一种抗人4-1BB单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，公开了一种抗人4

【技术实现步骤摘要】
一种抗人4
‑
1BB单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种抗人4
‑
1BB单克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]4‑
1BB又名CD137，属于肿瘤坏死因子(TNF)受体家族的成员，由肿瘤坏死因子受体超家族成员9(TNFRSF9)基因编码，在活化后表达于多种免疫细胞上，包括T细胞、树突状细胞和自然杀伤细胞。通过4
‑
1BB信号传导可诱导细胞因子诱导，防止活化诱导的细胞死亡，并上调细胞毒性T细胞活性；4
‑
1BB也可能减少调节性T细胞对肿瘤的浸润。
[0003]现有的4
‑
1BB抗体还未有上市的药物，目前多处于临床及临床前研究阶段，在结合抗原活性、激活T细胞下游信号等方面还有许多的不足。

技术实现思路

[0004]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种抗人4
‑
1BB单克隆抗体，能够特异性的与4
‑
1BB分子结合并表现对免疫细胞的激活特性，可通过免疫调节作用对多种癌症的治疗具有应用潜力。
[0005]本专利技术的第一个目的是提供了一种抗人4
‑
1BB单克隆抗体，
[0006](1)、所述抗人4
‑
1BB单克隆抗体的重链可变区的三个CDR区：CDR1(GDSITSGY)、CDR2(KSYSGST)和CDR3(ARSLLWLGAMDY)的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1、2和3所示；且
[0007](2)、所述抗人4
‑
1BB单克隆抗体的轻链可变区的三个CDR区：CDR1(QDVGTA)、CDR2(WAS)和CDR3(QQYSSYPYT)的氨基酸序列分别如SEQ ID No.4、5和6所示。
[0008]进一步地，所述的抗人4
‑
1BB单克隆抗体具有：
[0009](3)、其重链具有如SEQ ID No.7所示的氨基酸序列(QMQLQESGPSLVKPSQTLSLTCSVTGDSITSGYWTWIRKFPGNRLEYMGFKSYSGSTYYNPSLKSRISITRDTSKNQYYLQLNSVTTEDTATYYCARSLLWLGAMDYWGQGTSVTVSS)，且
[0010](4)、其轻链具有如SEQ ID No.8所示的氨基酸序列(MADIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVGTAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYFCQQYSSYPYTFGGGTKLEMKR)。
[0011]本专利技术的第二个目的是提供一种编码所述的抗人4
‑
1BB单克隆抗体的核酸分子。
[0012]本专利技术的第三个目的是提供一种表达载体，含有所述的核酸分子。
[0013]本专利技术的第四个目的是提供一种重组细胞，含有所述的核酸分子，或含有所述的表达载体。
[0014]进一步地，所述的重组细胞的宿主细胞为CHO细胞、HEK293细胞、酵母细胞或植物细胞。
[0015]宿主细胞用于抗体的瞬时表达和稳定细胞系的构建，实现所述抗体的科研和产业化生产。
[0016]本专利技术的第五个目的是提供所述的单克隆抗体在制备4
‑
1BB介导的疾病的治疗和
预防药物中的应用。
[0017]进一步地，所述的疾病为肿瘤。
[0018]进一步地，所述的肿瘤为肺癌、胃癌、肠癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、膀胱癌。
[0019]本专利技术的第六个目的是提供一种药物组合物，包含：
[0020](1)所述的抗人4
‑
1BB单克隆抗体；和，
[0021](2)药学上可接受的载体。
[0022]借由上述方案，本专利技术至少具有以下优点：
[0023]本专利技术中利用噬菌体展示技术，相较于杂交瘤技术，噬菌体展示技术可以呈现免疫动物的整个抗体库，省去细胞融合步骤，避免了因杂交瘤不稳定而反复亚克隆的繁琐程序，极大的提高库容量，从杂交瘤的几千个克隆升至109个。本专利技术筛选得到的抗人4
‑
1BB单克隆抗体在体外细胞水平验证中，明显增加细胞因子IFN
‑
γ的产生及提高TIL中CD8+细胞比例，具有较好的激活特性。
[0024]上述说明仅是本专利技术技术方案和部分结果的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本专利技术的较佳实施例并配合详细附图说明如后。
附图说明
[0025]图1、重组4
‑
1BB
‑
huIgG1 Fc融合蛋白的SDS
‑
PAGE检测图谱；
[0026]图2、重组4
‑
1BB
‑
huIgG1 Fc融合蛋白的结合活性；
[0027]图3、重组4
‑
1BB
‑
huIgG1 Fc融合蛋白免疫小鼠效价检测；
[0028]图4、抗体轻、重链可变区基因的扩增；
[0029]图5、抗体scFv基因的扩增；
[0030]图6、ELISA检测4
‑
1BB抗体亲和力；
[0031]图7、4
‑
1BB抗体对PBMC刺激效果中IFN
‑
γ分泌检测；
[0032]图8、4
‑
1BB抗体在TIL细胞培养中对CD8+T细胞的增殖作用。
具体实施方式
[0033]本专利技术公开了抗人4
‑
1BB单克隆抗体及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。
[0034]术语：
[0035]除非另有定义，本文使用的所有科技术语具有本领域普通技术人员所理解的相同含义。关于本领域的定义及术语，专业人员具体可参考Current Protocols in Molecular Biology(Ausubel)。
[0036]“抗体”是指由能特异结合抗原的一种或多种多肽构成的蛋白质。抗体的一种形式构成了抗体的基本结构单元。这种形式是四聚物，它由两对完全相同的抗体链构成，每一对都有一个轻链和一个重链。在每对抗体链中，轻链和重链的可变区联合在一起共同负责结
合抗原，而恒定区则负责抗体的效应器功能。
[0037]抗体重链或轻链的“可变区”是该链的N端成熟区域。目前已知的抗体类型包括κ和λ轻链，以及α，γ(IgG1，IgG2，IgG3，IgG4)，δ，ε和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人4
‑
1BB单克隆抗体，其特征在于，(1)、所述抗人4
‑
1BB单克隆抗体的重链可变区的三个CDR区：CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1、2和3所示；且(2)、所述抗人4
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1BB单克隆抗体的轻链可变区的三个CDR区：CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID No.4、5和6所示。2.根据权利要求1所述的抗人4
‑
1BB单克隆抗体，其特征在于，所述的抗人4
‑
1BB单克隆抗体具有：(3)、其重链具有如SEQ ID No.7所示的氨基酸序列，且(4)、其轻链具有如SEQ ID No.8所示的氨基酸序列。3.一种编码权利要求1或2所述的单克隆...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雅容，李海豹，
申请(专利权)人：苏州沙砾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：