法匹拉韦在抗家蚕中肠型脓病中的制药用途制造技术

法匹拉韦在抗家蚕中肠型脓病中的制药用途，属于分子生物学与病毒学领域，具体涉及广谱抗RNA病毒药物法匹拉韦(Favipiravir)在治疗家蚕中肠型脓病BmCPV中的制药用途。所述法匹拉韦溶解于DMSO中，浓度为17.5mg/mL。本发明专利技术通过法匹拉韦抑制BmCPV S1基因的表达，实现对家蚕中肠型脓病的治疗效果。并且参照本发明专利技术的用药量持续给药，不会对蚕产生负面影响。不会对蚕产生负面影响。不会对蚕产生负面影响。

【技术实现步骤摘要】
法匹拉韦在抗家蚕中肠型脓病中的制药用途


[0001]本专利技术属于分子生物学与病毒学领域，具体涉及广谱抗RNA病毒药物法匹拉韦(Favipiravir)在治疗家蚕中肠型脓病BmCPV中的制药用途。

技术介绍

[0002]家蚕细胞质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus，BmCPV)，能感染家蚕中肠细胞导致家蚕发生中肠型脓病引起养蚕廉收，对蚕业生产的危害严重，目前对该病害的防治仍局限于消毒预防。
[0003]家蚕细胞质型多角体病毒属于RNA病毒，由10段独立的dsRNA(S1～S10)组成，共编码6种结构(衣壳)蛋白(VP1、VP2、VP3、VP4、VP6、VP7)和3种非结构蛋白，能感染家蚕中肠细胞导致家蚕发生中肠型脓病。中肠型脓病俗称“干白肚”，主要通过食下传染。其症状为：食桑、行动不活泼，常静伏于蚕座，生长发育缓慢，群体开差悬殊，大蚕期病蚕胸部半透明呈“空头状”，伴有起缩、下痢，严重时排出的粪便有乳白色黏液。病程：一般1龄感染的至2～3龄发病；2龄感染的至3～4龄发病；3龄感染的至4～5龄发病；4龄感染的至5龄发病；5龄期中后期感染的基本可吐丝结茧，但部分为死笼茧。病势慢、病程长是该病的特点，故属慢性传染病。生产上大多在3、4龄感染，到5龄饷食后逐步大量发生。病变主要在中肠，撕破家蚕背部体壁可以看到中肠上有乳白色摺皱，严重时整个中肠呈乳白色。
[0004]BmCPV病毒侵入圆筒形细胞后在增殖、复制前期，无法观察到细胞的病理变化这一过程，但随着病毒的进一步复制循环，可清晰观察到受感染圆筒形组织细胞一系列病理变化如：围食膜脱落、细胞变形、核位置转移、细胞质出现空泡、细胞质中充满多角体、细胞崩溃、脱落等。
[0005]目前，蚕业生产上，没有针对家蚕病毒病的常规药物，家蚕病毒病是不治之症。

技术实现思路

[0006]解决的技术问题：本专利技术针对家蚕细胞质型多角体病毒，提供一种法匹拉韦在抗家蚕中肠型脓病的制药用途。
[0007]技术方案：法匹拉韦在制备治疗BmCPV感染家蚕药物中的应用。
[0008]法匹拉韦在制备预防BmCPV感染家蚕药物中的应用。
[0009]上述法匹拉韦溶解于DMSO中，浓度为17.5mg/mL。
[0010]法匹拉韦通过抑制BmCPV S1基因的表达治疗BmCPV感染的家蚕。
[0011]防治BmCPV感染家蚕药物，有效成分含有法匹拉韦。
[0012]有益效果：本专利技术通过法匹拉韦抑制BmCPV S1基因的表达，实现对家蚕中肠型脓病的治疗效果。并且参照本专利技术的用药量持续给药，不会对蚕产生负面影响。
附图说明
[0013]图1为喂药期间及不喂药后S1基因表量示意图，其中A为喂药期间S1基因表达量；B
为不喂药后S1基因表达量；结果显示，病毒感染后喂药期间，病毒的增殖被显著抑制；而停止喂药后，病毒的增殖不但增加，且有反弹现象。因此，推测病毒感染家蚕后需持续给药，方可抑制病毒的增殖。
[0014]图2为未感染病毒给药解毒酶基因检测示意图；结果显示，给药之后只有一种解毒酶基因CarE8v1的转录水平有所升高，其他两个解毒酶基因有所下降，但变化均不明显，表明药物对家蚕没有毒副作用。
[0015]图3为感染病毒未给药解毒酶基因检测示意图；结果显示，病毒感染家蚕后激活了家蚕的免疫系统，因此三种解毒酶基因的转录水平均明显上升。
[0016]图4为感染病毒给药解毒酶基因检测示意图；结果显示，给药之后，由于药物对病毒增殖的具有一定的抑制作用，导致家蚕免疫系统中的解毒酶基因相对转录水平有所降低(相对于图3来讲)。
[0017]图5为各实验组五龄六天蚕对比，其中1：感染病毒给药组；2：未感染病毒给药组；3：感染病毒组；4：空白对照组。结果显示：(1)药物对家蚕的生长发育没有任何影响；(2)给药之后，与未给药的病蚕相比，其生长发育受病毒感染的影响显著降低。
具体实施方式
[0018]实施例1
[0019]1.家蚕孵化及养殖
[0020]家蚕品种选择菁松
×
皓月杂交种，蚕卵于25℃，相对湿度85％孵化箱种孵化，待蚕卵转青后感光处理收蚁，之后正常桑叶育。
[0021]2.感染BmCPV病毒及添加抗病毒药物
[0022]待蚕儿到四龄起蚕分组饲养，将提纯的BmCPV病毒粒子稀释至1
×
106/mL，桑叶切成大小完全一样的方块浸泡在病毒溶液中，对照组用水浸泡，风干后每组给相同叶子。感染病毒12h后喂含抗病毒药物桑叶(药物用DMSO溶解稀释至2.5mg/mL，均匀涂抹至桑叶表面、晾干)喂含药物桑叶前及时除沙。(抗病毒药物喂四龄期间)
[0023]3.剖取中肠组织
[0024]在四龄第三天及五龄第三天剖取中肠组织。
[0025]4.组织提RNA及定量PCR分析
[0026]提取中肠中的总RNA，并反转录成cDNA。根据GenBank中BmCPV病毒的编码区序列设计S1基因引物，通过定量PCR技术检测基因表达量。
[0027]5.宏观数据收集与处理
[0028]养蚕过程中记录给药前后家蚕体重(即四龄起蚕重和五龄期蚕重)、各组茧层率、死亡率及蚕茧大小。
[0029]药物对各实验组的治疗效果：
[0030]表1本专利技术的药物对BmCPV病毒的治疗效果
[0031][0032]注：空白组
‑‑
未感染病毒也未添食药物；对照组
‑‑
感染病毒但未添食药物；实验组
‑‑
既感染病毒也添食药物；死亡率
‑‑
未到五龄末期死亡数/(总数
‑
剖取中肠数)
×
100％
[0033]尽管本专利技术的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本专利技术的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本专利技术并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.法匹拉韦在制备治疗BmCPV感染家蚕药物中的应用。2.法匹拉韦在制备预防BmCPV感染家蚕药物中的应用。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述法匹拉韦溶解于DMSO中，浓度为17.5mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：张轶岭，杨旭，徐翊杰，马明珍，沈中元，唐旭东，王强，
申请(专利权)人：江苏科技大学，
类型：发明
国别省市：