基于核酸适配体的异源二聚RTK受体DNA激动剂的构建方法及应用技术

本发明专利技术公开了基于核酸适配体的异源二聚RTK受体DNA激动剂的构建方法及应用。所述异源二聚RTK受体DNA激动剂包括FGFR1核酸适配体序列或EGFR适配体序列、连接序列；还包括c

【技术实现步骤摘要】
基于核酸适配体的异源二聚RTK受体DNA激动剂的构建方法及应用


[0001]本专利技术属于生物医学
，具体涉及基于核酸适配体的异源二聚RTK受体DNA激动剂的构建方法及应用。

技术介绍

[0002]随着化学与生命科学之间学科交叉的不断深入，基于化学的工具来分析生物学问题的研究越来越多地涉足生命科学研究的前沿领域。其中核酸分子是化学与生命科学之间一个重要的桥梁。功能核酸是指除了具备传统核酸分子的遗传信息存储功能之外，还具有特异性识别以及高效催化等其他特殊功能的核酸分子，主要包括aptamers(核酸适配体)，DNAzymes(脱氧核酶)。它们一般通过体外筛选获得，可以特异性地识别目标分子并行使相应功能，同时具备良好的生物相容性、序列设计性和结构稳定性，因此被广泛用作人工分子识别单元，应用于化学生物传感等领域。随着生命分析化学及生物医学的迅速发展，诸如核酸适配体等功能核酸等对于研究新型细胞受体激动剂具有重要意义。
[0003]核酸适配体作为功能核酸，由单链DNA或RNA组成，对其靶标具有高度特异性和亲和力，是一种的新型识别配体。一般情况下，核酸适配体通过指数富集的配体系统进化技术(Systematic Evolution ofLigands by Exponential Enrichment,SELEX)进行筛选，靶标范围包含小分子，生物大分子，细菌，干细胞和癌细胞等。核酸适配体又被称为“化学家的抗体”，在许多方面，其结合目标物的能力可以与抗体媲美，大部分的核酸适配体与目标物结合复合物的解离常数Kd在nM级别，而大部分抗体的解离常数在1
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10nM之间。此外，由于核酸适配体通过化学方法合成，因此可以通过进行化学修饰以实现不同的实验目的，与抗体相比极具性价比。
[0004]细胞膜表面受体能够识别、结合对应配体，并生成复合物，进而启动一系列生理调控过程。受体酪氨酸激酶(RTKs)是细胞受体中一类具有内源性蛋白酪氨酸激酶活性的单次跨膜受体，参与细胞间通讯同时控制广泛的复杂生物学功能，包括细胞生长，运动，分化和新陈代谢。c
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Met是属于Met家族的受体酪氨酸激酶，表达于各种细胞表面，其配体是肝细胞生长因子(HGF)。HGF与c
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Met的结合会导致c
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Met以同源二聚的形式激活，启动一系列细胞内信号，如Akt和Erk的激活，进而调控细胞增殖，迁移以及分化等行为。FGFR1参与发育、分化、细胞存活、迁移、血管生成和致癌，其配体是成纤维细胞生长因子(FGF)。当FGF与FGFR1胞外段结合后，受体细胞的FGFR发生同源二聚，然后使受体靶蛋白发生反式磷酸化，激活下游信号。
[0005]目前，RTK激动剂的开发主要通过同源二聚的原理构建。比如人工c
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Met激动剂的开发，即开发人工HGF类似物。相关技术使用细胞膜表面受体的非蛋白配体
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二聚的大环肽激活信号通路。二聚的大环肽通过特异性的促进两个c
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Met受体靠拢二聚以促进酪氨酸残基的反式磷酸化(自磷酸化)，激活下游细胞信号如Akt和Erk，最终促进细胞表型变化。相关技术有报道基于寡核苷酸模拟的HGF类似物，基于核酸适配体构建了c
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Met的同源二聚DNA
激动剂实现了c
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Met的自磷酸化激活，重现了HGF诱导的细胞行为，包括细胞迁移和细胞增殖，还开发了FGF寡核苷酸类似物，同样基于核酸适配体构建了FGFR1的同源二聚DNA激动剂模拟FGF激活了FGFR1。然而RTK异源二聚的受体激动剂则鲜有报道。
[0006]异源二聚是RTK受体间常存在的现象，RTK受体之间往往通过异源二聚的形式交叉激活信号通路。例如，在造血细胞中，ErbB
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3/ErbB
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2异二聚体受体的激活触发PI3激酶依赖性板状伪足的形成和扩散。RTK受体异源二聚的程度取决于受体和配体的浓度，不具备特异性。在ErbB家族中，EGF促进EGFR的同源二聚，但是事实上EGF对EGFR/ErbB2异二聚体的亲和力更高。RTK受体之间的异源二聚会改变自身的信号强度和持续时间，增加下游信号的多样性，进而增加细胞对外界变化和刺激的反应能力。目前，相关技术开发了FGFR1c/KLB异二聚体复合物的人工肽激动剂。然而，该二聚肽制备过程较为复杂，且价格昂贵。此外，大部分的异源二聚受体缺乏对应的激动剂。因此，开发RTK异源二聚受体激动剂在生物医学等领域具有重要意义。

