调节SIRPα介导的信号传导的组合物和方法技术

本公开文本总体上涉及用于通过将膜磷酸酶特异性地顺式募集到信号调节蛋白α(SIRPα)分子的空间附近来调节细胞表面受体信号传导的组合物和方法。更具体地，本公开文本提供了新型多价蛋白结合分子，其特异性结合SIRPα并通过募集磷酸酶活性以使SIRPα的细胞内结构域去磷酸化来拮抗SIRPα介导的信号传导。还提供了可用于产生此类分子的组合物和方法，用于促进树突细胞成熟和用于产生疫苗的方法，以及用于预防和/或治疗与抑制通过SIRPα和/或CD47介导的信号转导相关的健康情况的方法。CD47介导的信号转导相关的健康情况的方法。CD47介导的信号转导相关的健康情况的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】调节SIRP
α
介导的信号传导的组合物和方法
关于联邦政府资助研发的声明
[0001]本专利技术是根据由美国国立卫生研究院授予的合同号CA177684在政府支持下完成的。政府享有本专利技术的一定权利。相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年7月24日提交的美国临时专利申请序列号63/056,156的优先权，将其公开内容通过引用以其整体并入本文，包括任何附图。序列表的并入
[0003]本申请包含序列表，其通过引用以其整体特此并入。所附的名称为“Sequence Listing_078430
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523001WO_ST25.txt”的序列表文本文件创建于2021年7月19日，并且为40KB。


[0004]本公开文本总体上涉及免疫治疗领域，并且特别地涉及多价蛋白结合分子，所述多价蛋白结合分子被设计成特异性结合信号调节蛋白α(SIRPα)分子并且通过募集磷酸酶活性来拮抗SIRPα介导的信号传导。本公开文本还提供了可用于生产此类多价多肽的组合物和方法，用于促进树突细胞成熟和用于生产疫苗的方法。还提供了可用于预防和治疗与抑制通过SIRPα和/或CD47介导的信号转导相关的健康情况的组合物和方法。

技术介绍

[0005]信号调节蛋白α(SIRPα)是先天免疫检查点受体，其主要在髓样细胞(包括单核细胞、巨噬细胞、树突细胞(DC)和嗜中性粒细胞)上表达。SIRPα在与其配体CD47相互作用时抑制先天免疫。CD47在正常组织上广泛表达，并且被几乎所有人肿瘤上调，以逃避巨噬细胞识别和程序性细胞清除。据报道，这种SIRPα/CD47相互作用负面地控制先天免疫细胞的效应子功能，例如宿主细胞吞噬作用。特别地，CD47通过SIRPα递送的抑制信号减少了FcγR依赖性抗体效应子功能，包括巨噬细胞和嗜中性粒细胞介导的抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)，限制了抗体依赖性先天免疫的诱导并促进对抗肿瘤抗体疗法的抗性。
[0006]近年来，靶向CD47
‑
SIRPα途径代表了通过促进先天性和适应性免疫应答来增强抗癌免疫的新治疗方法。与普遍表达的CD47不同，SIRPα表达主要限于髓样细胞。因此，与靶向CD47的疗法相比，靶向SIRPα可导致不同的安全性和功效特征，从而可能降低有效剂量以及改善药代动力学和药效学。
[0007]目前，对于SIRPα的拮抗，最普遍的策略是通过使用例如针对SIRPα的ECD的拮抗性抗体来阻断SIRPα的细胞外结构域(ECD)之间的配体结合。在这种情况下，阻断分子(例如拮抗剂抗体)通过与天然配体竞争结合SIRPα的ECD而起作用。然而，据报道，有效的SIRPα拮抗性抗体的开发是具有挑战性的并且受到SIRPα的CD47结合结构域内的多态性的限制，这需要泛等位基因反应性抗SIRPα抗体用于不同患者群体的治疗干预。此外，据报道，这些阻断
抗体在许多患者中无效，并且不能消除通过磷酸化机制发信号的SIRPα的基础细胞内信号传导活性(也称为静息细胞内信号传导活性)。这种不能消除基础信号传导活性经常限制ECD配体阻断策略的有效性。因此，需要新的方法以通过除ECD配体阻断机制以外的替代机制直接减少或消除SIRPα的细胞内信号传导，所述替代机制会同时减少或消除静息和配体激活的信号传导。
[0008]因此，仍然需要除了通过抗体或其他药剂直接阻断SIRPα
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配体之外的替代方法，以补充癌症和其他免疫疾病的免疫治疗的现有治疗护理标准。

