食源性土霉素残留快速半定量检测试纸条及试纸卡制造技术

本实用新型专利技术公开一种用于食源性土霉素快速半定量检测的试纸条和试纸卡。试纸条含有支撑板、样品区、金标结合物、检测区、对照区、反应膜、吸水区及保护膜。检测区包括由金标土霉素单克隆抗体及第二种属动物蛋白的混合物，检测用土霉素印制而成的３条隐性直线，或金标记检测用土霉素人工抗原与第二种属动物蛋白的混合物，土霉素单克隆抗体印制而成的３条隐性直线，对照区是由抗第二种属动物蛋白ＩｇＧ抗体印制而成的１条隐性直线。将不带有保护膜的试纸芯外加特制的透明塑料卡包被，制成检测用试纸卡。本试纸条及试纸卡适用于食品安全检测部门、研究部门、蜂场、个人用于检测蜂蜜、牛奶、肉组织、饲料、血清样品中的土霉素残留，具有快速、特异性强、方便等特点。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种新型检测试纸条及试纸卡，特别是一种用于食品中土霉素 (Oxytetracyline， 0TC)残留检测的试纸条及试纸卡。
技术介绍
土霉素是四环素族抗生素中的一种。常用其盐酸盐，为淡黄色的结晶或无定形粉 末，无臭，在日光下颜色变暗，在碱性溶液中晚破坏失效，在乙醇中微溶，在NaOH及稀HC1中 易溶。 土霉素对大多数革兰氏阳性和阴性球菌与杆菌，对立克次体、支原体、衣原体螺旋 体和某些原虫都有抑制作用，其抗菌机制主要为与菌核蛋白体30S亚基在A位特异性结合， 阻止aa-tRNA在该位置上的联结，从而阻止肽链延伸和细菌蛋白合成，其次还可引起细胞 膜通透性改变，使胞内的核苷酸和其它重要成分外漏，从而抑制DNA复制，但是目前细菌对 其耐药性较重，耐药率较高，而且OTC与四环素族其它的抗生素间也存在着一定的交叉耐 药性。 OTC在体内的残留较重。 一般来说，0TC易吸收，但不完全，2h-4h达到血药峰浓 度。土霉素在不同动物体内达到峰浓度的时间不同，如在牛中需要4-8小时达到峰浓度，吸 收后广泛分布于肝、肾等组织和体液中，易渗入胸水、腹水、胎畜循环及乳汁中，也可以在肝 脏胆汁中浓縮，排入肠内，部分再被吸收，形成肚肠循环。主要以原形药从尿中排出。猪内 40mg/kg/天，连服5天，休药4天可食组织中残留量为0. 04mg/kg。蛋鸡服7日，蛋清浓度 迅速达到高峰，但是蛋黄浓度持续时间长，休药13天后，蛋清和蛋黄中均可检测到残留量。 绵羊肌肉注射后14天，组织中残留量才能低于0. lmg/kg，奶牛肌肉注射5mg/kg后4天，牛 奶中的残留量在370 ii g/kg-10 ii g/kg间。 由于OTC是一种广谱的抗菌药，加之其价格低廉，因此作为动物生产中的饲料添 加剂用于控制动物性疾病，促进动物的生长发育，被广泛应用于畜牧饲养场、蜂场、鸡场等。 但是由于其滥用，已经引起了食源性OTC的残留，对人体的健康造成了较大的危害，因此国 家食品安全部门、农业部门对动物性食品中，包括肉、蛋奶、蜂蜜等食品中残留限量均进行 了严格的限制，明确了在肉制品中OTC的检测量不得超过0. lmg/kg，，在蜂蜜中不得检出。 目前测定OTC的方法主要是酶联免疫法(ELISA)和高效液相色谱法(HPLC) ， ELISA 法检测用的试剂目前主要依赖进口 ，检测成本很高，HPLC法要求有高端的液相色谱仪和专 门的技术人员，样品的通量较小，需要样品的前处理时间长，因此用HPLC法进行检测成本 高，时间长，通量小，不适合于生产单位检测。虽然也有利用OTC检测用试纸条的方法进行 残留检测的相关报道，但是，其不能定量，假阳性和假阴性率较高，准确率得不到保证，应用 效果不理想。
技术实现思路
1、本设计的目的研制出简便、快速、灵敏的土霉素半定量检测试纸条和试纸卡。 结合附图对本设计进行说明 附图说明图1代表土霉素半定量快速检测试纸侧面观；图2代表土霉素半定量快速检测试 纸正面观；图3代表土霉素半定量快速检测试纸卡侧面观；图4代表土霉素半定量快速检 测试纸卡正面观。 附图1，2，3中标号1为进样区，2为胶体金标记OTC单克隆抗体与第二种属动物 蛋白的混合物，或为检测用0TC抗原与与第二种属动物蛋白的混合物，3为延长部分；4为3 条由检测用OTC抗原印制而成的隐性线作为检测线，或为3条由OTC单克隆抗体印制而成 的检测线，5为第二种属动物抗鼠IgG抗体印制而成的一条隐性线作为对照线，6为吸水区， 7为支撑板，8为固着在支撑板上的反应膜，9为保护膜。