一种夏枯草籽中咖啡酸的检测方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种夏枯草籽中咖啡酸的检测方法及其应用。该检测方法包括利用薄层色谱法对夏枯草籽中咖啡酸进行定性鉴别；利用特定的极性溶剂提取法直接提取咖啡酸并与脂溶性成分分离，再通过咖啡酸对照品对照，用高效液相色谱法对夏枯草籽中的咖啡酸进行含量测定。该检测方法具有准确度和精密度高、稳定性和重复性好等优点，提供了夏枯草籽开发利用中咖啡酸成分质量检测的方法，具有较强的专属性和良好的重现性。好的重现性。好的重现性。

【技术实现步骤摘要】
一种夏枯草籽中咖啡酸的检测方法及其应用


[0001]本专利技术涉及一种药品、保健品或食品的质量分析方法，特别涉及一种夏枯草籽中咖啡酸的检测方法及其应用。

技术介绍

[0002]夏枯草为唇形科(Lamiaceae)植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗，始载于《神农本草经》，因“此草夏至后即枯”而得名，是一种药食同源的多年生草本植物，至今已有几千年的药用历史，现收载于2015年版之《中国药典》。夏枯草味苦、辛，性寒，归肝、胆经，可清肝散火、明目、散结消肿，对目赤肿痛、畏光流泪、目珠夜痛、头晕目眩、瘰疬、瘿瘤、乳腺癌、高血压、淋巴结核、浸润性肺结核、单纯性甲状腺肿、腮腺炎、急性黄疸型传染性肝炎等多种疾病均有良好的临床治疗效果。现代研究表明，夏枯草中含有多种化学成分：包括三萜、甾醇、黄酮、有机酸、香豆素等类型化合物。其具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒、免疫调节、降血压、降血糖、降血脂等药理作用。夏枯草籽为唇形科(Lamiaceae)植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥成熟种子，为夏枯草的生殖种子,应具有夏枯草的遗传活性物质与作用,但其在食用、保健或药物中的应用价值还未受到重视，还未见到其研究的相关报导，特别是夏枯草籽的质量控制方法更是空白。
[0003]咖啡酸(结构如下所示)，英文名Caffeicacid，又名3,4
‑
二羟基肉桂酸，是一种有机酸，分子式为C9H8O4，分子量180.15，从浓水溶液所得为黄色结晶，从稀水溶液所得为水合物；其分解点223～225
°
(在194
°
软化)，微溶于冷水，易溶于热水及冷乙醇。咖啡酸主要作用有：1.升高白细胞和血小板作用：咖啡酸为现有的止血药，为止血升白细胞药，具有收缩增固微血管、提高凝血因子的功能、升高白细胞和血小板的作用。2.抗炎作用：咖啡酸可以清除炎症反应发生时中性粒细胞和巨噬细胞释放出的氧自由基，显着改善白细胞减少症、氧化应激和炎症。另外，咖啡酸通过抑制NF
