引物探针组及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及引物探针组及其应用。本发明专利技术提供了人ALDH2基因多态性检测试剂盒，利用ARMS引物进行荧光定量PCR基因分型，在保证体系高特异性及稳定性的同时极大的降低了试剂成本；在PCR荧光法的检测过程引入UNG酶防污染体系及人管家基因β珠蛋白同步扩增检测，全程闭管扩增，有效的降低了污染风险，更全面的监控实验的有效性；检测快速，50分钟即可完成扩增检测，结果易分析判读；兼容全血样本与口腔拭子样本，检测与使用方便，PCR试剂实现4℃保存，避免传统≤

【技术实现步骤摘要】
引物探针组及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及引物探针组及其应用。

技术介绍

[0002]人类乙醛脱氢酶2(ALDH2)是乙醛脱氢酶超家族的成员之一，ALDH2具有脱氢酶、还原酶以及硝酸酯酶活性，目前对ALDH2研究最多的是位于第12号外显子单碱基突变G1510A，G
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A突变使谷氨酸改变为赖氨酸，导致酶的空间结构发生改变，使酶的催化活性基本丧失。而一方面该酶的乙醛脱氢酶活性降低或丧失，会促使体内乙醛堆积，当血液中乙醛达到一定浓度时，则会出现面红、头痛、心动过速、呼吸困难等不良反应。另一方面该酶具有的硝酸酯酶活性是硝酸甘油(GTN)有效代谢物NO形成的关键，GTN是心绞痛急性发作时的常规首选药物，其酶活性的显著降低会影响心绞痛患者服用硝酸甘油的药效，升高硝酸甘油含服后的无效率风险，使患者在服药后不能快速获得疗效进而造成严重的后果，因此，检测ALDH2基因*2多态性对于健康饮酒及硝酸甘油的合理用药均具有一定的参考意义。
[0003]ALDH2基因多态性检测主要从DNA分子水平进行检测。常用的方法学包括基因芯片法、酶切法、毛细管电泳法、溶解曲线法、测序法、PCR荧光探针法，其中PCR荧光探针法以其快速、特异性高成为ALDH2基因多态性检测的主要方法。
[0004]基因芯片法和高分辨率溶解曲线不仅需要专门的高技术仪器支持，且特异性较差，易出现假阳性；测序技术和酶切法，其中测序虽是该检测的金标准；但操作程序繁杂，耗时极长；毛细管电泳法不仅容易污染环境，且检测速度慢，灵敏度低；荧光探针法虽是目前市场上的主流方法，但目前其试剂一般需
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20℃保存，使用前必须提前解冻，不太便捷；且MGB探针虽特异性较高，但因合成MGB探针价钱昂贵，因此造成其成本较高。所以以提高检测的准确度的同时又兼具简便、快捷、高效、经济等特点的检测技术是我们迫切需要努力的方向。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供的引物探针组及其应用，具有快速、灵敏度高、特异性好且低成本等效果。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了引物探针组，包括引物1、引物2、引物3和探针1；
[0008]所述引物1具有：
[0009](1)、如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；或
[0010](2)、如(1)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(1)的相同或相似；或
[0011](3)、与如(1)或(2)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
[0012]所述引物2具有：
[0013](4)、如SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列；或
[0014](5)、如(4)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(4)的相同或相似；或
[0015](6)、与如(4)或(5)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
[0016]所述引物3具有：
[0017](7)、如SEQ ID NO:11所示的核苷酸序列；或
[0018](8)、如(7)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(7)的相同或相似；或
[0019](9)、与如(7)或(8)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
[0020]所述探针1具有：
[0021](10)、如SEQ ID NO:18所示的核苷酸序列；或
[0022](11)、如(10)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(10)的相同或相似；或
[0023](12)、与如(10)或(11)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
[0024]所述多个为2个至5个。
[0025]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述引物探针组还包括检测内标基因的引物探针组；
[0026]所述内标基因包括β
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珠蛋白基因；
[0027]所述检测内标基因的引物探针组包括引物4、引物5和/或探针2；
[0028]所述引物4具有：
[0029](13)、如SEQ ID NO:19所示的核苷酸序列；或
[0030](14)、如(13)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(13)的相同或相似；或
[0031](15)、与如(13)或(14)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
[0032]所述引物5具有：
[0033](16)、如SEQ ID NO:20所示的核苷酸序列；或
[0034](17)、如(16)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(16)的相同或相似；或