技术实现思路

[0009]本公开文本总体上涉及免疫治疗剂，例如多价多肽、多价抗体和包含它们的药物组合物，其用于治疗各种健康情况，例如与抑制由感兴趣的细胞表面受体介导的细胞信号传导相关的那些健康情况。特别地，如下文更详细描述的，本公开文本的一些实施方案提供了用于调节SIRPα/CD47途径介导的细胞信号传导的组合物和方法，其通过例如将膜磷酸酶特异性募集到SIRPα的空间附近来进行，例如，通过使用多价蛋白结合剂直接连接来募集。更特定地，本公开文本提供了新型多价蛋白结合分子，其特异性结合SIRPα并由此通过募集磷酸酶活性完全或部分拮抗SIRPα信号传导。该方法(称为“通过磷酸酶募集的受体抑制”(RIPR))先前描述于例如WO 2019/222547 A1中。在一些特定的实施方案中，本公开文本的多价蛋白结合分子是多价多肽。在一些实施方案中，所述多价多肽是多价抗体。本公开文本还提供了可用于生产此类多价多肽的组合物和方法，用于促进树突细胞成熟和用于生产疫苗的方法。还提供了用于预防和/或治疗与抑制通过SIRPα/CD47途径介导的信号转导相关的健康情况的组合物和方法。
[0010]在一方面，本文提供了多价多肽，所述多价多肽包括：第一氨基酸序列，其包括(a)能够结合信号调节蛋白α(SIRPα)的第一多肽模块；和(b)第二氨基酸序列，其包含能够结合R1/R6亚家族的一种或多种受体蛋白酪氨酸磷酸酶(RPTP)的第二多肽模块。
[0011]本公开文本的多价多肽的非限制性示例性实施方案可包括以下特征中的一个或多个。在一些实施方案中，所述一种或多种RPTP包括CD45或其功能变体。在一些实施方案中，所述第一和第二多肽模块中的至少一个包括蛋白结合配体或抗原结合部分的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗原结合部分选自单链可变片段(scFv)、抗原结合片段(Fab)、纳米抗体、V
H
结构域、V
L
结构域、单结构域抗体(dAb)、V
NAR
结构域和V
H
H结构域、双抗体或其中任一种的功能性片段。在一些实施方案中，所述蛋白结合配体包括细胞表面受体的细胞外结构域(ECD)、或RPTP的ECD或其中任一种的功能变体。在一些实施方案中，所述蛋白结合配体包括CD47的ECD或其功能变体。在一些实施方案中，所述第一多肽模块经由多肽接头序列与所述第二多肽模块可操作地连接。在一些实施方案中，所述多肽接头序列包含甘氨酸
‑
丝氨酸(GS)接头或3C接头。
[0012]在一些实施方案中，本公开文本的多价多肽包含：(a)(i)CD47 ECD，(ii)多肽接头，和(iii)CD45 scFv；(b)(i)SIRPαscFv，(ii)多肽接头；和(iii)CD45 scFv；或(c)(i)CD45 V
H
H，(ii)多肽接头，和(iii)SIRPαscFv。在一些实施方案中，本公开文本的多价多肽在N末端至C末端方向上包括：(a)(i)CD47 ECD，(ii)GS接头，和(iii)CD45 scFv；或(b)(i)CD47 ECD，(ii)C3接头，和(iii)CD45 scFv。在一些实施方案中，本公开文本的多价多肽在N
末端至C末端方向上包括：(a)(i)SIRPαscFv，(ii)GS接头，和(iii)CD45scFv；或(b)(i)SIRPαscFv，(ii)C3接头，和(iii)CD45本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种多价多肽，所述多价多肽包含：第一氨基酸序列，其包含能够结合信号调节蛋白α(SIRPα)的第一多肽模块；和第二氨基酸序列，其包含能够结合R1/R6亚家族的一种或多种受体蛋白酪氨酸磷酸酶(RPTP)的第二多肽模块。2.根据权利要求1所述的多价多肽，其中所述一种或多种RPTP包含CD45或其功能变体。3.根据权利要求1
‑
