一种夏枯草籽中异迷迭香酸苷的检测方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种夏枯草籽中异迷迭香酸苷的检测方法及其应用。该检测方法包括利用薄层色谱法对夏枯草籽中异迷迭香酸苷进行定性鉴别；利用特定的极性溶剂提取法直接提取异迷迭香酸苷并与脂溶性成分分离，再以异迷迭香酸苷对照品对照，用高效液相色谱法对夏枯草籽中的异迷迭香酸苷进行含量测定。该检测方法具有准确度和精密度高、稳定性和重复性好等优点，提供了夏枯草籽开发利用中异迷迭香酸苷成分质量检测的方法，具有较强的专属性和良好的重现性。现性。现性。

【技术实现步骤摘要】
一种夏枯草籽中异迷迭香酸苷的检测方法及其应用


[0001]本专利技术涉及一种药品、保健品、食品或化妆品的质量分析方法，特别涉及一种夏枯草籽中异迷迭香酸苷的检测方法及其应用。

技术介绍

[0002]夏枯草为唇形科(Lamiaceae)植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗，始载于《神农本草经》，因“此草夏至后即枯”而得名，是一种药食同源的多年生草本植物，至今已有几千年的药用历史，现收载于2015年版之《中国药典》。夏枯草味苦、辛，性寒，归肝、胆经，可清肝散火、明目、散结消肿，对目赤肿痛、畏光流泪、目珠夜痛、头晕目眩、瘰疬、瘿瘤、乳腺癌、高血压、淋巴结核、浸润性肺结核、单纯性甲状腺肿、腮腺炎、急性黄疸型传染性肝炎等多种疾病均有良好的临床治疗效果。现代研究表明，夏枯草中含有多种化学成分：包括三萜、甾醇、黄酮、有机酸、香豆素等类型化合物，其具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒、免疫调节、降血压、降血糖、降血脂等药理作用。夏枯草籽为唇形科(Lamiaceae)植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥成熟种子，为夏枯草的生殖种子，应具有夏枯草的遗传活性物质与作用，但其在食用、保健或药物中的应用价值还未受到重视，还未见到其异迷迭香酸苷的相关报导，特别是夏枯草籽中异迷迭香酸苷的质量控制方法更是空白。
[0003]异迷迭香酸苷(结构式如下所示)又名迷迭香酸苷，英文名称：salviaflaside，Rosmarinic acid
‑3‑
O
‑
glucoside，分子式：C
24
H
26
O
13
，分子量:522.4；为白色结晶性粉末，可溶于甲醇、乙醇、DMSO等有机溶剂，药理研究表明，异迷迭香酸苷具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎活性、免疫抑制活性、抗血栓的作用。异迷迭香酸苷为迷迭香酸与一分子葡萄糖结合形成的苷，应具有和迷迭香酸相同或相近的药理作用。异迷迭香酸苷的药理研究的报道相对较少，而迷迭香酸的药理研究的报道相对较多。现代药理研究表明：迷迭香酸具有抗氧化、抗菌抗炎、抗肿瘤、抗抑郁和抗焦虑、改善肾脏疾病、保肝等多方面药理学活性。其作用及作用机理主要为：
⑴
抗氧化作用：迷迭香酸具有较强的抗氧化和清除体内自由基的作用，该作用与其邻二酚羟基的结构有关；
⑵
抗菌抗炎作用：迷迭香酸对金黄色葡萄球菌、藤黄细球菌、大肠杆菌、枯草杆菌等细菌均有明显的抑制作用，对牛皮癣、皮肤炎、呼吸道炎症、急性肺损伤等多种炎症均有一定的抑制作用；
⑶
抗肿瘤作用：迷迭香酸对结直肠癌、乳腺癌、宫颈癌、白血病、肺癌、肝癌等多种肿瘤有明显的抑制作用，其抗肿瘤机制可能与提高机体免疫功能和有效地抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭并诱导凋亡有关；
⑷
抗抑郁和抗焦虑作用：迷迭香酸的抗抑郁作用，体外实验发现迷迭香酸可促进新生大鼠星形胶质细胞的增殖，体内实验发现迷迭香酸可改善慢性不可预见应激抑郁模型大鼠的抑郁样行为，低剂量的迷迭香酸能够发挥抗焦虑作用；
⑸
保肝作用：迷迭香酸能够抑制肝星状细胞HSCs的增殖分化，通过抑制TGF
‑
β1和CTGF的表达对抗四氯化碳诱导的抗纤维化；
⑹
改善肾脏疾病作用：迷迭香酸有改善肾脏相关疾病的作用，主要表现为减少尿酸生成，抑制肾小球肾炎以及延缓慢性肾功能不全。
[0004][0005]本专利技术首次发现夏枯草籽中富含异迷迭香酸苷成分，并首次创立了夏枯草籽中异迷迭香酸苷的检测方法，该检测方法包括利用薄层色谱法对夏枯草籽异迷迭香酸苷进行定性鉴别；利用极性溶剂提取法将脂溶性成分与异迷迭香酸苷类极性成分分离，再用异迷迭香酸苷对照品对照，用高效液相色谱法对夏枯草籽中的异迷迭香酸苷进行含量测定。为夏枯草籽及其制品的开发和利用提供了方法和依据。