它们依下列次序粘着于反应膜上， 进样区，金标记0TC单克隆抗体与第二种属动物蛋白的混合物，3条由检测用OTC抗原印制 而成的隐性线，l条第二种属动物蛋白抗鼠IgG抗体印制而成的隐性线，吸水区。附图中10 为检测试纸卡上盖；11为检测试纸卡底座；附图4中标号12为检测试纸卡加样孔。 胶体金标记部分为玻璃纤维或醋酸纤维，其上标记的物质为第二种属动物蛋白与 土霉素单克隆抗体，或第二种属动物蛋白与检测用土霉素人工抗原的混合物，混合物混合 的方法为第二种属动物蛋白与土霉素单克隆抗体或检测用人工抗原的混合比例，以标准 的土霉素样品为标准，当阴性样品检测时，对照线和检测线刚好出现肉眼可见的红色为准。 检测反应部分上包被有土霉素检测用抗原3条作为检测线，或土霉素单克隆抗体3条作为 检测线，同时还包被有第二种属动物蛋白IgG抗体1条作为对照线。当胶体金标记部分为 第二种属动物蛋白和土霉素单抗混合物时，在胶体金标记部分和检测反应部分之间加长。 其中检测用抗原是指土霉素与牛血清白蛋白或卵白蛋白结合的偶联物，在用胶体 金标记抗原时，此混合物作为标记的对象，或在胶体金标记抗体时，此混合物作为检测线上 的包被物质，第二种属动物蛋白指非抗体来源属动物蛋白。 2、本设计所涉及的各部分的处理及功能 支撑板起支撑作用，其上粘合有反应膜，其下有防水涂层，其作用主要是起固定 反应膜等，可由硬质塑料、硬纸板、薄树脂等韧性材料制成。 进样区主要是由吸水能力较强的滤纸、或玻璃纤维纸制成。将上述材料与中性 (pH7. 0)的磷酸缓冲液中浸泡10分钟以上，高温烘干，或防尘风干。 胶体金标记部分的制备包括胶体金溶胶的制备，胶体金标记土霉素抗体或土霉 素人工抗原，胶体金标记部分处理。 胶体金溶胶的制备将氯金酸配制成1%的溶液(A)，取A溶液lmL，再配成0.01X 的溶液(B)，加热至沸腾，再向B中加入1X的柠檬酸钠水溶液5mL，继续加热至出现透明 的橙红色为止，获得直径约为15nm的胶体金溶胶(C)。用O. lmol/L的K2C(U周pH值至 8. 5-9. 5，4t:保存备用。 胶体金标记土霉素抗体将土霉素单抗及第二种属动物蛋白分别用PBS稀释 到4mg/Kg，每100mL C溶液中加入3mL 土霉素单抗，1. 5mL第二种属动物蛋白，振荡5分 钟，加入20%的PEG 10000至终浓度为0. 05%，4°C 8000-10000g离心20分钟，去上清， 用PBS(O. 01mol/L， pH 7. 0-7. 5)复溶，以8000-10000g离心，15分钟，除去上清，将沉淀用 PBS(O. 01mol/L， pH 7. 0_7. 5)稀释2000倍，产物即为金标土霉素素抗体(D)。 胶体金标记土霉素抗原将土霉素检测用抗原及第二种属动物蛋白分别用PBS (0. 01mol/L， pH 7. 0-8. 4)稀释到4mg/Kg，每lOOmL C溶液中加入3mL 土霉素检 测用抗原，1. 5mL第二种属动物蛋白，振荡5分钟，加入20 %的PEG 10000至终浓度为 0. 05 % ， 4°C 8000-10000g离心20分钟，去上清，用PBS (0. 01mol/L， pH 7. 0-7. 5)复溶，以 8000-10000g离心，15分钟，除去上清，将沉淀用PBS(O. 01mol/L， pH 7. 0-7. 5)稀释2000倍，产物即为金标土霉素检测用抗原(E)。 胶体金标记部分处理将获得的D或E倒入大玻璃皿中，将精制玻璃纤维棉浸于其 中2分钟，取出后自然干燥。 用0.8%戊二醛溶液浸泡反应膜，半小时以上，取出烘干，上边包被3条不同本文档来自技高网...

【技术保护点】
食源性土霉素残留快速半定量检测试纸含有支撑板、进样区、反应区及吸水区，进样区、反应区及吸水区按顺序粘贴于支撑板上，各区间有２－５ｍｍ的间隔，其特征在于：反应区包括反应膜、胶体金标记部分、检测用抗原及第二种属动物蛋白，胶体金标记部分标记的物质土霉素的单克隆抗体，或土霉素检测用抗原，检测反应部分为包被有第二种属动物蛋白及土霉素用抗原混合物印制成的３条线作为检测线，或包被有第二种属动物蛋白及土霉素单克隆抗体混合物印制成的３条线作为检测线，同时包被有抗鼠ＩｇＧ条带作为对照线。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐书法，侯丽薇，赵静，国占宝，曹坦，
申请(专利权)人：中国农业科学院蜜蜂研究所，徐书法，
类型：实用新型
国别省市：11[中国|北京]