2中任一项所述的多价多肽，其中所述第一和第二多肽模块中的至少一个包含蛋白结合配体或抗原结合部分的氨基酸序列。4.根据权利要求3所述的多价多肽，其中所述抗原结合部分选自单链可变片段(scFv)、抗原结合片段(Fab)、纳米抗体、V
H
结构域、V
L
结构域、单结构域抗体(dAb)、V
NAR
结构域和V
H
H结构域、双抗体或其中任一种的功能性片段。5.根据权利要求3所述的多价多肽，其中所述蛋白结合配体包含细胞表面受体的细胞外结构域(ECD)、或RPTP的ECD或其中任一种的功能变体。6.根据权利要求5所述的多价多肽，其中所述蛋白结合配体包含CD47的ECD或其功能变体。7.根据权利要求1
‑
6中任一项所述的多价多肽，其中所述第一多肽模块经由多肽接头序列与所述第二多肽模块可操作地连接。8.根据权利要求7所述的多价多肽，其中所述多肽接头序列包含甘氨酸
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丝氨酸(GS)接头或3C接头。9.根据权利要求1
‑
8中任一项所述的多价多肽，其包含：(a)(i)CD47 ECD，(ii)多肽接头，和(iii)CD45 scFv；(b)(i)SIRPαscFv，(ii)多肽接头；和(iii)CD45 scFv；或(c)(i)CD45 V
H
H，(ii)多肽接头，和(iii)SIRPαscFv。10.根据权利要求9所述的多价多肽，其在N末端至C末端方向上包含：(a)(i)CD47 ECD，(ii)GS接头，和(iii)CD45 scFv；或(b)(i)CD47 ECD，(ii)C3接头，和(iii)CD45 scFv。11.根据权利要求9所述的多价多肽，其在N末端至C末端方向上包含：(a)(i)SIRPαscFv，(ii)GS接头，和(iii)CD45 scFv；或(b)(i)SIRPαscFv，(ii)C3接头，和(iii)CD45 scFv。12.根据权利要求9所述的多价多肽，其在N末端至C末端方向上包含：(a)(i)CD45 V
H
H，(ii)GS接头，和(iii)SIRPαscFv；或(b)(i)CD45 V
H
H，(ii)C3接头，和(iii)SIRPαscFv。13.根据权利要求1
‑
12中任一项所述的多价多肽，其中所述多价多肽包含具有与选自SEQ ID NO:1
‑
6的氨基酸序列至少80％序列同一性的氨基酸序列。14.一种重组核酸分子，所述重组核酸分子包含编码根据权利要求1
‑
13中任一项所述的多价多肽的核苷酸序列。15.根据权利要求14所述的重组核酸分子，其中所述核苷酸序列编码具有与选自SEQ ID NO:1
‑
6的氨基酸序列至少80％序列同一性的氨基酸序列。16.一种重组细胞，所述重组细胞包含：(a)根据权利要求1
‑
13中任一项所述的多价多肽，和/或
(b)根据权利要求14
‑
15中任一项所述的重组核酸分子。17.根据权利要求16所述的重组细胞，其中所述重组细胞是吞噬性细胞。18.根据权利要求17所述的重组细胞，其中所述吞噬性细胞是树突细胞。19.一种用于在体外促进未成熟树突细胞(DC)成熟的方法，所述方法包括：(a)将未成熟DC暴露于抗原；以及(b)在根据权利要求1
‑
13中任一项所述的多价多肽存在下培养所述未成熟DC以诱导未成熟DC成熟为成熟DC。20.一种通过根据权利要求19所述的方法制备的成熟树突细胞。21.一种用于制造疫苗的方法，所述方法包括：(a)在体外将未成熟DC暴露于抗原以产生足够数量的抗原呈递未成熟DC；以及(b)在根据权利要求1
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13中任一项所述的多价多肽存在下促进所述抗原呈递未成熟DC的成熟以产生成熟的抗原呈递DC。22.一种通过根据权利要求21所述的方法制造的疫苗。23.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：小利兰，
类型：发明
国别省市：