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κB活化和降低促炎性细胞因子的表达来阻止这种细胞，增强机体的抗炎作用。3.抗菌抗病毒作用：咖啡酸具有较广泛的抑菌作用,体外试验表明，有抗病毒活性，对牛痘和腺病毒抑制作用较强，其次为脊髓灰质炎Ⅰ型和副流感Ⅲ型病毒。4.抗氧化作用:咖啡酸具有良好的抗氧化特性，其氧化活性与分子结构有着密切的关系。咖啡酸及其类似物是有效的天然抗氧化剂，具有自由基清除机制，又被称为直接抗氧化机制，咖啡酸和羟基肉桂酸是植物中存在的天然抗氧化剂；5.抗癌作用:咖啡酸苯乙酯(CAPE)是一种天然的抗癌活性产物，CAPE通过抑制活性氧的产生，在转录后水平上调节炎性因子，表现出显著的抑制癌细胞的增殖与迁移的功能。具有咖啡酰/肉桂酰基的咖啡酸衍生物对人乳腺癌细胞(MCF
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7)和非癌细胞(MCF10A)增殖的影响表明咖啡酰/肉桂酰基对MCF10A增殖没有影响，对癌细胞而不是非癌细胞的选择性毒性或生长抑制是咖啡酸化合物在抗癌作用中的一个关键特征；咖啡酸及其衍生物的抗肿瘤活性很早就引起了人们的关注，咖啡中的咖啡酸能够抑制乳腺癌细胞的增长。6.降糖作用：
⑴
研究表明，糖尿病与氧化应激存在一定的联系，而咖啡酸及其衍生物的抗氧化作用也对于糖尿病的治疗起到了积极作用，研究发现咖啡酸可以减少内皮细胞对于葡萄糖的吸收，能够促进肝脏糖原的分解；
⑵
糖尿病肾病(DN)是一种常见且难治的糖尿病微血管并发症。咖啡酸是一种广泛分布于自然界的酚类化合物，已被证明对DN治疗有效；咖啡酸独特而简单的化学结构使其具有良好的抗氧化、抗炎、抗病毒等药理活性，被认为是治疗糖尿病肾病的良好替代药物；咖啡酸能有效通过降低尿蛋白、保护肾功能治疗DN，其药理机制与降糖、自噬、抗炎、抗氧化有关。7.其它作用：咖啡酸可提高大鼠的中枢兴奋性；可增加人胃中盐酸的分泌量，并能使脉搏变慢；可增强子宫的张力，可增进大鼠胆汁分泌；有升高白血球、止血及灭活维生素B1等作用；能抑制鼠脑组织匀浆脂质过氧化物的生成；有缩短血凝及出血时间的作用；有抗蛇毒作用：咖啡酸3微克剂量时能完全抑制20微克响尾蛇毒磷酸二酯酶，用作抗蛇毒剂。
[0004][0005]本专利技术首次发现夏枯草籽中含有咖啡酸类成分，并首次创立了夏枯草籽中咖啡酸的检测方法，该检测方法包括利用薄层色谱法对夏枯草籽咖啡酸进行定性鉴别；利用极性溶剂提取法将脂溶性成分与咖啡酸类极性成分分离，再用咖啡酸对照品对照，用高效液相色谱法对夏枯草籽中的咖啡酸进行含量测定。为夏枯草籽及其制品的开发和利用提供了方法和依据。

