抗体及干细胞在治疗胰腺癌中的用途制造技术

本发明专利技术涉及抗体及干细胞在治疗胰腺癌中的用途。本发明专利技术提供以EGFR作为免疫原制备并获得了特异性的单克隆抗体E

【技术实现步骤摘要】
抗体及干细胞在治疗胰腺癌中的用途


[0001]本申请涉及生物领域，具体的涉及一种抗体及干细胞在治疗胰腺癌中的用途。

技术介绍

[0002]胰腺癌（cancer of pancreas,pancreatic cancer）是消化道常见的恶性肿瘤之一，多发生于胰头部。腹痛及无痛性黄疸为胰头癌的常见症状。糖尿病患者长期大量吸烟，高脂肪高动物蛋白饮食者，发病率相对增高，本病多发于中老年人，男性患者远较绝经前的妇女多，绝经后妇女发病率与男性相仿。发病原因尚不清楚，发现些环境因素与胰腺癌的发生有关。已定的首要危险因素为吸烟，糖尿病胆石病饮酒(包括啤酒)以及慢性胰腺炎等进食高脂肪高蛋白饮食和精制的面粉食品，胃切除术也是发生胰腺癌的危险因素，其死亡率极高。
[0003]目前胰腺癌的化疗药物首选吉西他滨（GEM），与5
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氟尿嘧啶（5
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FU）标准疗法相比，其在提高胰腺癌患者生活质量和延长生存期方面均占优势，中位生存期为5
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6个月，而1年生存率低于20%。放射治疗可以帮助改善临床症状，控制局部复发，较单纯化疗可提高10%
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15%的生存期。但是目前治疗胰腺癌的三大方式都未能取得令人满意的效果。随着肿瘤靶向治疗的不断发展，分子靶向药物在治疗胰腺癌方面提供了新的可能。EGFR属于ErbB家族的酪氨酸酶激酶跨膜受体。EGFR是一种转导细胞外信号进入细胞内的细胞表面分子，在细胞的生长、分裂、修复和功能分化中起重要作用。当EGFR与配体结合后，发生二聚体化，激发胞质区中的酪氨酸残基磷酸化，从而活化了受体中酪氨酸激酶，使酪氨酸激酶作用靶蛋白的结合位点充分暴露，多条下游信号传导途径被激活，最终导致细胞增殖、入侵和转移。目前EGFR抑制剂主要包括：EGFR单克隆抗体、酪氨酸激酶抑制剂以及表皮生长因子受体2（Her
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2）抑制剂3大类。
[0004]EGFR单克隆抗体西妥昔单抗是一种EGFR单克隆抗体，它竞争性结合EGFR的胞外部分，减少受体和配体的连接，抑制细胞磷酸化，导致EGFR介导的信号传导通路被阻断，从而促进肿瘤细胞的凋亡。2009年中国抗癌协会公布了C225在头颈部鳞状细胞癌（SCCHN）、转移性结肠直肠癌（mCRC）、非小细胞肺癌（NSCLC）和乳腺癌（BC）等实体肿瘤治疗中表现出了很好的效果。目前C225已被批准用于mCRC的治疗。过一项C225和GEM联合放射治疗34例EGFR阳性局部晚期胰腺癌患者的前瞻性临床试验。C225第1天初始剂量为400mg/m2，随后每周维持剂量为250mg/（m2
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周）；GEM维持剂量为300mg/（m2
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周）；放疗剂量为50.4Gy/周；研究时间从2008年11月至2012年1月，其中10例患者（29.4%）由于在预处理阶段出现转移性疾病而被剔除试验，3例患者拒绝放、化疗，21例患者（61.7%）完成联合治疗方案。结果显示：24%的患者部分缓解（partialresponse，PR），52%的患者表现出疾病稳定（stabledisease，SD），1年生存率和2年生存率分别为66%和28%，中位生存期（MST）为15.3个月，其中3例患者（14.3%）出现1级皮疹。C225和GEM联合放射治疗晚期胰腺癌耐受性良好，改善了胰腺癌患者的中位生存时间，提高了患者的生活质量，有望在临床上广泛的应用。但是目前可供选择的单克隆抗体的种类还有待进一步的开发和拓展。
[0005]干细胞定向分化移植在晚期胰腺肿瘤的应用已取得一定成果。NK4为肝细胞生长因子受体拮抗剂,常被作为候选靶向治疗。将带有NK4腺病毒转染的BMSCs植入大鼠胰腺癌模型体内,不仅对胰腺癌细胞有明显趋向性,而且强烈抑制胰腺癌细胞的增殖和迁移。这些研究结果表明,BMSCs可以作为胰腺癌靶向基因治疗的载体。有学者还发现与健康对照组相比胰腺癌患者高水平表达IL
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6、IL
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8、IL
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10、TNF
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α、IL
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23浓度。在胰腺癌患者,IL
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6、IL
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8、IL
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10水平,和IL
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23表达与外周血骨髓间充质细胞和胚胎样干细胞水平密切相关,因此BMSCs移植可能改变胰腺癌临床症状。此外,研究发现,转染肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体的BMSCs也显著抑制胰腺癌细胞的生长。采用局部放疗联合自体干细胞移植支持下的大剂量化疗治疗手术无法切除的胰腺癌,取得了较好的疗效。术后应用干细胞移植进行治疗,将给患者带来希望。
[0006]但是目前，干细胞治疗胰腺癌的药物还不够多，提供的可选择形式也不够丰富，有待进一步的开发应用。

