一种干细胞外泌体的制备方法以及在治疗男性勃起功能障碍中的应用技术

本发明专利技术涉及一种干细胞外泌体的制备方法以及在治疗男性勃起功能障碍中的应用。本发明专利技术提供了一种药物组合物及其在制备治疗男性勃起功能障碍药物中的应用，包括干细胞外泌体和抗TrkA抗体，所述抗TrkA抗体能够与目标抗原高特异性结合，所述干细胞外泌体为脐带间充质干细胞外泌体。所述药物组合物能够促进海绵体平滑肌细胞增殖，诱导和维持一氧化氮合酶高水平表达，还能够调节VEGF表达水平，维持阴茎充血功能，从而启动和维持正常勃起功能，有助于男性勃起功能障碍的恢复。性勃起功能障碍的恢复。

【技术实现步骤摘要】
一种干细胞外泌体的制备方法以及在治疗男性勃起功能障碍中的应用

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[0001]本专利技术属于药物研究领域，具体提供了一种干细胞外泌体的制备方法以及在治疗男性勃起功能障碍中的应用。

技术介绍
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[0002]勃起功能障碍(erectile dysfunction，ED)是一种常见的男科疾病，指男性无能达到性生活所需要的充分勃起或维持勃起时间过短的病症，各个年龄段均可发生，以中老年为主，且年龄越大发病率越高。随着对于男性生理特征的研究不断深入，逐渐认识到阴茎勃起活动的关键是海绵体内平滑肌的有序松弛，在下丘脑室旁核和内侧视前核的控制下，血液流入海绵体，海绵体充满血液并压缩导静脉，减少静脉血液流出；在神经系统方面，神经信号通过副交感神经系统经海绵体神经到达阴茎，海绵状神经末梢释放的一氧化氮启动勃起过程，而来自内皮细胞的一氧化氮则起到维持勃起的作用。一氧化氮在进入平滑肌时会刺激环磷酸鸟苷(环GMP)产生，蛋白激酶G被环状GMP激活，其打开钾通道同时关闭钙通道，低细胞内钙导致海绵体内平滑肌组织松弛，导致动脉流量增加，同时静脉闭塞活动，从而启动和维持勃起；当环状GMP被阴茎磷酸二酯酶降解时，下层平滑肌再次收缩，过程逆转。上述任何过程引起的病理性病变都可能导致勃起功能障碍，包括但不限于心理因素(如自尊心丧失、焦虑和抑郁)、神经系统疾病(如多发性硬化)、激素原因(如性腺功能减退、甲状腺功能减退)、外伤(如骨盆骨折、脊髓损伤)、高脂血症、中风、睡眠呼吸暂停、慢性阻塞性肺病、多发性硬化、尿路感染和病变、医源性损伤(例如经尿道前列腺切除术)和各种药物影响(抗抑郁药、抗高血压药、抗精神病药、阿片类药物和消遣性药物)等等。
[0003]除保持良好的生活习惯(如戒烟、戒酒、加强体育锻炼)和适当进行心理辅导之外，研究人员开发出了多种治疗勃起功能障碍的药物和方法，包括：(1)L
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精氨酸，一种氨基酸补充剂，可作为产生一氧化氮合酶的必需底物，补充L
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精氨酸已被证明可以增加一氧化氮合酶水平，进而改善勃起功能；(2)磷酸二酯酶5抑制剂(PDE
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5抑制剂)，如西地那非和他达拉非，是目前治疗勃起功能障碍的一线药物，它们通过抑制磷酸二酯酶来减少环状GMP的降解，从而增加海绵体平滑肌和海绵体动脉血流的松弛而开启勃起过程，但是使用PDE
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5抑制剂可能产生头痛、消化不良、鼻塞和轻微的视觉变化等不良反应；(3)外部真空装置，该装置的外筒放置在阴茎上以形成气密密封，患者使用小型手动(或电池供电)真空泵在阴茎周围产生负压，使阴茎体充满血液，并在阴茎根部周围放置弹性带来维持这种人工勃起；(4)前列腺素E1，是人体最有效的天然平滑肌松弛剂，它通过增加海绵体循环AMP水平而启动勃起，具有较少的全身副作用和良好的疗效等特点，但是海绵体内注射会导致疼痛、阴茎异常勃起、注射部位出血或瘀伤等副作用；(5)手术治疗，包括阴茎血运重建手术、动脉球囊血管成形术、静脉结扎手等，虽然可以取得较好的治疗效果，但是临床实践中许多男性患者不希望进行该类手术，该疗法接受性较差。
[0004]干细胞是具有多向分化能力的可自我更新的细胞，除自我更新能力和多向分化能
in a Diabetic Rat Model by Delivering Proangiogenic MicroRNA，Sexual Medicine,2019,7(2):241
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250)利用USC外泌体增强大鼠内皮细胞标志物的表达，减少胶原蛋白沉积，改善了神经源性勃起反应。然而，干细胞外泌体的治疗效果仍有待改善，以便进一步提高对勃起功能障碍的治疗效果。
[0007]神经生长因子(NGF)及酪氨酸激酶A(TrkA)受体和p75神经营养因子受体信号通路在人神经系统传导机制中起关键作用，与疼痛、过敏、炎症反应等多项生理过程相关。有报道称，该信号通路在勃起功能障碍中也发挥重要调节作用，在胚胎晚期和出生后阶段，交感神经元的发育和存活需要神经生长因子(NGF)及其受体TrkA，而交感神经具有拮抗阴茎勃起的作用，因此研究人员(Lin G,Li H,Zhang X,et al.Novel therapeutic approach for neurogenic erectile dysfunction:effect of neurotrophic tyrosine kinase receptor type 1monoclonal antibody.Eur Urol 2015，67:716
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26)使用一种特异性TrkA单克隆抗体(TrkA
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mAb)可通过阻断外周交感神经元的再生来治疗海绵状神经损伤(CNI)引起的ED，将TrkA
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mAb局部递送至CNI大鼠的主要骨盆神经节或海绵体可显着抑制海绵体中酪氨酸羟化酶阳性交感神经纤维，并增强背神经中nNOS阳性纤维，从而诱导勃起功能的恢复。
[0008]有鉴于现有技术中对于勃起功能障碍新型治疗手段的开发需要，本专利技术提供了一种药物组合物，包括来自干细胞的外泌体和靶向TrkA的单克隆抗体，既能够利用干细胞外泌体所携带的多种细胞因子和免疫调节因子，促进海绵体内细胞增殖和血管修复，还能够利用TrkA单克隆抗体的神经系统调节作用，从多个层面上促进勃起功能恢复，发挥协同作用。