技术实现思路

[0007]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出基于核酸适配体的异源二聚RTK受体DNA激动剂。
[0008]本专利技术还提出上述激动剂的应用。
[0009]根据本专利技术的一个方面，提出了一种基于核酸适配体的异源二聚RTK受体DNA激动剂，所述异源二聚RTK受体DNA激动剂具有以下(1)至(3)中任一种结构：
[0010](1)包括DNA链1，所述DNA链1从5
’
到3
’
依次包括c
‑
Met核酸适配体序列和FGFR1核酸适配体序列；
[0011](2)包括DNA链2和DNA链3；
[0012]所述DNA链2从5'到3'依次包括FGFR1核酸适配体序列、连接序列单链1；
[0013]所述DNA链3从5'到3'依次包括c
‑
Met核酸适配体序列、连接单链序列2；
[0014](3)包括DNA链4和DNA链5；
[0015]所述DNA链4从5
’
到3
’
依次包括连接序列单链1、FGFR1核酸适配体序列；
[0016]所述DNA链5从5
’
到3
’
依次包括连接序列单链2、c
‑
Met核酸适配体序列；
[0017](4)包括DNA链3和DNA链6；
[0018]所述DNA链6从5'到3'依次包括EGFR适配体序列、连接单链序列1；
[0019](5)包括DNA链5和DNA链6；
[0020]其中，所述FGFR1核酸适配体序列如SEQ ID NO.1所示；
[0021]所述c
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Met核酸适配体序列如SEQ ID NO.2所示；
[0022]所述EGFR适配体序列如SEQ ID NO.11所示；
[0023]所述连接序列单链1与连接序列单链2的序列反向互补。
[0024]在本专利技术的一些实施方式中，所述连接单链序列1为如SEQ ID NO.3所示序列的部分序列或全长序列；
[0025]在本专利技术的一些实施方式中，所述连接单链序列2为如SEQ ID NO.4所示序列的部分序列或全长序列。
[0026]在本专利技术的一些实施方式中，所述连接单链序列1序列长20～25nt；所述连接单链
序列2序列长20～2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于核酸适配体的异源二聚RTK受体DNA激动剂，其特征在于，所述异源二聚RTK受体DNA激动剂具有以下(1)至(5)中任一种结构：(1)包括DNA链1，所述DNA链1从5'到3'依次包括c
‑
Met核酸适配体序列和FGFR1核酸适配体序列；(2)包括DNA链2和DNA链3；所述DNA链2从5'到3'依次包括FGFR1核酸适配体序列、连接序列单链1；所述DNA链3从5'到3'依次包括c
‑
Met核酸适配体序列、连接序列单链2；(3)包括DNA链4和DNA链5；所述DNA链4从5'到3'依次包括连接序列单链1、FGFR1核酸适配体序列；所述DNA链5从5'到3'依次包括连接序列单链2、c
‑
Met核酸适配体序列；(4)包括DNA链3和DNA链6；所述DNA链6从5'到3'依次包括EGFR适配体序列、连接序列单链1；(5)包括DNA链5和DNA链6；其中，所述FGFR1核酸适配体序列如SEQ ID NO.1所示；所述c
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Met核酸适配体序列如SEQ ID NO.2所示；所述EGFR适配体序列如SEQ ID NO.11所示；所述连接序列单链1与连接序列单链2的序列反向互补。2.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢智勇，刘坤，李浩，丛雨林，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：