技术实现思路

[0006]本专利技术的首要目的是针对夏枯草籽的质量控制方法还是空白，首次发现了夏枯草籽中富含咖啡酸类成分，并首建立开了夏枯草籽中咖啡酸的检测方法，从而提供一种具有准确度和精密度高、稳定性和重复性好的夏枯草籽中咖啡酸的检测方法。
[0007]本专利技术的另一目的在于提供上述夏枯草籽中咖啡酸的检测方法的应用。
[0008]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种夏枯草籽中咖啡酸的检测方法，包括如下步骤：利用薄层色谱法对夏枯草籽中咖啡酸进行定性鉴别；利用特定的极性溶剂提取法直接提取咖啡酸并与脂溶性成分分离，再以咖啡酸对照品对照，用高效液相色谱法对夏枯草籽中的咖啡酸进行含量测定。
[0009]所述的薄层色谱检测法的具体步骤如下：
[0010](1)供试品溶液的制备：
[0011]夏枯草籽供试品溶液的制备：
[0012]A、将夏枯草籽粉末加入甲醇水溶液中超声提取，过滤，得到的滤液除去溶剂，得到残渣；
[0013]B、残渣用甲醇溶解，过滤，得到夏枯草籽粉供试品溶液；
[0014](2)对照品溶液的制备：用甲醇溶解咖啡酸对照品，作为对照品溶液；
[0015](3)薄层色谱(TLC)检测：吸取供试品溶液和对照品溶液分别点于同一高效硅胶GF
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薄层板上，用展开剂展开，取出，晾干；
[0016](4)观察硅胶GF
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薄层板：分别置紫外光灯254nm与紫外光灯365nm下检识；观察供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上是否存在相同颜色的斑点，即可鉴定出夏枯草
籽中是否含有咖啡酸成分。
[0017]步骤(1)中所述的夏枯草粉末优选为通过如下步骤得到：将夏枯草籽粉碎破壁，过至少40目筛，得到夏枯草粉末。
[0018]所述的筛优选为40
‑
50目的筛。
[0019]步骤(1)A中所述的甲醇水溶液中甲醇的含量优选为体积百分比40～60％；更优选体积百分比50％。
[0020]步骤(1)A中所述的甲醇水溶液的用量优选按1.0～5.0g夏枯草籽粉末配比50～250mL甲醇水溶液计算；更优选按2.5g夏枯草籽粉末配比2mL甲醇水溶液计算。
[0021]步骤(1)A中所述的超声提取的条件优选为于功率50～200W、频率40～60kHz提取20～80分钟；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种夏枯草籽中咖啡酸的检测方法，其特征在于包括如下步骤：利用薄层色谱法对夏枯草籽中咖啡酸进行定性鉴别；利用特定的极性溶剂提取法直接提取咖啡酸并与脂溶性成分分离，再以咖啡酸对照品对照，用高效液相色谱法对夏枯草籽中的咖啡酸进行含量测定。2.根据权利要求1所述的夏枯草籽中咖啡酸的检测方法，其特征在于：所述的薄层色谱检测法的具体步骤如下：(1)供试品溶液的制备：夏枯草籽供试品溶液的制备：A、将夏枯草籽粉末加入甲醇水溶液中超声提取，过滤，得到的滤液除去溶剂，得到残渣；B、残渣用甲醇溶解，过滤，得到夏枯草籽粉供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：用甲醇溶解咖啡酸对照品，作为对照品溶液；(3)薄层色谱检测：吸取供试品溶液和对照品溶液分别点于同一高效硅胶GF
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薄层板上，用展开剂展开，取出，晾干；(4)观察硅胶GF
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薄层板：分别置紫外光灯254nm与紫外光灯365nm下检识；观察供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上是否存在相同颜色的斑点，即可鉴定出夏枯草籽中是否含有咖啡酸成分。3.根据权利要求2所述的夏枯草籽中咖啡酸的检测方法，其特征在于：步骤(1)中所述的夏枯草粉末通过如下步骤得到：将夏枯草籽粉碎破壁，过至少40目筛，得到夏枯草粉末；步骤(1)A中所述的超声提取的条件为于功率50～200W、频率40～60kHz提取20～80分钟；步骤(1)A中所述的甲醇水溶液中甲醇的含量为体积百分比40～60％；步骤(1)A中所述的甲醇水溶液的用量按1.0～5.0g夏枯草籽粉末配比50～250mL甲醇水溶液计算；步骤(1)B中所述的甲醇的用量按1.0～5.0g夏枯草籽粉末配比1～3mL甲醇计算；步骤(3)中所述的展开剂为甲苯
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乙酸乙酯
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异丙醇
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甲酸溶液。4.根据权利要求3所述的夏枯草籽中咖啡酸的检测方法，其特征在于：步骤(1)A中所述的超声提取的条件为于功率80～150W、频率45～50kHz提取30～60分钟步骤(1)A中所述的甲醇水溶液中甲醇的含量为体积百分比50％；步骤(1)B中所述的甲醇的用量按2.5g夏枯草籽粉末配比2mL甲醇水溶液计算；步骤(3)中所述的展开剂为按体积比6.4～6.6:1.9～2.1:0.9～1.1:0.4～0.6混合得到的甲苯
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乙酸乙酯
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异丙醇
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甲酸溶液。5.根据权利要求2所述的夏枯草籽中咖啡酸的检测方法，其特征在于：步骤(1)A中所述的除去溶剂为通过蒸干方式除去溶剂；步骤(1)B中所述的过滤为使用0.45μm的滤膜过滤；步骤(2)中所述的对照品溶液中咖啡酸的浓度为0.9～1.1mg/mL；步骤(3)中所述的供试品溶液的用量为2～10μL；
步骤(3)中所述的对照品溶液的用量为2～10μL。6.根据权利要求1所述的夏枯草籽中咖啡酸的检测方法，其特征在于：所述的特定的极性溶剂提取法是以体积百分比...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈斌，李颖，袁程，曾宇城，陈火林，陈娇，程昌奎，
申请(专利权)人：江西鑫康健科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：