技术实现思路

[0006]本专利技术的首要目的是针对夏枯草籽的质量控制方法还是空白，首次发现了夏枯草籽中富含异迷迭香酸苷成分，并首次建立开了夏枯草籽中异迷迭香酸苷的检测方法，从而提供一种具有准确度和精密度高、稳定性和重复性好的夏枯草籽中异迷迭香酸苷的检测方法。
[0007]本专利技术的另一目的在于提供上述夏枯草籽中异迷迭香酸苷的检测方法的应用。
[0008]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种夏枯草籽中异迷迭香酸苷的检测方法，包括如下步骤：利用薄层色谱法对夏枯草籽中异迷迭香酸苷进行定性鉴别；利用特定的极性溶剂提取法直接提取异迷迭香酸苷并与脂溶性成分分离，再以异迷迭香酸苷对照品对照，用高效液相色谱法对夏枯草籽中的异迷迭香酸苷进行含量测定。
[0009]所述的薄层色谱检测法的具体步骤如下：
[0010](1)供试品溶液的制备：
[0011]夏枯草籽供试品溶液的制备：
[0012]A、将夏枯草籽粉末加入甲醇水溶液中超声提取，过滤，得到的滤液除去溶剂，得到残渣；
[0013]B、残渣用甲醇溶解，过滤，得到夏枯草籽粉供试品溶液；
[0014](2)对照品溶液的制备：用甲醇溶解异迷迭香酸苷对照品，作为对照品溶液；
[0015](3)薄层色谱(TLC)检测：吸取供试品溶液和对照品溶液分别点于同一高效硅胶GF
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薄层板上，用展开剂展开，取出，晾干；
[0016](4)观察硅胶GF
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薄层板：分别置紫外光灯254nm与紫外光灯365nm下检识；观察供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上是否存在相同颜色的斑点，即可鉴定出夏枯草籽中是否含有异迷迭香酸苷成分。
[0017]步骤(1)中所述的夏枯草粉末优选为通过如下步骤得到：将夏枯草籽粉碎破壁，过至少40目筛，得到夏枯草粉末。
[0018]所述的筛优选为40
‑
50目的筛。
[0019]步骤(1)A中所述的甲醇水溶液中甲醇的含量优选为体积百分比40～60％；更优选体积百分比50％。
[0020]步骤(1)A中所述的甲醇水溶液的用量优选按1.0～5.0g夏枯草籽粉末配比50～250mL甲醇水溶液计算；更优选按2.0g夏枯草籽粉末配比100mL甲醇水溶液计算。
[0021]步骤(1)A中所述的超声提取的条件优选为于功率50～200W、频率40～60kHz提取20～80分钟；更优选为于功率80～150W、频率45～50kHz提取30～60分钟；最优选为于功率150W、频率45kHz提取45分钟。
[0022]步骤(1)A所述的过滤可通过滤纸过滤，也可以通过滤膜过滤。
[0023]所述的滤膜优选为0.45μm滤膜。
[0024]步骤(1)A中所述的除去溶剂优选为通过水浴加热蒸发方式除去溶剂。
[0025]步骤(1)B中所述的甲醇的用量优选按1.0～5.0g夏枯草籽粉末配比1～5mL甲醇计算；更优选按2.0g夏枯草籽粉末配比2mL甲醇水溶液计算。
[0026]步骤(1)B中所述的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种夏枯草籽中异迷迭香酸苷的检测方法，其特征在于包括如下步骤：利用薄层色谱法对夏枯草籽中异迷迭香酸苷进行定性鉴别；利用特定的极性溶剂提取法直接提取异迷迭香酸苷并与脂溶性成分分离，再以异迷迭香酸苷对照品对照，用高效液相色谱法对夏枯草籽中的异迷迭香酸苷进行含量测定。2.根据权利要求1所述的夏枯草籽中异迷迭香酸苷的检测方法，其特征在于：所述的薄层色谱检测法的具体步骤如下：(1)供试品溶液的制备：夏枯草籽供试品溶液的制备：A、将夏枯草籽粉末加入甲醇水溶液中超声提取，过滤，得到的滤液除去溶剂，得到残渣；B、残渣用甲醇溶解，过滤，得到夏枯草籽粉供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：用甲醇溶解异迷迭香酸苷对照品，作为对照品溶液；(3)薄层色谱检测：吸取供试品溶液和对照品溶液分别点于同一高效硅胶GF