[0035](18)、与如(16)或(17)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
[0036]所述探针2具有：
[0037](19)、如SEQ ID NO:21所示的核苷酸序列；或
[0038](20)、如(19)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(19)的相同或相似；或
[0039](21)、与如(19)或(20)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；
[0040]所述多个为2个至5个。
[0041]本专利技术还提供了引物探针组在制备ALDH2基因多态性检测试剂或试剂盒中的应用。
[0042]本专利技术还提供了试剂，包括上述引物探针组，以及可接受的辅料或助剂。
[0043]本专利技术还提供了试剂盒，包括上述引物探针组或上述试剂，以及可接受的辅料或助剂。
[0044]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒还包括反应缓冲液、rTth聚合酶、UNG酶、dNTPs或酶活性激活剂中的一种或多种；
[0045]所述反应缓冲液包括Tricine、甘油、醋酸钾、二甲基亚砜、硫酸铵或防腐剂中的一种或多种；
[0046]所述防腐剂包括10％(w/w)NaN3。
[0047]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒还包括反应液1、反应液2或反应液3中的一种或多种；
[0048]所述反应液1包括所述引物1、所述引物3、所述引物4、所述引物5、所述探针1、所述探针2和所述反应缓冲液；
[0049]所述反应液2包括所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5、所述探针1、所述探针2和所述反应缓冲液；
[0050]所述反应液3包括防腐剂和酶活性激活剂；
[0051]所述防腐剂包括10％(w/w)NaN3；
[0052]所述酶活性激活剂包括醋酸锰和/或氯化镁。
[0053]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒包括：
[0054]所述引物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.引物探针组，其特征在于，包括引物1、引物2、引物3和探针1；所述引物1具有：(1)、如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；或(2)、如(1)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(1)的相同或相似；或(3)、与如(1)或(2)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；所述引物2具有：(4)、如SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列；或(5)、如(4)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(4)的相同或相似；或(6)、与如(4)或(5)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；所述引物3具有：(7)、如SEQ ID NO:11所示的核苷酸序列；或(8)、如(7)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(7)的相同或相似；或(9)、与如(7)或(8)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；所述探针1具有：(10)、如SEQ ID NO:18所示的核苷酸序列；或(11)、如(10)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(10)的相同或相似；或(12)、与如(10)或(11)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；所述多个为2个至5个。2.如权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，还包括检测内标基因的引物探针组；所述内标基因包括β
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珠蛋白基因；所述检测内标基因的引物探针组包括引物4、引物5和/或探针2；所述引物4具有：(13)、如SEQ ID NO:19所示的核苷酸序列；或(14)、如(13)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(13)的相同或相似；或(15)、与如(13)或(14)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；所述引物5具有：(16)、如SEQ ID NO:20所示的核苷酸序列；或(17)、如(16)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(16)的相同或相似；或(18)、与如(16)或(17)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；所述探针2具有：(19)、如SEQ ID NO:21所示的核苷酸序列；或(20)、如(19)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(19)的相同或相似；或
(21)、与如(19)或(20)所示的核苷酸序列至少有90％同源性的核苷酸序列；所述多个为2个至5个。3.如权利要求1或2所述的引物探针组在制备ALDH2基因多态性检测试剂或试剂盒中的应用。4.试剂，其特征在于，包括如权利要求1或2所述的引物探针组，以及可接受的辅料或助...

【专利技术属性】
技术研发人员：高林林，李江浩，陈静，段晓蒙，王英东，郑业焕，付光宇，吴学炜，
申请(专利权)人：郑州安图生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：