一种氨基糖苷类抗生素微生物限度检测方法技术

一种氨基糖苷类抗生素微生物限度检测方法，通过使用薄膜过滤法，优化调整供试液比例和处理方式，滤膜材质的选择、调整冲洗液，以及中和剂的选择等，有效消除了氨基糖苷类抗生素的抑菌性，保证了检测结果的准确性，进一步保证了在严苛的质量标准要求下氨基糖苷类抗生素微生物限度检查方法的科学性。同时本发明专利技术提供的检测方法可以满足微生物限度不超过20cfu/g的标准要求。20cfu/g的标准要求。

【技术实现步骤摘要】
一种氨基糖苷类抗生素微生物限度检测方法


[0001]本专利技术涉及医药
，尤其涉及一种氨基糖苷类抗生素微生物限度检测的方法。

技术介绍

[0002]医药产品的微生物污染是潜在的不安全因素之一，为保证临床应用和上市后患者用药的安全性，目前各国药品生产质量管理规范(Good Manufacture Practice，GMP)及药典不仅对无菌制剂的产品规定必须进行无菌检查，对生产过程中起始物料的微生物污染水平也有明确的控制要求。
[0003]如果受微生物污染的药品在通过各种给药途径进入人体后，由于体液等对药物的稀释，以及人体内环境给微生物生长提供了良好的营养条件，其中所污染的微生物会迅速复苏、繁殖、危及生命。
[0004]虽然药品在生产过程中会经过各种工艺步骤的处理来降低药品的微生物水平或者保证无菌药品的无菌性，而且强抑菌性药品会抑制微生物生长或甚至具有杀灭作用。但是很多原辅料在生产时处于非无菌状态，起始污染水平高，尤其是抗生素等强抑菌性产品一旦产生耐药菌污染将严重影响产品质量和患者安全，所以物料的微生物限度就应该控制在相对安全的合理的范围，才能保证药品的安全。那么一个准确的微生物限度检测方法就至关重要了。
[0005]同时，在对具有强抑菌活性的药品进行微生物限度检查时，应首先消除其抑菌活性，并通过实验验证抑菌活性去除的是否彻底，以保证检验结果的有效性。
[0006]妥布霉素是目前临床广泛使用的广谱和具有抗菌活性的氨基糖苷类抗菌药，对于妥布霉素进行有效的微生物限度检查是目前药品检验工作中的一个难题。而妥布霉素作为原料药，由于检测样品量大，使其抑菌性更强，相较于妥布霉素制剂类产品而言，其检验更是难上加难。
[0007]专利文献CN116004759A公开了一种以氯化钠
‑
蛋白胨为缓冲液，采用薄膜过滤法进行妥布霉素微生物限度检测的方法，具体包括：配制目标菌液和稀释液；取供试品，加入稀释液制备妥布霉素供试液；利用妥布霉素供试液以稀释液作为冲洗液，冲洗制备得到供试检查样品，以及再通过添加目标菌液制备得到的阳性对照样品；基于冲洗液制备得到阴性对照样品；取阳性对照样品、供试检查样品和阴性对照样品分别进行平板划线培养并分别检查菌落检出结果。