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薄层板上，用展开剂展开，取出，晾干；(4)观察硅胶GF
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薄层板：分别置紫外光灯254nm与紫外光灯365nm下检识；观察供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上是否存在相同颜色的斑点，即可鉴定出夏枯草籽中是否含有异迷迭香酸苷成分。3.根据权利要求2所述的夏枯草籽中异迷迭香酸苷的检测方法，其特征在于：步骤(1)中所述的夏枯草粉末通过如下步骤得到：将夏枯草籽粉碎破壁，过至少40目筛，得到夏枯草粉末；步骤(1)A中所述的超声提取的条件为于功率50～200W、频率40～60kHz提取20～80分钟；步骤(1)A中所述的甲醇水溶液中甲醇的含量为体积百分比40～60％；步骤(1)A中所述的甲醇水溶液的用量按1.0～5.0g夏枯草籽粉末配比50～250mL甲醇水溶液计算；步骤(1)B中所述的甲醇的用量按1.0～5.0g夏枯草籽粉末配比1～5mL甲醇计算；步骤(3)中所述的展开剂为甲苯
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乙酸乙酯
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异丙醇
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甲酸溶液。4.根据权利要求3所述的夏枯草籽中异迷迭香酸苷的检测方法，其特征在于：步骤(1)A中所述的超声提取的条件为于功率80～150W、频率45～50kHz提取30～60分钟步骤(1)A中所述的甲醇水溶液中甲醇的含量为体积百分比50％；步骤(1)B中所述的甲醇的用量按2.0g夏枯草籽粉末配比2mL甲醇水溶液计算；步骤(3)中所述的展开剂为按体积比4.4～4.6:2.4～2.6:2.4～2.6:0.4～0.6混合得到的甲苯
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乙酸乙酯
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异丙醇
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甲酸溶液。5.根据权利要求2所述的夏枯草籽中异迷迭香酸苷的检测方法，其特征在于：步骤(1)A中所述的除去溶剂为通过水浴加热蒸发方式除去溶剂；步骤(1)B中所述的过滤为使用0.45μm的滤膜过滤；步骤(2)中所述的对照品溶液中异迷迭香酸苷的浓度为0.9～1.1mg/mL；步骤(3)中所述的供试品溶液的用量为2～10μL；
步骤(3)中所述的对照品溶液的用量为2～10μL。6.根据权利要求1所述的夏枯草籽中异迷迭香酸苷的检测方法，其特征在于：所述的特定的极性溶剂提取法是以体积百...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈斌，李颖，袁程，曾宇城，陈火林，陈娇，程昌奎，
申请(专利权)人：江西鑫康健科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：