细胞快速化学重编程技术制造技术

本发明专利技术提供了一种细胞快速化学重编程技术。通过本发明专利技术的化学重编程促进剂和培养方法，使得化学重编程的用时被明显缩短；重编程效率提高10倍以上；本发明专利技术的方法可以应用于更广泛的遗传背景和更多类型的小鼠细胞。广泛的遗传背景和更多类型的小鼠细胞。

【技术实现步骤摘要】
细胞快速化学重编程技术


[0001]本专利技术涉及诱导多能干细胞领域。具体地，涉及一种细胞快速化学重编程技术。

技术介绍

[0002]小分子可用于促进体细胞重编程为诱导多能干细胞(iPSC)。2013年，完全使用小分子实现将体细胞重编程为诱导多能干细胞(iPSC)的技术最早被邓宏魁课题组报道，使用到的小分子名称为VPA、CHIR99021、RepSox、Forskolin、Tranylcypromine和DZNep。这一技术被称为化学重编程。最早的化学重编程技术需要约60天实现这个过程(Hou P.P.,et al.,Pluripotent Stem Cells Induced from Mouse Somatic Cells by Small
‑
Molecule Compounds.Science,2013.341(6146):p.651
‑
54.)。之后，对这一技术改进的主要进步分别有三个报道。其一，2015年，邓宏魁课题组将AM580、EPZ004777、SGC0946和5
‑
aza
‑
dc这4个小分子加入到这一重编程体系中，将化学重编程过程缩短到约40天(Zhao Y.,et al.,A XEN
‑
like State Bridges Somatic Cells to Pluripotency during Chemical Reprogramming.Cell,2015.163(7):p.1678
‑
91.)；其二，2018年，裴端卿课题组独立建立了一个化学重编程体系，同样需要约40天实现这一过程，相较邓宏魁课题组2015年的报道效率更高(Cao S.,et al.,Chromatin Accessibility Dynamics during Chemical Induction of Pluripotency.Cell Stem Cell,2018.22(4):p.529
‑
42e5.)；其三，2018年，邓宏魁课题组进一步优化2015年的化学重编程体系，并将时间缩短到约20天，但是形成诱导多能干细胞效率偏低(Zhao T.,et al.,Single
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Cell RNA
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Seq Reveals Dynamic Early Embryonic
‑
like Programs during Chemical Reprogramming.Cell Stem Cell,2018.23(1):p.31
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+.)。在2018年之后，本领域未见更快速高效技术的报道。
[0003]现有技术中，需要较长时间才能完成整个化学重编程过程。效率较高的技术需要约40天完成。20天左右可以完成化学重编程的技术效率偏低，例如每50000个初始细胞仅能形成约20
‑
30个诱导多能干细胞克隆。
[0004]因此，本领域需要提供一种高效、快速的细胞化学重编程技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种细胞快速化学重编程技术。
[0006]在本专利技术的第一方面，提供了一种化学重编程促进剂，所述化学重编程促进剂选自下组A：
[0007](A1)SR11237；
[0008](A2)CD3254；
[0009](A3)CCT129202；
[0010](A4)R406；
[0011](A5)DMH1；
[0012](A6)BML
‑
277；
[0013](A7)AZD9291 mesylate；
[0014](A8)TSA；
[0015](A9)SGC
‑
CBP30
[0016](A10)Citarinostat；
[0017](A11)TMP269；
[0018](A12)WS6；
[0019](A13)(A1)～(A12)的任意组合。
[0020]在另一优选例中，所述化学重编程促进剂为选自下组的化合物：
[0021](1)SR11237，CD3254；
[0022](2)CCT129202，R406；
[0023](3)DMH1，BML
‑
277，AZD9291 mesylate，TSA，SGC
‑
CBP30，Citarinostat；
[0024](4)DMH1，BML
‑
277，AZD9291 mesylate，TSA，TMP269；和
[0025](5)WS6。
[0026]在另一优选例中，在重编程培养基中，所述化学重编程促进剂具有选自下组的浓度：
[0027]SR11237：0.05
‑
0.5μM；
[0028]CD3254：0.05
‑
0.5μM；
[0029]CCT129202：0.2
‑
2μM；
[0030]R406：0.5
‑
2μM；
[0031]DMH1：0.1
‑
5μM；
[0032]BML
‑
277：5
‑
20μM；
[0033]AZD9291 mesylate：1
‑
5μM；
[0034]TSA：5
‑
20nM；
[0035]SGC
‑
CBP30：0.5
‑
5μM；
[0036]Citarinostat：1
‑
3μM；
[0037]TMP269：1
‑
10μM；
[0038]WS6：0.1
‑
2μM。
[0039]在本专利技术的第二方面，提供了一种化学重编程促进剂的用途，用于制备使成纤维细胞向诱导多能干细胞转化的试剂或试剂盒；其中，所述的化学重编程促进剂选自下组：
[0040](A1)SR11237；
[0041](A2)CD3254；
[0042](A3)CCT129202；
[0043](A4)R406；
[0044](A5)DMH1；
[0045](A6)BML
‑
277；
[0046](A7)AZD9291 mesylate；
[0047](A8)TSA；
[0048](A9)SGC
‑
CBP30
[0049](A10)Citarinostat；
[0050](A11)TMP269；
[0051](A12)WS6；
[0052](A13)(A1)～(A12)的任意组合。
[0053]在另一优选例中，所述成纤维细胞为哺乳动物成纤维细胞；较佳地为小本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种化学重编程促进剂，其特征在于，所述化学重编程促进剂选自下组A：(A1)SR11237；(A2)CD3254；(A3)CCT129202；(A4)R406；(A5)DMH1；(A6)BML
‑
277；(A7)AZD9291 mesylate；(A8)TSA；(A9)SGC
‑
CBP30(A10)Citarinostat；(A11)TMP269；(A12)WS6；(A13)(A1)～(A12)的任意组合。2.如权利要求1所述的化学重编程促进剂，其特征在于，所述化学重编程促进剂为选自下组的化合物：(1)SR11237，CD3254；(2)CCT129202，R406；(3)DMH1，BML
‑
277，AZD9291 mesylate，TSA，SGC
‑
CBP30，Citarinostat；(4)DMH1，BML
‑
277，AZD9291 mesylate，TSA，TMP269；或(5)WS6。3.一种化学重编程促进剂的用途，其特征在于，用于制备使成纤维细胞向诱导多能干细胞转化的试剂或试剂盒；其中，所述的化学重编程促进剂选自下组：(A1)SR11237；(A2)CD3254；(A3)CCT129202；(A4)R406；(A5)DMH1；(A6)BML
‑
277；(A7)AZD9291 mesylate；(A8)TSA；(A9)SGC
‑
CBP30(A10)Citarinostat；(A11)TMP269；(A12)WS6；(A13)(A1)～(A12)的任意组合。4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述成纤维细胞为哺乳动物成纤维细胞；较佳地为小鼠、大鼠、兔子、猴、人的成纤维细胞。5.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述成纤维细胞为小鼠成纤维细胞，较佳地
为小鼠背部成纤维细胞(MDF)、小鼠肺成纤维细胞(MLF)、小鼠肝脏成...

【专利技术属性】
技术研发人员：祝赛勇，陈希，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：