技术实现思路

[0008]申请人经研究发现，现有技术中妥布霉素对霉菌及酵母菌的抑制能力可以通过简单的处理后即可消除，而妥布霉素对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有较强的的抑制能力，无法通过简单处理后消除。
[0009]为解决上述技术问题，本专利技术实施例提供一种微生物限度检测方法包括，利用包
含2价金属盐的稀释液对氨基糖苷类抗生素供试品进行稀释预处理；
[0010]对所述稀释预处理后的样品进行菌数计数操作。
[0011]根据某些具体实施方式，所述2价金属盐为钙盐或镁盐中的至少一种。
[0012]根据某些具体实施方式，所述2价金属盐为2价金属氯盐。
[0013]根据某些具体实施方式，所述2价金属盐的质量百分浓度为0.5wt％～5wt％。
[0014]根据某些具体实施方式，所述2价金属盐选自氯化钙、六水氯化镁的一种或两种。
[0015]优选地，所述氯化钙的质量百分浓度为1wt％。
[0016]优选地，所述六水氯化镁质量百分浓度3.2wt％。
[0017]根据某些具体实施方式，所述稀释液中还包括质量百分浓度0.85wt％～0.95wt％的氯化钠。
[0018]根据某些具体实施方式，所述稀释液为水溶液。
[0019]根据某些具体实施方式，所述菌为需氧菌、霉菌及酵母菌中的至少一种。
[0020]根据某些具体实施方式，所述需氧菌为金黄色球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌或黑曲霉菌。
[0021]根据某些具体实施方式，所述霉菌及酵母菌为白色念珠菌和黑曲霉菌。
[0022]根据某些具体实施方式，所述稀释预处理还包括，对稀释后的供试品用过滤膜进行过滤。
[0023]根据某些具体实施方式，过滤后，对过滤膜用所述稀释液进行一次以上冲洗。
[0024]根据某些具体实施方式，所述过滤膜材质选自亲水尼龙材质、亲水聚醚砜材质的一种或两种。
[0025]根据某些具体实施方式，所述稀释预处理包括以下步骤：
[0026]将供试品与所述稀释液按质量体积比1/5～1/50混合制备供试液，具体的所述质量体积比为1/5、1/10、1/15、1/20、1/25、1/30、1/35、1/40、1/45或1/50等等；
[0027]取至少一体积份所述供试液加入50～200体积份所述稀释液进行稀释，具体的例如可以是50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200体积份。
[0028]根据某些具体实施方式，通过薄膜过滤法测定菌数的方法进行所述菌数计数操作。
[0029]根据某些具体实施方式，将过滤膜贴于培养基，平行制备平皿，然后通过薄膜过滤法测定菌数的方法进行所述菌数计数操作，根据某些具体实施方式，对于需氧菌，培养基为胰酪大豆胨琼脂培养基，对于霉菌及酵母菌，培养基为沙氏葡萄糖琼脂培养基。
[0030]根据某些具体实施方式，所述检测方法包括以下步骤：
[0031]供试液制备，包括将供试品与稀释液混合，所述稀释液包括中和剂，其中，所述中和剂包括含2价金属阳离子的溶液；
[0032]目标菌液制备，包括取试验菌株分别加入溶解液中混合，分别得到试验菌株对应的菌悬液；
[0033]需氧菌总数计数操作，包括取至少一份所述供试液加入所述稀释液，进行薄膜过滤，采用冲洗液对所述薄膜进行至少一次冲洗，在所述冲洗过程中加入所述目标菌液，取所述冲洗后的薄膜贴于培养基，平行制备平皿，采用薄膜过滤法测定薄膜菌数，其中，所述冲洗液为所述稀释液。
[0034]霉菌及酵母菌总数计数操作，包括取至少一份所述供试液加入所述目标菌液，混合后加入所述稀释液，进行薄膜过滤，采用冲洗液对所述薄膜进行至少一次冲洗得到冲洗后的薄膜，取所述冲洗后的薄膜贴于培养基，平行制备平皿，采用薄膜过滤法测定薄膜菌数，其中，所述冲洗液为所述稀释液。
[0035]根据某些具体实施方式，所述氨基糖苷类抗生素为妥布霉素。
[0036]申请人经研究推测，2价金属盐例如钙盐或镁盐可能可以与妥布霉素具有螯合作用，通过2价金属盐，特别是钙盐可对妥布霉素的对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌强抑制能得以有效消除，同时为了便于进行薄膜过滤，防止稀释液与氯化钙的溶液反应产生白色沉淀，同时保持各试验菌细胞渗透压的稳定，优选0.9wt％氯化钠溶液配制氯化钙溶液。薄膜过滤用滤膜采用亲水尼龙材质的滤膜，该材质滤膜有较好的滤膜强度和化学兼容性，易解吸附，对过滤强抑菌产品成分时吸附较少，适用于抑菌性产品的微生物检测。
[0037]与现有技术相比，本专利技术实施例的技术方案具有以下有益效果：
[0038]首本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种氨基糖苷类抗生素微生物限度检测方法，其特征在于，包括，利用包含2价金属盐的稀释液对氨基糖苷类抗生素供试品进行稀释预处理；对所述稀释预处理后的样品进行菌数计数操作。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述2价金属盐为钙盐或镁盐中的至少一种。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述2价金属盐为2价金属氯盐。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述2价金属盐的质量百分浓度为0.5wt％～5wt％。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述稀释液中还包括质量百分浓度0.85wt％～0.95wt％的氯化钠。6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述稀释液为水溶液。7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述菌为需氧菌、霉菌及酵母菌中的至少一种。8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述需氧菌为...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晔，张世龙，费菁菁，曹颖，任红锦，郭继亮，
申请(专利权)人：苏州欧康维视生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：