技术实现思路

[0007]本专利技术一方面，针对胰腺癌的治疗靶点EGFR，开发了特异性的单克隆抗体E
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4E5。
[0008]所述抗体具有较好的特异性和亲和力，其通过测序，鉴定得到该单抗的轻链可变区序列如SEQ ID NO：1所示，重链可变区序列如SEQ ID NO：2所示。
[0009]如本文所讨论，认为抗体或免疫球蛋白分子的氨基酸序列的变化涵盖于本专利技术中，条件是氨基酸序列的变化保持至少75％，更优选至少80％、90％、95％和最优选99％。包括其间的某些百分比，例如75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％序列同一性。尤其，包括保守性氨基酸置换。保守性置换是在与侧链相关的氨基酸家族中发生的置换。遗传编码的氨基酸通常分为以下家族：(1)酸性氨基酸为天冬氨酸、谷氨酸；(2)碱性氨基酸为赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性氨基酸为丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸，和(4)不带电的极性氨基酸为甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。亲水性氨基酸包括：精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、组氨酸、赖氨酸、丝氨酸和苏氨酸。疏水性氨基酸包括丙氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。其它氨基酸家族包括(i)为脂肪族羟基家族的丝氨酸和苏氨酸；(ii)为含有酰胺的家族的天冬酰胺和谷氨酰胺；(iii)为脂肪族的丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；和(iv)为芳香族的苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。例如，有理由期望用异亮氨酸或缬氨酸单独置换亮氨酸，用谷氨酸单独置换天冬氨酸，用丝氨酸单独置换苏氨酸，或用结构相关的氨基酸对氨基酸进行相似置换对所得分子的结合或性质无较大影响，特别是如果置换不牵涉骨架位点内的氨基酸时。通过检测多肽衍生物的特异性活性可易于确定氨基酸变化是否产生功能性肽。本文对检测进行了详细描述。本领域的普通技术人员可易于制备抗体或免疫球蛋白分子的片段或类似物。片段或类似物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性靶向EGFR的单克隆抗体，其特征在于，其重链可变区序列如SEQ ID NO:1所示；其轻链可变区序列如SEQ ID NO:2所示。2.编码如权利要求1所述的单克隆抗体的核苷酸。3.一种表达载体，包括编码如权利要求2所述单克隆抗体的核苷酸。4.转化或转染如权利要求3所述的表达载体的宿主细胞。5.如权利要求1所述的单克隆抗体在制备抑制胰腺癌细胞增殖的产品中的应用。6.骨髓间...

【专利技术属性】
技术研发人员：何群，张晚秋，
申请(专利权)人：北京诺赛国际医学研究院，
类型：发明
国别省市：