK
‑
NHS，式2)和模型药物通过酰胺反应合成。模型药物为含有或修饰有
‑
NH2基团的药物或与VEGFR2单抗有协同治疗作用的肾脏疾病治疗药物，包括SS31(CAS号736992
‑
21
‑
5，分子式C
32
H
49
N9O5，抗氧化肽)、地塞米松(CAS号4089
‑
36
‑
5，分子式C
22
H
29
FO5，糖皮质激素)、布地奈德(CAS号51333
‑
22
‑
3，分子式C
25
H
34
O6，糖皮质激素)、芍药苷(CAS号23180
‑
57
‑
6，分子式C
23
H
28
O
11
，抑制细胞自噬凋亡天然产物)、中介素8
‑
47(氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，Val
‑
Gly
‑
Cys
‑
Val
‑
Leu
‑
Gly
‑
Thr
‑
Cys
‑
Gln
‑
Val
‑
Gln
‑
Asn
‑
Leu
‑
Ser
‑
His
‑
Arg
‑
Leu
‑
Trp
‑
Gln
‑
Leu
‑
Val
‑
Arg
‑
Pro
‑
Ala
‑
Gly
‑
Arg
‑
Arg
‑
Asp
‑
Ser
‑
Ala
‑
Pro
‑
Val
‑
Asp
‑
Pro
‑
Ser
‑
Ser
‑
Pro
‑
His
‑
Ser
‑
Tyr
‑
NH2(Disulfide bridge:Cys10
‑
Cys15)，保护内皮屏障功能多肽)和白介素11siRNA(核苷酸序列SEQ ID NO.2：Sense(5
’‑3’
)GCUGUUCUCCUAACCCGAUTT,SEQ ID NO.3：Anti
‑
sense(5
’‑3’
)AUCGGGUUAGGAGAACAGCTT，抑制纤维化小干扰RNA)。
[0006][0007]本专利技术的第二个目的是提供靶向于VEGFR2的抗体偶联药物(anti
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向于VEGFR2的抗体偶联药物，其特征在于，该抗体偶联药物由抗体片段anti
‑
VEGFR2 F(ab
′
)2、连接键酮缩硫醇、模型药物通过酰胺反应合成，结构示意如式1所示：其中：n＝1～8，模型药物为含有或修饰有
‑
NH2基团的药物或与VEGFR2单抗有协同治疗作用的肾脏疾病治疗药物。2.根据权利要求1所述的抗体偶联药物，其特征在于，所述模型药物包括SS31、地塞米松、布地奈德、芍药苷、中介素8
‑
47和白介素11siRNA。3.根据权利要求2所述的抗体偶联药物，其特征在于，中介素8
‑
47的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，白介素11siRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。4.权利要求1所述的一种靶向于VEGFR2的抗体偶联药物的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)anti
‑
VEGFR2 F(ab
′
)2抗体片段的制备取7mg/mL VEGFR2单抗PBS溶液，并置换溶剂PBS为的醋酸
‑
醋酸钠缓冲液，将上述VEGFR2单抗与胃蛋白酶按照25～15:1的质量比混合，37℃恒温孵育5～7h，以降解单抗为F(ab
′
)2和Fc片段，超滤离心纯化得到F(ab
′
)2，Anti
‑
VEGFR2 F(ab
′
)2分子量约为110kDa；(2)药物偶联采用NHS
‑
TK
‑
N...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜永忠，刘迪，姜赛平，
申请(专利权)人：浙江大学金华研究院，
类型：发明
国别省市：