技术实现思路

[0009]为解决上述技术问题，本专利技术中提供了一种治疗男性勃起功能障碍的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括干细胞外泌体和抗TrkA抗体，所述抗TrkA抗体的重链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、SEQ ID NO:2所示的HCDR2、SEQ ID NO:3所示的HCDR3，以及轻链可变区包括如SEQ ID NO:4所示的LCDR1、SEQ ID NO:5所示的LCDR2、SEQ ID NO:6所示的LCDR3。
[0010]本专利技术中使用干细胞外泌体与抗TrkA抗体相配合治疗男性勃起功能障碍，既能够促进海绵体内细胞增殖，防止细胞凋亡，促进血管再生保证海绵体充血过程顺畅，还能够调节神经信号传导，维持一氧化碳合酶的正常水平，从多角度协作作为，促进勃起功能恢复。
[0011]进一步的，所述抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。
[0012]进一步的，所述抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。
[0013]本专利技术中所述的单克隆抗体，为专利技术人自行开发研制，能够与目标抗原高特异性结合，有效调节NGF/TrkA/p75信号通路的生理信号传导过程。
[0014]进一步的，所述干细胞外泌体来自脂肪干细胞、间充质干细胞、胚胎干细胞、神经干细胞、内皮祖细胞中的一种或几种；优选的，所述干细胞外泌体来自脐带间充质干细胞。
[0015]现有技术中已经报道多种干细胞外泌体对勃起功能障碍具有治疗作用，可在不同程度上促进一氧化氮合酶分泌，诱导海绵体内皮细胞和平滑肌细胞增殖，促进勃起功能修复。本专利技术中选用脐本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗TrkA抗体，其特征在于，所述抗TrkA抗体的重链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、SEQ ID NO:2所示的HCDR2、SEQ ID NO:3所示的HCDR3，以及轻链可变区包括如SEQ ID NO:4所示的LCDR1、SEQ ID NO:5所示的LCDR2、SEQ ID NO:6所示的LCDR3。2.一种治疗男性勃起功能障碍的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括干细胞外泌体和抗TrkA抗体，所述抗TrkA抗体的重链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、SEQ ID NO:2所示的HCDR2、SEQ ID NO:3所示的HCDR3，以及轻链可变区包括如SEQ ID NO:4所示的LCDR1、SEQ ID NO:5所示的LCDR2、SEQ ID NO:6所示的LCDR3；所述干细胞外泌体为脐带间充质干细胞外泌体。3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，所述抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。5.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述干细胞外泌体的制备方法包括：取洁净脐带组织，使用冰预冷的无菌磷酸盐缓冲液洗涤3次，剔除动静脉血管，用...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晚秋，赵耀文，
申请(专利权)人：北京诺赛国际医学研究院，
类型：发明
国别省市：